溶血、脂肪血及保存条件对HBV DNA、HIV RNA核酸检测的价值体会

朱传凤，王玲玲，潘志荣

（江苏省苏州市中心血站，江苏 苏州 215000）

0 引言

血站对血液标本进行HBV DNA、HIV RNA、HCV DNA 核酸检测是为了预防经输血传播疾病的发生，但核酸检测技术灵敏度较高，容易因某些因素的干扰而出现假性结果，因此需要对这些因素进行规避[1-2]。本文试探究脂肪血、溶血以及不同保存条件给血液标本HBV DNA 与HIV RNA 核酸检测结果带来的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选取2018 年1 月至2019 年1 月期间采集的HBV、HCV、HIV 抗体检测结果均为（-）的血浆透亮标本及检测结果均为（+）的等量血浆标本，制备为血红蛋白、甘油三酯浓度不同的若干份HBV DNA 与HIV RNA 标本；再准备好一组非溶血、脂肪血的正常血液标本。

1.2 方法。在-30℃、25℃温度下各保存5 份12-30 倍核酸试剂检测下限浓度的HBV DNA 与HIV RNA 血液标本，分别在4 小时、1 日、1 周、4 周以荧光PCR 法和罗氏核酸检测系统为全部标本采取NAT 检测。取NAT 检测、血清学检测均为（-）的红细胞悬液与乳糜血浆，放入-80℃环境中保存，离心取上层液，制备为脂肪血、溶血样本，借助加样仪制备为不同浓度的溶血、脂肪血标本样本[3-5]。以生化分析仪与血细胞分析仪检测其血红蛋白浓度、甘油三酯浓度，行NAT检测。此外，正常血液标本也给予血红蛋白浓度、甘油三酯浓度、NAT 检测。

1.3 观察指标。比较不同保存时间、温度以及脂肪血、溶血情况下血液标本HBV DNA、HIV RNA 核酸检测结果。

1.4 统计学分析。在SPSS 19.0 版统计学软件中纳入本研究中所有患者的临床数据，计量数据以（）表示，行t 检验，通过统计分析后结果若为P＜0.05，那么便意味着差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 保存温度、保存时间。在-30℃、25℃温度下保存4 小时、1 日、1 周、4 周时间，其两项Ct 值均无统计学差异（P＞0.05），见表1。

表1 不同时间、温度下的Ct 值对比

表1 不同时间、温度下的Ct 值对比

时间 HIV RNA HBV DNA-30℃ 25℃ -30℃ 25℃4 小时 34.99±0.89 34.33±0.71 33.68±0.59 33.93±0.31 1 日 34.67±0.65 34.01±0.55 34.07±1.15 33.81±0.25 1 周 34.43±0.61 34.92±0.76 33.83±0.62 34.29±0.46 4 周 34.34±0.77 34.23±0.66 34.04±0.57 34.32±0.46

2.2 溶血、脂肪血标本.血红蛋白浓度低于34g/L 的标本、甘油三酯浓度不超过7.93mmol/L 的标本其HBV DNA、HIV RNA 的Ct 值与正常血液标本（血红蛋白0g/L、甘油三酯0.95mmol/L）对比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 溶血、脂肪血标本Ct 值对比

表2 溶血、脂肪血标本Ct 值对比

血红蛋白浓度（g/L） HBV DNA HIV RNA 甘油三酯浓度（mmol/L） HBV DNA HIV RNA 34 35.01±0.47 35.11±0.56 7.93 34.63±0.34 34.73±0.35 17 34.58±0.35 34.96±0.34 3.8 34.66±0.57 34.52±0.58 5 34.58±0.36 34.63±0.48 1.49 34.62±0.93 34.62±0.78正常标本 34.72±0.31 34.77±0.37 正常标本 33.83±0.77 34.82±0.44

3 讨论

核酸检测结果容易因溶血、脂肪血以及保存不当而受到影响。溶血即血红蛋白异常，溶血会血红蛋白的卟啉环和Taq 酶发生不可逆的结合，使该酶发生活性降低，影响到NAT 测定结果；脂肪血中含有的乳糜微粒则是通过吸收和屏蔽荧光来降低荧光信号强度与扩增效率，这意味着血红蛋白和甘油三酯浓度越高则检测结果受到的干扰越大[6-9]。而本文中血红蛋白低于34g/L、甘油三酯不超过7.93 mmol/L 的血液标本其核酸检测结果均较为相近（P ＞0.05），这意味着只要不超过这一界限，就不会对核酸检测结果造成较大的影响[10-14]。本文还对保存时间和保存温度进行了分析，结果显示25℃以下标本保存4 小时至4 周其测定结果均较为相近，这意味着HBV DNA、HIV RNA 血液检测标本可在25℃下保存最长4 周

HBV DNA、HIV RNA 核酸检测应注意规避脂肪血、溶血标本，并注意保存时间与保存温度，以免对检测结果造成干扰。