芪苓散粗多糖对四氯化碳引起急性肝损伤雏鸡血清中ALT和AST的影响

2020-05-30林文海福建省永春县乡镇畜牧兽医站福建永春362600

福建畜牧兽医 2020年2期

林文海福建省永春县乡镇畜牧兽医站福建永春 362600

肝病是一个全球高发又会引起死亡的疾病，严重威胁着社会发展，一直是广大医学界一个重要研究课题[1]。肝脏是动物体代谢和解毒的主要器官，它可以把多种毒物、药物分解成小分子物质以便进一步吸收、排泄，从而减少毒物、药物对动物体的破坏。许多原因都会引起肝损伤，现在医学界主要研究化学性、酒精性、病毒性和免疫性等因素引起的肝损伤[2]。在肝脏发生病理改变后，动物体内多个系统也会因此受到影响，并且内源性小分子代谢物转归也会发生变化[3]。我国畜禽急性肝损伤性情况持续增多，但目前又没有切实有效的治疗方法，严重制约畜禽业的可持续发展[4]。重点研究急性肝损伤发病机理和探讨一些比较有实效的治疗方法，对慢性肝病防治有十分显著的作用[5]。由于复杂性的肝脏功能和多样性的肝损害因素，造成没有一个试验模型可以系统、准确地反映特定肝损伤的本质。另外，已有的急性肝损伤试验模型操作繁琐、稳定性不高、计量方法不同，因此有待进一步完善，以便进一步研究肝损伤机理[6]。本试验选择雏鸡为试验动物，旨在建立药物性和化学性急性肝损伤试验模型，为研究肝损伤机理和保肝药物选择提供参考基础数据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试验材料与试剂芪苓散粗多糖粉末；甲醛、四氯化碳和市售普通食用花生油；丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒。

1.1.2 主要仪器 DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱；TGL-16B高速台式离心机；VIS-7220可见光分光光度计；XD-811L半自动生化分析仪。

1.1.3 试验动物 1日龄三黄鸡雏鸡若干，购自永春某鸡场。

1.2 方法

1.2.1 低剂量组和高剂量组芪苓散粗多糖制备（1）低剂量组(浓度125mg/L)：精密称取芪苓散粗多糖12.5mg，溶于100mL超纯水中，充分混匀，贴上“低剂量组”标签，置低温下保存、待用。（2）高剂量组(浓度500mg/L)：精密称取芪苓散粗多糖50mg，溶于100mL超纯水中，充分混匀，贴上“高剂量组”标签，置低温下保存、待用。

1.2.2 四氯化碳-花生油混合溶剂配制把四氯化碳（浓度≥99.5%）和市售普通花生油根据体积比1:1均匀混合。

1.2.3 试验动物分组与处理将32羽1日龄健康三黄雏鸡平均分为空白对照组、四氯化碳模型组、芪苓散粗多糖低剂量组和芪苓散粗多糖高剂量组(以下分别简称空白组、模型组、低剂量组、高剂量组)。空白组和模型组不饲喂多糖，低剂量组、高剂量组分别灌喂125mg/L、500 mg/L芪苓散粗多糖。除空白组外，其他三组在喂芪苓散粗多糖2周后的第1 d、第4 d和第7 d灌喂四氯化碳-花生油混合溶剂(按12mL/kg)。各组进行隔离饲养，试验期2周。最后一次灌喂四氯化碳-花生油溶液24 h后，各组试验动物心脏采血致死。

1.2.4 血清的制备雏鸡心脏采血，5 000 r/min离心5min，将血清分装在eppendorf管中，置-20℃保存，待测。

1.2.5 样品的测定丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶使用连续监测的方法进行测定，测定方法根据试剂盒说明书要求进行。

1.3 数据统计处理所有数据用统计软件SPSS 13.0进行LSD方差分析和差异显著性检验，数据均以X±SD表示。

2 结果

芪苓散粗多糖对急性肝损伤的雏鸡血清ALT和AST活性影响情况见表1。对比各组数据可以发现：模型组与空白组比较，模型组的酶指标水平极显著升高（P＜0.01）。多糖组与模型组比较，可见多糖组明显降低CCl4肝损伤血清ALT与AST水平。高剂量多糖组与低剂量多糖组比较，可见高剂量多糖组的效果更明显。

表1 芪苓散粗多糖对急性肝损伤雏鸡血清ALT、AST活性的影响（n=8）

3 讨论

3.1 CCl4引起雏鸡肝损伤的机理肝脏会把进入体内的药物进行氧化、还原、聚合、羟化以及去甲基化等，因此，肝脏是机体内器官中最容易被药物所攻击的脏器[7]。

如今医学界普遍认为CCl4对肝脏中毒的主要机制是自由基的形成及其引发的链式过氧化反应。经肝微粒体细胞色素P450依赖性混合功能氧化酶的代谢作用，四氯化碳在体内生成三氯甲基自由基和三氯甲基过氧自由基及一系列氧活性物。这些产物不仅可与细胞内多种大分子成分发生不可逆的共价结合而导致肝损伤，也会与胞内脂质、蛋白、核脂质、核蛋白和DNA等多种细胞内大分子进行不可逆共价结合而导致细胞死亡，特别是自由基还会破坏核酸分子的完整性和构型，损伤DNA[8-9]。并且CCl4还会抑制钙泵的活性，使Ca2+内流增加，从而导致细胞功能障碍，胞浆Ca2+浓度升高，胞浆内转氨酶渗入血液，肝微粒体和线粒体功能丧失，肝细胞代谢紊乱，最终死亡[8]。明确肝损伤作用机制可以为治疗肝脏疾病提供理论基础，为寻找和开发新的保肝护肝药物提供有效途径[10]。

3.2 芪苓散粗多糖对CCl4致动物肝损伤后ALT和AST的影响据资料表明，在动物肝脏中，转氨酶是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶，其中以ALT和AST最为重要[11]。ALT主要分布于肝细胞浆的可溶性部分，AST主要分布于肝细胞浆的可溶性部分及线粒体中。CCl4的破坏性主要是在肝细胞代谢过程中所产生的自由基会破坏肝细胞膜结构，使得肝细胞膜通透性变高，导致细胞内一些酶类进入血液中，从而使血液中的一些酶类指数升高[12]。只要有1%肝细胞发生坏死，血清中转氨酶活力就会增加1倍，因此ALT、AST等血清转氨酶含量是肝细胞损伤情况的重要指标，通过测定血清或血浆中ALT、AST等的活性变化就能够知道肝脏受到损害的情况[13]。有研究认为ALT是肝损伤的一个很灵敏指标，ALT只能反映肝细胞的完整性，ALT增高往往说明肝实质细胞受到损伤[14]。

正常情况下，AST主要存在于组织细胞中，血清中可检测到的含量极少[15-16]。但当肝脏细胞受到损伤后，AST会进入血液中，从而血液中酶活力明显增加，可以发现血清中AST指数偏高。因为AST在血清中的含量能够反映肝脏和心脏等内脏器官受损害情况，所以，在临床中测定血清中该酶含量有利于疾病的诊断和预后的观察。