复方苦参洗剂的安全性研究

黄凤娇，吴森，王平慧，周素文

(湖北省药品监督检验研究院、湖北省药品质量检测与控制工程技术研究中心，武汉 430054)

复方苦参洗剂由苦参、蛇床子、地肤子、白藓皮等组成，具有燥湿、防腐、杀虫、止痒功效，用于肛门骚痒症。苦参具有清热燥湿、杀虫、利尿功效，临床常用于湿疹、皮肤瘙痒、滴虫性阴道炎等皮肤瘙痒性疾病。苦参制剂在瘙痒症、接触性皮炎、湿疹、特应性皮炎、银屑病等皮肤疾病中应用广泛[1-3]。蛇床子具有抗敏止痒的功效[4]。复方苦参洗剂为外用制剂，笔者研究其对皮肤的毒理反应，以评价该制剂的安全性。

1 材料与方法

1.1实验动物 日本大耳白兔20只，雌雄兼用，体质量2.0～3.0 kg，普通级；豚鼠40只，雌雄各半，体质量300～400 g，普通级。以上动物均购于武汉生物制品研究所有限责任公司，实验动物生产许可证号：SCXK(鄂)2008-0003，实验动物使用许可证：SYXK(鄂)2014-0009。动物给予颗粒饲料喂养，自由饮用净化水，环境温度20～25 ℃，湿度40%～70%，光照为12 h明暗交替。

1.2药品与试剂 拟临床使用复方苦参洗剂(含生药材量为0.37 g·mL-1，批号：150101)及浓缩10倍的复方苦参洗剂(含生药材量为3.7 g·mL-1)，由湖北中医药大学药学院提供。2，4-二硝基氯苯(2，4-dinitrochlorobenzene，DNCB，天津市光复精细化工研究所，批号：20100617)。

1.3方法

1.3.1家兔皮肤给药急性毒性实验 12只家兔，按随机区组法分为两组，给药组(为浓缩10倍的样品，含生药材量为3.7 g·mL-1)和阴性对照组(纯化水)，每组6只，雌雄各半。于给药前24 h将动物背部去毛，去毛范围180 cm2，将供试品或纯化水4 mL涂于去毛区域，然后用一层称样纸覆盖，用无刺激性胶布或绷带固定，涂药4 h后用温水清洗给药部位，同法再涂药1次，末次涂药24 h后用温水清洗给药部位。每天观察1次，观察给药后动物的全身反应情况，包括动物的外观、行为、分泌物、排泄物、震颤、腹泻、嗜睡和昏迷等症状以及涂敷部位有无红斑和水肿等局部毒性反应，观察至给药后7 d[5-8]。

1.3.2家兔直肠刺激实验 选择兔肛门区域无异常、排便正常的8只家兔，按完全随机化法分为两组，给药组和阴性对照组(纯化水)，每组4只，雌雄各半。将受试物或纯化水2 mL在距肛门4 cm处注入家兔直肠，连续给药8 d，每日饲喂之前给药。每次给药前检查家兔肛门区域和肛门括约肌，给药后临床表现(如疼痛症状)和粪便(如血、黏液)，给药后动物的死亡和尸检情况，局部组织有无充血、水肿等现象。家兔处死后，分离直肠，纵向剖开观察黏膜变化，并进行直肠黏膜的病理组织学检查[9]。

1.3.3豚鼠皮肤过敏实验 豚鼠按随机区组法随机分为3组，即复方苦参洗剂组，阴性对照组(纯化水)和DNCB组(阳性对照组)，供试品组20只，其余各组10只，雌雄各半。致敏：实验前24 h将动物背部左侧去毛，去毛范围为3 cm×3 cm。 将浓缩10倍的供试品0.5 mL涂布在豚鼠背部左侧3 cm×3 cm的区域，然后用一层称样纸覆盖，再用无刺激性胶布固定，持续6 h后用温水洗去残留物，第7天和第14天各重复1次，共3次。阴性对照组动物背部左侧脱毛处涂纯化水，DNCB组动物背部左侧脱毛处涂敷1%DNCB溶液。激发：在末次涂药诱导2周时，用临床浓度的供试品0.5 mL涂布在豚鼠背部右侧3 cm×3cm的区域，然后用一层称样纸覆盖，再用无刺激性胶布固定，6 h后用水洗去受试物，DNCB组(涂抹0.1%DNCB)与阴性对照组用同法激发接触并观察。在致敏后1和24 h及激发后24和48 h观察皮肤红斑、水肿和其他异常反应，按标准评分评价致敏程度，同时应密切观察动物是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身性变态反应，测定开始及结束时动物体质量[10-13]。

2 结果

2.1家兔皮肤给药急性毒性实验 给药当天及给药后不同的时间与阴性对照组比较，动物无全身反应情况，动物的外观、行为正常，分泌物、排泄物无异常，未出现震颤、腹泻、嗜睡和昏迷等症状，涂敷部位无红斑和水肿等局部毒性反应，结果见图1；实验开始及实验结束时，称取动物体质量，结果给药组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，体质量结果见表1。

图1 家兔皮肤急性毒性实验局部反应结果

表1 两组家兔给药前后体质量比较

组别给药前给药后阴性对照组2.4±0.12.4±0.1给药组2.4±0.22.4±0.2

2.2家兔直肠刺激实验 各组动物给药后未见疼痛表现，排便正常，未见粪便带血等症状。实验结束时处死家兔，观察肛门局部组织及直肠黏膜，未见有充血、水肿及糜烂等现象。组织病理学检查结果表明，给药组和阴性对照组未见明显异常情况。病理图片见图2。

图2 2组家兔病理组织学检查

Fig.2Histopathologicexaminationintwogroupsofrabbits

2.3豚鼠皮肤过敏实验 在各次致敏后1和24 h，给药组、阴性对照组及DNCB组未见任何异常情况。复方苦参洗剂组豚鼠体质量增长正常，与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，结果见表2，激发后24和48 h观察，复方苦参洗剂组及阴性对照组未见皮肤红斑、水肿等异常反应，皮肤变态反应分值为0，变态反应发生率为0%。而DNCB组激发给药后24和48 h观察，有明显的皮肤红斑和水肿现象，豚鼠皮肤过敏图片见图3，给药后24和48 h皮肤变态反应分值分别为4.6，2.6，变态反应发生率为100.0%。

表2 3组豚鼠给药前后体质量比较

组 别豚鼠/只给药前给药后阴性对照组10348±16475±17DNCB组10355±13468±14复方苦参洗剂组20342±13479±15

图3 豚鼠皮肤变态反应

Fig.3Allergyreactionoftheskinofguineapigs

3 讨论

肛门瘙痒症在古代已有记载，中医学认为，本病多因外感风、湿、热、虫等外邪，内因禀性不耐，情绪忧郁，以至湿热内生下注，阻于肛门周围皮肤所致[14]。 清代高锦庭《疡科心得集》载有苦参汤，由苦参、蛇床子、白芷、金银花、菊花、黄柏、地肤子、大菖蒲组成，具有祛风除湿，杀虫止痒之效果[15]。复方苦参洗剂以此方为基础，方中重用苦参清热燥湿、祛风杀虫；蛇床子温肾助阳、祛风杀虫；地肤子清热利湿、祛风止痒；白藓皮燥湿止痒、解毒杀虫。诸药合用，共奏清热燥湿、杀虫止痒之功效。

本研究对复方苦参洗剂局部用药可能引起的毒性、刺激性及变态反应进行了研究，结果表明复方苦参洗剂是一种安全性较高的外用制剂。