Liss/coombs卡应用于ABO疑难血型检测中的临床价值分析

高晶晶

[摘要] 目的 讨论研究Liss/coombs卡应用于ABO疑难血型检测中的临床价值与意义。方法 选择该院2018年1—6月7例ABO疑难血型患者作为研究对象。将患者1%红细胞悬液50 μL与50 μL的抗-A、抗-B标准血清在血型鉴定微凝胶柱卡上进行反应，之后将患者血清50 μL与1%ABO试剂细胞A、B细胞液50 μL进行反应并将反应液在Liss/coombs卡上进行检测并对不同的稀释浓度标准血清反应进行检测。 结果 抗-A，抗-B标准血清进行连续倍比稀释，分别以盐水法、柱凝集法及混合实验法测定各自最大稀释度的有效反应，盐水发最低，滴度仅有128;柱凝集法灵敏度达到512;而混合法测定结果较其余两种更高，需达到4 096。 结论 盐水结合柱凝集法对ABO疑难血型进行检测具有灵敏度及准确率高的特点，尤其对正反定型不一致的疑难血型检测效果较好，值得临床广泛推荐应用。

[关键词] Liss/Coombs卡;盐水法接合柱凝集法;ABO疑难血型检测;临床价值与意义

[中图分类号] R5          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）02（a）-0010-03

Clinical Value Analysis of Liss/coombs Card in ABO Difficult Blood Group Detection

GAO Jing-jing

Department of Blood Transfusion， the First Hospital of Quanzhou， Fujian Medical University， Quanzhou， Fujian Province， 362000 China

[Abstract] Objective To discuss the clinical value and significance of saline conjugate column in ABO difficult blood group detection. Methods Seven ABO patients with difficult blood group in the hospital from January to June 2018 were selected as the study subjects. One percent ofpatients erythrocytesuspension 50 μL was reacted with 50 μL of anti-A and anti-B standard serum， then 50 μL of patients serum was reacted with 50 μL one percentof ABO reagent cell A and B， and the reaction liquid was detected on Liss/coombs card and the standard serum reaction with different dilution concentration was detected. Results The standard serum of anti-A and anti-B was diluted continuously by multiple dilution. The maximum dilution of each standard serum was determined by saline solution method， column agglutination method and mixed experiment respectively. The saline hair was the lowest， and the titer was only 128. The sensitivity of column agglutination method was 512， and the results of mixed method were higher than those of the other two methods， requiring 4 096. Conclusion Saline combined with column agglutination method has the characteristics of high sensitivity and accuracy in detecting ABO difficult blood group， especially for those with inconsistent forward andbackward typing， which is worthy of wide clinical recommendation and application.

[Key words] Liss/Combs card;Brine method of joint column agglutination; ABO difficult blood group detection; Clinical value and significance

红细胞ABO血型的准确鉴定是输血相容性检测最重要的环节之一，与患者的用血安全直接相关联。患者输血前进行常规检测ABO血型正定型（红细胞定型）与反定型（血清定型），只有正反定型相一致才可确定ABO血型[1]。ABO血型的鉴定会受到患者年龄、疾病、遗传及药物等多种因素的影响，对红细胞ABO疑难血型进行准确有效的判断才能达到安全输血的目的。现临床多应用柱凝集法进行检测，但对于疑难血型检测上無法获得满意的检测结果，可能导致ABO血型检测过程中出现正反定型结果不一致的情况[2]。盐水法接合柱凝集法作为一种新的检测方式具有更加准确、灵敏度高的优势，尤其对于ABO血型抗原弱化或抗体减低而非ABO亚型或抗-H阴性的患者可在较短时间内获得结果。 该文为探讨Liss/coombs卡应用于ABO疑难血型检测中的临床价值分析，特选取2018年1—6月7例ABO疑难血型患者临床资料进行分析，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

选择该院7例输血前进行ABO血型检测发现正反定型不一致的患者作为研究对象，通过检验科相关实验条件对其血液进行对比性试验检测。

1.2  设备与试剂

该次研究中应用的设备包括恒温箱、离心机，试剂主要以生理盐水、1%A、B细胞试剂及抗-A、抗-B血清为主;还包括ABO血型鉴定卡、Liss/coombs结合反应卡。

1.3  檢测方法

取ABO疑难血型患者1%50 μL红细胞液并将其与50 μL抗-A及抗-B标准血清进行混合反应[3];保持实验温度4℃，反应时间15 min。若实验在室温条件下进行则应将反应时间延长至30 min。之后将充分反应后的反应液结合至Liss/coombs卡上，使用专业离心机进行离心处理，离心时间为10 min并对所得结果进行判断[4]。之后将患者50 μL血浆与1%反定A、B红细胞悬液50 μL，加至Liss/coombs卡[5]，在37℃恒温箱中进行30 min反应并放至离心机进行10 min离心处理并对结果进行观察[6]。该次试验在盐水试管、柱凝集法及混合实验法条件下进行，另外还应对不同稀释浓度的抗-A及抗-B标准血清进行检测[7]，浓度为每次稀释2倍并将检测结果进行对比。

1.4  统计方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计数资料用[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  3种方法检测抗原减弱或抗体减低结果

3种方法测定抗原减弱或抗体减低结果显示，盐水法接合柱凝集法进行血型鉴定效果较好并与其他两种方法存在较大差异，且差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2  血清连续倍比稀释结果

抗-A，抗-B标准血清进行连续倍比稀释，分别以盐水法、柱凝集法及混合实验法测定各自最大稀释度的有效反应，盐水法最低，滴度仅有128;柱凝集法灵敏度达到512;而混合法测定结果较其余两种更高，需达到4 096。见表2。

表2   3种方法抗-A、抗-B标准血清连续倍比稀释比较

3  讨论

目前临床用于检测ABO血型的方法较多，但在对血型测定过程中存在正反定型不符的疑难血型缺乏统一的鉴定流程，这也在一定程度上增加了该部分患者输血的难度与风险[8-9]。微柱凝集法的血型反应卡与交叉配血反应卡通常都只进行单一检测的目的，缺乏进一步的联合与拓展应用。单一的血型测定柱凝集法主要是通过红细胞抗原及对应的抗体IgM结合后通过离心使凝集的红细胞悬浮在凝胶表面或中层而呈现阳性反应，未与抗体结合的红细胞通过凝胶沉于凝胶底部表现为阴性反应[10-11]。部分研究人员[12]认为将CAT法应用于ABO血型检测所得结果的准确性不如手工试管法检测准确。随着研究的进一步深入，研究人员均认为，血库通过CAT法对ABO血性进行检测时仍存在正反定型不一致的情况[13-14]。该次研究中参与研究的患者疑难血型均为抗体减低，应用盐水法接合柱凝集法进行血型鉴定效果较好并与其他两种方法存在较大差异（P<0.05），此结果与梁汉彰[15]研究所得结果相似，而抗原减弱的情况待后续实验进一步验证该方法的可行性。另外，研究中还发现抗-A，抗-B标准血清进行连续倍比稀释，分别以盐水法、柱凝集法及混合实验法测定各自最大稀释度的有效反应，盐水法最低，滴度仅有128;柱凝集法灵敏度达到512;而混合法测定结果较其余两种更高，需达到4 096（P<0.05），此结果与王显荣等[16]文章中提出的盐水试管法最大稀释度有效反应最低，滴度仅为128，而盐水接合柱凝集法较其余两种方法更高，达到4 096相似。

盐水法接合柱凝集法是交叉配血反应卡的进一步拓展并作为该次研究的结合反应卡[17]。主要是指将盐水法反应阳性（肉眼无法看见或非常微弱）的反应液（IgG型或IgM型抗原抗体结合物）接合至Liss/Coombs卡上进行抗球蛋白试验，将抗原抗体特异性反应与抗球蛋白试验超敏感性进行结合[18];之后根据反应卡分子筛的物理作用及LISS促进抗原抗体反应的特性显著提升实验的敏感度[19]。实验发现[20-21]，单一的柱凝集法对ABO血型的测定尽管也具有一定的灵敏度，但对于由于疾病或者生理因素造成的抗原减弱或抗体减低的患者仍较难确定其准确的ABO血型。该文应用3种检测方式对抗-A、抗-B标准血清进行连续倍比稀释并测定反应结果后发现，盐水法接合柱凝集法进行标准抗血清测定其灵敏度显著高于其余两种方法。综上所述，盐水法接合柱凝集具有灵敏度较高且效率更高的优势，对于抗原减弱或抗体减低的ABO疑难血型患者具有较高的检测价值。

[参考文献]

[1]  王丽.采用盐水法接合柱凝集法检测ABO疑难血型的临床分析[J].中国药物经济学，2018，10（S1）：70-71.

[2]  步晓筠，刘建成，邵峰，等.宁夏地区回族无偿献血者ABO和Rh血型基因频率分布的研究[J].检验医学与临床，2019， 16（9）：1222-1224.

[3]  李婵婷.临床输血前血型鉴定及抗体筛查对输血安全的重要作用[J].基层医学论坛，2019（17）：2462-2463.

[4]  屈林，李景和，刘凤霞. ABO血型抗原减弱所致疑难血型的原因分析及鉴定方法[J].中国输血杂志，2017，11（9）：706-708.

[5]  S chenk-Brunner H .ABO（H ）sy stem .In ：Schenk-Brunn er H .Human blood group s chemical and biochemical basis of antigens pecificity[M].2nd ed，New York ：S pringer，2016，18（11）118～161