不同产地牛至中香芹酚和麝香草酚含量分析

马建民 ， 张凡建 ， 段素云

(北京农业职业学院 ， 北京 房山 102442)

牛至(OriganumvulgareL.)为唇形科牛至属多年生草本植物，分布广泛。本品性凉，味辛，无毒，具有清热解表、利水消肿的功效。主治中暑、感冒、头痛身痛、急性胃肠炎、腹痛吐泻、水肿等症[1]。牛至也是被广泛研究的植物添加剂[2-4]，具有很大潜力成为抗生素的天然替代品，其主要抗菌成分为香芹酚(Carvacrol)和麝香草酚(Thymol)。本试验建立了牛至有效成分香芹酚和麝香草酚的高效液相色谱分析法，并对不同产地牛至进行了检测，为今后牛至的产地选择提供基础研究数据。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备 高效液相色谱仪(岛津LC-16AT)、电子分析天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司SQP]、昆山KQ-500DV超声清洗机、震荡器(IKA)、微量移液器等。

1.2 试剂 香芹酚对照品、麝香草酚对照品(>99.0%，Macklin公司)；甲醇、乙腈(色谱纯，Fisher Scientific公司)；水为超纯水；牛至1，产地广西，购自菩提药源；牛至2，产地河北，购自诚信正品药业；牛至3，产地浙江，购自药都保健养生堂；牛至4，产地河南，购自福卫冷背药材行。

1.3 溶液配制

1.3.1 标准储备液 分别称取香芹酚和麝香草酚对照品0.020 0 g，用甲醇定容至10 mL，制得终浓度为2 mg/mL的2种标准储备液。

1.3.2 混合标准工作液 取以上2种标准储备液，用甲醇稀释制备2、10、20、50、100 μg/mL 5 个系列浓度的混合标准工作液，存放于4 ℃冰箱。

1.4 色谱条件 色谱柱InertSustain C18(150 mm×2.1 mm，3 μm)；紫外检测波长276 nm；流动相为乙腈-水(40∶60)；柱温50 ℃；流速0.4 mL/min；进样量10 μL。

1.5 牛至预处理 牛至粉碎，过4号筛，称取1.000 0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理(功率100 W，频率40 kHz)40 min， 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，上清液用微孔滤膜(0.25 μm)滤过后上机检测。

1.6 标准曲线及线性范围 取上述混合标准工作液，按1.4色谱条件从低浓度到高浓度测定，将测得香芹酚和麝香草酚的色谱峰面积(A)和相对应的浓度(C)做直线回归，求得标准曲线回归方程的线性范围和相关系数。

1.7 检测限及定量限 以信噪比(S/N≥10)作为定量限，以信噪比(S/N≥3)作为检测限。按1.6中所得标准曲线计算香芹酚和麝香草酚检测限及定量限。

1.8 精密度和准确度 不同产地牛至，按1.5中牛至预处理方法，做5 个平行样品，按1.4中色谱条件分析，计算样品标准差。不同产地牛至，称取牛至粉1.000 0 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入香芹酚和麝香草酚标准储备液0.1 mL，从1.5中牛至预处理方法，精密加甲醇开始进行预处理，按1.4中色谱条件分析，计算样品回收率。

2 结果

2.1 色谱图 混合标准工作液和牛至样品色谱图见图1、2，香芹酚和麝香草酚完全分离，色谱峰形对称。标准图谱中香芹酚和麝香草酚，出峰时间分别为10.890 min和12.222 min，保留时间合理。

图1 混合标准工作液色谱图

图2 牛至样品色谱图

2.2 方法学考察 按1.6～1.8中方法，香芹酚和麝香草酚的标准曲线和线性范围、检测限和定量限、准确度和精密度见表1。线性关系良好，标准差和回收率符合要求。

表1 方法学考察

2.3 不同产地牛至中香芹酚和麝香草酚的含量 购买4 个产地牛至药材中香芹酚和麝香草酚的含量见表2。河北产牛至中香芹酚含量最高，为0.61 mg/g；广西产牛至中麝香草酚含量最高，为1.08 mg/g。

3 讨论

3.1 牛至预处理 广西牛至样品分别用超声15、30、45、60 min处理，含量测定结果见图3，由图3可知，本试验确定超声时间为45 min。

3.2 流动相选择 香芹酚与麝香草酚为同分异构体，其化学名称分别为2-甲基-5-异丙基苯酚和 5-甲基-2-异丙基酚，完全分离困难。研究发现，当流动相为甲醇-水时，甲醇比例过高，香芹酚和麝香草酚达不到完全分离，降低甲醇比例，出峰时间延长。香芹酚和麝香草酚在乙腈-水的流动相中更易分离。本试验采用乙腈-水(40∶60) 进行色谱分析，分离度良好，出峰时间合适。

3.3 不同产地牛至比较 香芹酚和麝香草酚是牛至抗菌作用的有效成分，所以选定香芹酚和麝香草酚为评价牛至质量的检测指标。4 个产地牛至中香芹酚和麝香草酚含量范围在0.24～0.61、0.28～1.08 mg/g。河北产牛至中香芹酚含量极显著高于其他地区。广西产牛至中麝香草酚含量显著高于浙江，极显著高于其他地区。以香芹酚和麝香草酚含量为判断依据，初步认为广西最佳，浙江次之，河南较差。刘红兵等[5]对不同产地牛至香芹酚和麝香草酚含量进行检测，香芹酚含量范围是0.1～2.9 mg/g，麝香草酚含量范围是0.1～6.3 mg/g。可见不同产地牛至中香芹酚和麝香草酚含量，存在较大的差异,说明牛至的资源品质层次不齐。开展牛至药效研究时，首先要确保牛至产地，否则会出现不一致的试验结果。在使用牛至作为添加剂，可测定香芹酚和麝香草酚含量来调整添加剂量。同时应开展牛至样品的标准化生产规范研制，确保牛至原料质量稳定。