三种组织学染色法对胃幽门螺旋杆菌感染的诊断效能评估

2020-05-08林聪

浙江实用医学 2020年6期

林聪

（温州市中西医结合医院，浙江温州 325000）

80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡与幽门螺旋杆菌（Helicobacterpylori，Hp）感染有关[1]。全球人群Hp感染率可达50%以上，我国大样本多中心调查显示，地区Hp感染率约为59%[2]。Hp感染缺乏典型的临床特征，早期发现及治疗意义重大。目前，Hp常用的组织切片染色方式包括Warthin-Starry银染色、Methylene blue染色、Giemsa染色、Genta染色、El Zimaity染色、免疫组化染色、HE染色等。本研究选择常规组织切片的三种染色方法（美蓝染色、免疫组化染色和Giemsa染色），并分析三者对胃Hp感染的检测效能。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取本院2018年6月-2019年6月行胃组织活检患者107例，其中男58例，女49例；年龄 22-73 岁，平均（43.0±8.7）岁，全部病例均行14C尿素呼气试验。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂仪器：（1）轮转式切片机（徕卡 RM2335）；（2）脱水机（HP300）；（3）烘箱；（4）数字切片扫描仪（C13220-01）；（5）免疫组化染色孵育盒（常州市飞勒斯仪器有限公司）。试剂：（1）美蓝色染液（Loeffler氏，XY0019，上海信裕生物科技）；（2）苏木素-伊红染液（H-E 郑州万华生物技术有限公司，BA4025）；（3）Giemsa 染液（上海蓝季科技发展有限公司，Giemsa stain，1:9，100mL）；（4）EDTA-2Na（河南业玖盛实业有限公司）；（5）小鼠抗人HP/Haptoglobin单克隆抗体（上海乔羽生物科技有限公司）；（6）山羊抗鼠二抗（上海西唐生物科技有限公司，C0306）；（7）DAB 染色液（国食药监械（进）字 2011 第 1402464 号，Dako Denmark A/S）。

1.2.2 方法胃组织活检标本取材于胃窦、胃角、胃体小弯及明显病灶处，切片脱蜡，切片厚度3μm，每例制备样本三份，分别用美蓝染色、免疫组化染色和Giemsa染色进行染色，常规脱水、透明、封固[3]。（1）美蓝染色组。加入美蓝5g，充分搅拌后过滤，盛入避光密封染色缸，室温保存。（2）免疫组化染色组。采用EnVision法染色，切片常规脱蜡至水后行微波抗原修复，PBS（0.05mol/L）清洗3次，每次3分钟；滴加鼠抗Hp抗体，37℃孵育50分钟，PBS清洗3次，每次3分钟；滴加山羊抗鼠二抗，37℃孵育50分钟，PBS清洗3次，每次3分钟。滴加DAB显色液约5分钟，水洗，苏木精复染细胞核，梯度乙醇脱水，中性树胶封固。（3）Giemsa染色组。碱性品红50mg溶于95%乙醇100mL中，再加入4%苯酚250mL及650mL蒸馏水充分混合。3%对苯二酚1mL与5%明胶15mL充分混合，显影前5分钟加入2%硝酸银3mL混合[4]。三组在高倍镜下读取切片，Hp呈弯曲短杆状，分布于胃黏膜凹陷内部。Hp阳性标准：美蓝染色法和免疫组化苏木精染色法呈蓝色，Giemsa染色法呈红色。根据《慢性胃炎及上皮性肿瘤胃黏膜活检病理诊断共识》[5]标准对结果进行判读。

1.3 评价指标（1）14C尿素呼气试验。14C正常值＜100（dpm/mmol CO2）为阴性，＞100 为阳性，提示 Hp感染可能。（2）Hp阳性金标准：参照《第四次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告》[6]，同一样本14C尿素呼气试验、免疫组化与HE染色中至少2项检测结果为阳性。

1.4 统计学处理采用SPSS22.0软件进行数据分析，采用配对设计，计量资料用（±s）表示，计数资料用百分率表示，采用Mcnemar检验和Kappa检验。

2 结果

本组按金标准诊断Hp感染阳性88例，阴性19例。三种染色法与金标准进行比较，免疫组化染色灵敏度最高（94.32%），美蓝染色特异度最高（89.47%）；诊断效能免疫组化染色最高（Kappa值0.754），其次为美蓝染色（Kappa值0.715）。详见表1-2。

表1 三种染色方法的Hp诊断结果（n=107）

3 讨论

我国幽门螺旋杆菌发病率已达40%左右，严重威胁民众健康，早期检测意义重大[7]。Hp检测分为侵入性以及非侵入性。组织切片病理染色虽具有侵入性，但其灵敏度较高，在组织学诊断的同时可进行胃黏膜的病理诊断，对胃癌高危患者的治疗方式选择以及预后判定都有一定的指导意义[8-9]。本研究选取组织切片三种常规染色方法，比较它们对Hp的检测效能。结果显示，免疫组化染色对Hp检测效能与金标准一致性达到0.754，在三种染色方法中诊断效能最高；美蓝染色表现出了较高的特异度（89.47%），而免疫组化染色则灵敏度更佳（94.32%），对检测诊断意义更大。因此，临床上可以选择免疫组化染色来达到最佳的检测效果，为早期诊断提供有力的依据。