乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与HBV-DNA、ALT的相关性研究

刘洋　巩宇宁　杨国香　李媛

【摘要】 目的 探讨乙型肝炎（乙肝）病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）、谷丙转氨酶（ALT）的相关性。方法 选择47例急性乙肝患者作为急性乙肝组， 同期39例慢性乙肝活动期患者作为慢性乙肝组， 同期28例健康体检者作为对照组， 比较三组核心抗原特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞及相关因子（Core18-27、Env335-343、Pol 575-583）、HBV-DNA、ALT、谷草转氨酶（AST）、谷氨酰基转移酶（GGT）、总胆红素（TBIL）水平， 分析乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子与HBV-DNA、ALT的相关性。结果 急性乙肝组Core18-27、Env335-343、Pol 575-583水平分别为（1.24±0.51）%、（0.09±0.01）%、（0.09±0.02）%， 高于对照组的（0.09±0.02）%、（0.06±0.02）%、（0.07±0.02）%和慢性乙肝组的（0.05±0.01）%、（0.04±0.01）%、（0.03±0.01）%， 且对照组均高于慢性乙肝组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。急性乙肝组HBV-DNA、ALT、AST 、GGT及TBIL水平分别为（21.59±4.32）×103 copies/ml、（85.35±5.49）U/L、（120.59±12.19）U/L、（125.98±13.42）U/L、（40.39±1.32）μmol/L， 均高于慢性乙肝组的（13.21±3.29）×103 copies/ml、（62.14±5.05）U/L、（87.56±6.87）U/L、（102.12±10.06）U/L、（25.49±1.21）μmol/L和对照组的0、（32.21±3.25）U/L、（30.29±3.41）U/L、（33.49±3.09）U/L、（12.59±0.14）μmol/L， 且慢性乙肝组高于对照组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。Core18-27、Env335-343和Pol 575-583与HBV-DNA、AST 、ALT、GGT及TBIL水平均呈正相关（P<0.05）。结论 乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与HBV-DNA、ALT存在相关性， 加强其表达水平测定反映疾病严重程度， 有助于指导临床治疗。

【关键词】 核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞;乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸;谷丙转氨酶

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.11.015

研究表明[1]， 在急性自限性乙肝患者中， 非特异性免疫反应与特异性免疫反应对于疾病的控制具有重要的作用， 肝脏的损伤亦是免疫反应直接引起， 而病毒并未造成肝细胞损伤。肝细胞中乙肝病毒的清除更多依赖于乙肝病毒抗原表面特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞， 但是其在乙肝病毒中的表达及与HBV-DNA、ALT存在相关性研究较少[2]。为此， 本研究探讨乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与HBV-DNA、ALT之间的相关性， 报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2017年6月～2019年10月本院收治的47例急性乙肝患者作为急性乙肝组， 男25例，

女22例;年龄20～56岁， 平均年龄（35.39±6.88）岁。选择同期收治的39例慢性乙肝活动期患者作为慢性乙肝组， 男21例， 女18例;年龄23～58岁， 平均年龄（36.11±7.30）岁。选择同期28例健康体检者作为对照组， 男15例， 女13例;年龄22～59岁， 平均年龄（36.09±7.64）岁。三组一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 ①核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子水平测定。标本采集：急性乙肝组、慢性乙肝组入院后次日取外周静脉血5 ml， 对照组健康体检当天取外周静脉血5 ml。采用流式细胞仪测定核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子水平。②外周血清HBV-DNA水平测定。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测仪测定三组外周血清HBV-DNA水平， 试剂由达安基因诊断中心提供， 严格按试剂说明书操作。③肝功能水平测定。取上述分离的血清标本， 采用全自动生化分析仪测定三组肝功能（ALT、AST、GGT及TBIL等指标）。

1. 3 观察指标 比较三组核心抗原特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞及相关因子（Core18-27、Env335-343、Pol 575-583）、HBV-DNA、ALT、AST 、GGT、TBIL水平， 分析乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子与HBV-DNA、ALT的相关性。

1. 4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验;采用Pearson相关性分析软件对乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子与HBV-DNA、ALT进行相关性分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 三组核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子比较 急性乙肝组Core18-27、Env335-343、Pol 575-583水平分別为（1.24±0.51）%、（0.09±0.01）%、（0.09±0.02）%， 高于对照组的（0.09±0.02）%、（0.06±0.02）%、（0.07±0.02）%和慢性乙肝组的（0.05±0.01）%、（0.04±0.01）%、（0.03±0.01）%， 且对照组均高于慢性乙肝组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2. 2 三组HBV-DNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平比较 急性乙肝组HBV-DNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平分别为（21.59±4.32）×103 copies/ml、（85.35±5.49）U/L、（120.59±12.19）U/L、（125.98±13.42）U/L、（40.39±1.32）μmol/L， 均高于慢性乙肝组的（13.21±3.29）×103 copies/ml、（62.14±5.05）U/L、（87.56±6.87）U/L、（102.12±10.06）U/L、（25.49±1.21）μmol/L和對照组的0、（32.21±3.25）U/L、（30.29±3.41）U/L、（33.49±3.09）U/L、（12.59±0.14）μmol/L， 且慢性乙肝组高于对照组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2. 3 乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子与HBV-DNA、ALT的相关性分析Core18-27、Env335-343和Pol575-583与HBV-DNA、AST、ALT、GGT及TBIL水平均呈正相关（P<0.05）。见表3。

3 讨论

本研究结果显示， 急性乙肝组Core18-27、Env335-343、Pol575-583水平均高于对照组和慢性乙肝组， 且对照组均高于慢性乙肝组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。说明乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子在病毒清除及肝损伤中呈高表达， 能直接参与疾病的发生、发展。分析原因， 急性自限性肝炎、肝内自然杀伤细胞（NK细胞）、自然杀伤T细胞（NKT）， 在分泌细胞因子、感染细胞的溶细胞作用、活化肝内免疫细胞、细胞因子中发挥了重要作用[3， 4]。但是， 靶细胞内仍存在病毒复制， 能激活足够数量特异性细胞毒T淋巴细胞， 并能破坏靶肝细胞， 释放病毒抗原， 从而能增强抗病毒免疫， 最终完全清除病毒[5， 6]。慢性乙肝病毒感染者由于感染年限相对较长， 具有免疫能力的患者机体伴有免疫紊乱， 多表现为弱乙肝病毒特异性T细胞免疫反应， 导致肝内免疫损伤强烈， 难以有效的清除病毒， 导致外周血乙肝病毒特异性细胞毒T淋巴细胞比率相对较低或检测不到[7]。

本研究中， 急性乙肝组HBV-DNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平均高于慢性乙肝组和对照组， 慢性乙肝组高于对照组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。说明在急性、慢性肝炎患者中常伴有 HBV-DNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平异常， 能反映患者的疾病严重程度。为了进一步分析乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与HBV-DNA、ALT的关系， 本研究中对其进行相关性分析， 结果表明：Core18-27、Env335-343和Pol575-583与HBV-DNA、AST 、ALT、GGT及TBIL水平均呈正相关（P<0.05）。因此， 乙肝病毒急性/慢性感染患者加强核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子测定能反映患者疾病严重程度， 有助于指导临床治疗。

综上所述， 乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子在病毒清除及肝损伤中发挥作用， 且与HBV-DNA、ALT存在相关性， 加强其表达水平测定反映疾病严重程度， 有助于指导临床治疗。

参考文献

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[7] 黄岭晖， 李强， 陈玉婵. 基于CD8+ CD28-调节性T细胞免疫功能调节的替比夫定抗乙肝病毒效价研究. 长治医学院学报， 2016， 30（3）：189-192.

[收稿日期：2020-03-02]

作者单位：010017 蒙古自治区人民医院检验科

通讯作者：李媛