苦参炮制工艺优选

邓婷，王琳★，杜平，李相敏

（1.贵州省毕节市中医院，贵州 毕节；2.贵州中医药大学，贵州 贵阳）

0 引言

苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait. 的干燥根，春、秋二季采挖，除去根头和小支根，洗净，干燥，或趁鲜切片，干燥[1]。苦参化学研究主要集中在根部，包括生物碱、黄酮、脂肪酸等成分[2-4]。具有杀虫、抗心律失常、抗肿瘤、降血糖、降压等作用[5-10]。现已知苦参抗菌的主要活性成分是苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱和高丽槐素[11]。苦参中主要成分可以作为天然安全的消毒成分代替传统化学成分，具有环保、绿色、安全的特点[12]。目前有关苦参炮制工艺没有具体操作技术标准，缺乏参数化的管理，导致饮片的质量参差不齐。因此，本研究以苦参碱、氧化苦参碱及水溶性浸出物为指标，采用L9（34）正交试验优化苦参炮制工艺，制定工艺技术参数，为更深入研究苦参药材及其应用奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-20AT 高效液相色谱仪（LC-20AT 二元梯度泵、SPD-20A检测器，日本岛津）；JT5003 型全自动天平（余姚金诺）；HH-2 数显恒温水浴锅（常州澳华）；101-2AB 电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特）；HS10260D 超声波清洗器（天津恒奥）；WP-UP-WF-20 实验室超纯水机（四川沃特尔）等。

1.2 材料

甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸、三氯甲烷、浓氨水、无水乙醇为分析纯，苦参碱与氧化苦参碱对照品（批号分别为VJOY-9B2S、BVFN-43CD），购于中国食品药品检定研究院，中性氧化铝柱（100～200 目，5g，内径1cm）等。

苦参药材购自贵州省大方县羊场镇，经贵州中医药大学生药教研室魏升华教授鉴定为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根。

2 方法与结果

2.1 苦参碱与氧化苦参碱的测定

2.1.1 色谱适用性条件

色谱柱：BP-NH2 柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）；检测波长：220nm；体积流量：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2000。

2.1.2 对照品溶液的制备

取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈- 无水乙醇（80：20）混合溶液分别制成每1mL 含苦参碱0.02mg、氧化苦参碱0.2mg 的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备

取苦参饮片粉末0.3g（过三号筛），精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.5mL，精密加入三氯甲烷20mL，密塞，称定质量，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，加在中性氧化铝柱上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7：3）各20mL洗脱，合并收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量使溶解，转移至10mL 量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.1.4 线性关系考察

分别精密吸取苦参碱、氧化苦参碱对照品0.5、1.0、5.0、9.0、13.0、17.0、20.0μL 注入高效液相色谱仪中，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定。以对照品质量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，分别得苦参碱的回归方程为Y=283002X-780.54，r=0.9998；哈巴俄苷的回归方程为Y=516574X-1468.8，r=0.9997；结果表明，苦参碱在0.010～0.400μg、氧化苦参碱在0.10～4.00μg 呈良好线性关系。

2.1.5 精密度试验

取苦参饮片粉末0.3g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件连续进样6 次，结果苦参碱、氧化苦参碱的RSD 分别为1.37%、0.73%，表明仪器精密度良好。

2.1.6 重复性实验

取苦参饮片粉末6 份，每份0.3g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定，结果苦参碱、氧化苦参碱的RSD 分别为2.75%、2.07%，表明该方法的重复性良好。

2.1.7 稳定性试验

取苦参饮片粉末0.3g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件分别在0、2、4、6、8、10h 进行测定，结果苦参碱、氧化苦参碱的RSD 分别为2.27%、1.90%，表明供试品溶液于室温下10h 内稳定。

2.1.8 加样回收率试验

精密称取同一批苦参药材粉末6 份，每份约0.15 g，分别精密加入苦参碱、氧化苦参碱对照品适量，按“2.1.3”项下方法制备，按“2.1.1”项下色谱条件测定，结果苦参碱、氧化苦参碱的平均加样回收率分别为98.6%、100.71%，RSD 分别为2.83%、2.46%。

2.2 水溶性浸出物的测定

照2015 版《中国药典》四部通则“2201”项下水溶性浸出物测定法中的冷浸法测定。

2.3 炮制工艺考察

2.3.1 单因素考察

以苦参中苦参碱、氧化苦参碱和水浸出物的含量为指标，对苦参药材的软化用水量（A）、软化水温度（B）、软化时间（C）、干燥温度（D）进行单因素考察。结果以0.8 倍25±2℃水软化苦参，软化22 h，切厚片，90℃干燥最佳。

2.3.2 正交试验

根据“2.3.1”项下单因素考察结果，选用L9（34）正交表安排试验（见表1、表2）。取9 份苦参药材，分别加入不同用量及不同温度水进行软化，软化一定时间，取出，切厚片，再在不同温度下干燥，即得9 份样品。按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定。分差分析结果见表3。

表1 因素水平表

表2 正交试验设计及结果表

表3 方差分析结果表

直观分析表明：以苦参碱与氧化苦参碱总量为指标，炮制过程中的影响因素为：C＞D＞B＞A；以水浸出物含量为指标，炮制过程中的影响因素为：C＞A＞D＞B。说明软化水温度对苦参中苦参碱、氧化苦参碱及水溶性浸出物含量的影响最大。方差分析结果表明：以苦参碱与氧化苦参碱总量为指标，其实验结果均无显著性差异；以水溶性浸出物为指标，则软化时间有显著性影响，其它因素无显著性差异。水溶性浸出物是衡量中药饮片质量的重要指标之一，因此综合各因素考虑，确定的炮制工艺为：A3B3C2D1。即用1 倍量25±2℃水，软化22h，切厚片，置烘箱内80℃干燥，即得。

2.4 工艺验证

取同一批次的苦参干药材3 份，每份5000g，用1 倍量25±2℃水软化22 h，取出，稍润，切厚片，置烘箱内80℃干燥。按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定。结果见表4。

表4 工艺验证结果表

结果表明，分别测定3 个指标含量，三次结果差异较小，表明研究的炮制工艺稳定、合理、可行。

3 讨论

在苦参切制过程中，影响苦参炮制工艺的因素有软化用水量、软化水温度、软化时间、干燥温度4 个因素；研究结果表明，将4 个因素纳入L9（34）正交试验，得到的最佳切制工艺为：用1 倍量25±2℃水，软化22 h，切厚片，置烘箱内80℃干燥。工艺验证结果表明，该炮制工艺稳定、可行。

中药材在饮片切制前，用水进行浸泡、润软化处理，是中药传统加工炮制中的一个重要内容。本研究采用“浸润结合，药透水尽”的原则，经预实验结果表明，苦参干药材的吸水率（M 水：M 药材）为0.71，与2015 版《中国药典》“浸泡至约六成透时，润透，切厚片”描述相吻合，单因素考察设置软化用水量梯度分别为0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、4、6、8 倍，结果软化用水量为0.8 倍时，各指标含量最高，再经正交工艺优选，结果以1 倍水为最佳软化用水量，使药材整个软化过程中浸-润有机结合，既保证苦参内在成分，又达到软化便于切制的目的。