续断生品炮制工艺研究*

王先菊，李 玮，杜洪志，吴珊珊，侯晓杰，熊 瑞，张 敏，刘娅琴，李 妍

(贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)

续断是我国常用的传统中药材之一，该品为川续断科植物川续断DipsacusasperWall.ex Henry的干燥根[1]。味辛、苦，微温。归肝、肾经。具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏的功效[2-3]。其主要化学成分有挥发油类、生物碱类、环烯醚萜类、三萜皂苷类等[4-6]。续断主要以野生为主，在我国湖北、湖南、江西、四川、贵州、云南、广西、西藏等省区均有分布[7]。贵州已经建立许多规模化续断种植基地，如贵阳、六盘水、铜仁、毕节等地，种植面积3万余亩，产量接近2.5万吨，续断药材除了进行饮片生产之外，也是贵州同济堂制药有限公司的主打产品“仙灵骨葆胶囊”(批注文号：国药准字Z20025337)中主要药物配方之一。本项目有规范化、规模化的药材种植基地，生产企业，饮片市场用药支撑，为研究成果的产业化应用提供坚实保障，同时，为企业解决生产中存在的问题，规范生产，有助于贵州品牌饮片及品牌中成药的形成。

2015版《中国药典》中收载的续断炮制方法有酒炙法、盐炙法，其工艺均为传统手艺，无具体的工艺技术参数，不便于控制饮片的质量，不利于实际生产。因此，本研究以续断中川续断皂苷VI为指标成分，采用正交试验制定工艺技术参数，为企业生产提供参考。

1 仪器、试剂

1.1 仪器

JA2003型千分之一电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；ME204E型万分之一电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；ZT-150型 高速多功能粉碎机(永康市展帆市工贸有限公司)；HS10260D型超声波清洗机(天津恒奥科技发展有限公司)；CS101-1C型鼓风干燥箱(重庆四达实验仪器厂)；高效液相色谱仪(规格型号：U3000，厂家：赛默飞世尔科技公司)； SZ-96自动纯水蒸馏器(上海亚荣生仪器厂)。

1.2 试剂

乙腈(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：2017.06.21，色谱纯)；甲醇(天津市富宇精细化工有限公司，批号：2017.08.01，分析纯)；纯净水(娃哈哈)；川续断皂苷VI(购自贵州迪大生物科技有限责任公司，批号：CAS No：39524-08-8，纯度>98%)；续断药材购自贵州省贵阳市修文县龙场镇原庆文厂。

2 方法

2.1 炮制方法

1)水洗量的考察。取续断原药材，除去杂质，分成5份，称重，分别加入药重的2倍、4倍、6倍、8倍、10倍水量洗30 min，切成4 mm厚片，在60 ℃下干燥至同等干燥程度。

2)水洗时间的考察。取续断原药材，除去杂质，分成5份，称重，加入药重的6倍水量分别浸润10 min、20 min、30 min、40 min、50 min，切成4 mm厚片，在60 ℃下干燥至同等干燥程度。

3)浸润水量的考察。取续断原药材，除去杂质，分成5份，称重，分别加入药重的2倍、4倍、6倍、8倍、10倍水量浸润2 h，切成4 mm厚片，在60 ℃下干燥至同等干燥程度。

4)浸润时间的考察。取续断原药材，除去杂质，分成5份，称重，加入药重的10倍水量分别浸润2 h、4 h、6 h、8 h、10 h，切成4 mm厚片，在60 ℃下干燥至同等干燥程度。

5)干燥温度的考察。取续断原药材，除去杂质，分成3份，称重，每份200 g加入药重的8倍水量浸润10 h，切成4 mm厚片，分别在50 ℃、60 ℃、70 ℃下干燥至同等干燥程度。

6)切片长度的考察。取续断原药材，除去杂质，分成3份，称重，每份200 g加入药重的2倍水量浸润6 h，分别切成3 mm、4 mm、5 mm厚片，分别在60 ℃下干燥至同等干燥程度。

2.2 正交试验

按 L9(34)设计研究续断生品炮制最佳工艺条件。试验因素及水平见表1

表1 因素水平表Tab.1 Factor levels

2.3 川续断皂苷VI含量测定

2.3.1 色谱条件

检测波长为212 nm，流动相乙腈：水(30∶70)，流速1 mL/min，柱温30 ℃，进样量20 μL，色谱柱为Agilent Eclipse C18(4.6×250 mm，5 μm)。

2.3.2 对照品溶液的制备

精密称取川续断皂苷VI对照品18.30 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，制成每1 mL含1.830 mg的溶液，摇匀，即得[1]。

2.3.3 供试品溶液制备

精密称取续断细粉0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率100 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得[1]。

2.3.4 线性关系的考察

配制浓度为0.1830 mg/mL的川续断皂苷VI对照品溶液，分别取8 μL、10 μL、12 μL、14 μL、16 μL、18 μL、20 μL的对照品。按“2.2.1”项下色谱条件测定。

2.3.5 样品测定

精密称取续断细粉0.5 g，按“2.3.3” 项下方法制备供试品溶液，按“ 2.3.1” 项下色谱条件进行测定，计算，即得。

2.4 最佳工艺验证

为验证优选最佳工艺的科学性、 稳定性和可重复性，对正交试验优选出的最佳工艺进行工艺验证，按最佳工艺制备样品，平行3份，测定川续断皂苷VI的含量。

3 结果与分析

3.1 线性关系

以对照品的质量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归处理，得到回归方程为Y=3.00X+0.0158(r2= 0.9998) ，表明川续断皂苷VI的质量在1.464～3.660 μg范围内呈现良好的线性关系。

3.2 单因素分析

3.2.1 水洗量

水洗量为2倍、4倍、6倍、8倍、10倍时，川续断皂苷VI的含量分别为7.29%、7.50%、7.58%、7.79%、5.86%，当水洗量为8倍时，其含量最高，因此考虑水洗量以8倍水量为宜。

3.2.2 水洗时间

水洗时间为10 min、20 min、30 min、40 min、50 min时，川续断皂苷VI的含量分别为7.13%、6.12%、6.27%、5.67%、6.68%，当水洗时间为10 min时，其含量最高，因此考虑水洗时间以10 min为宜。

3.2.3 浸润水量

浸润水量为2倍、4倍、6倍、8倍、10倍时，川续断皂苷VI的含量分别为6.12%、7.00%、8.43%、7.37%、5.56%，当浸润水量为6倍时，其含量最高，因此考虑浸润水量以6倍水量为宜。

3.2.4 浸润时间

浸润时间为2 h、4 h、6 h、8 h、10 h时，川续断皂苷VI的含量分别为5.76%、5.73%、5.78%、5.80%、5.83%，含量无显著性差异，综合考虑加工时间以浸润时间2 h时为宜。

3.2.5 干燥温度

干燥温度为50 ℃、60 ℃、70 ℃时，川续断皂苷VI的含量分别为6.89%、6.91%、6.90%，含量无显著差异，当干燥温度为60 ℃时，其含量最高，因此考虑干燥温度60 ℃为宜。

3.2.6 切片厚度

切片厚度为3 mm、4 mm、5 mm时，川续断皂苷VI的含量分别为5.97%、6.00%、5.95%，含量无显著差异，当切片厚度为4 mm时，其含量最高，因此考虑切片厚度4 mm为宜。

3.2.7 正交试验结果

以川续断皂苷VI含量为评价指标，对表2中的结果进行极差分析，各因素的影响顺序为B>C>A，因此优选出最佳工艺为A2B2C1，由表3中各因素进行方差分析表明，各因素对试验结果均无显著性影响，故选择均值最大的即A2B2C1，即取生续断除杂，加8倍量水洗10 min，加5倍量水浸润2 h，切制成4 mm厚片在60 ℃下干燥。

3.2.8 最佳工艺验证

根据优选出的最佳工艺制备样品，平行3份，进行验证性试验，结果得到平均含量为5.78%，RSD为2.66%，说明工艺验证所得结果差异较小，证明选出的最佳工艺稳定可行。

表2 正交试验结果与直观分析Tab.2 Orthogonal test results and direct analysis

表3 方差分析Tab.3 Variance analysis

4 结论与讨论

4.1 结论

以水洗量、水洗时间、浸润水量为考察因素进行正交试验设计，以川续断皂苷VI含量为评价指标，对续断生品炮制工艺进行正交优选，得出续断最佳工艺为：取续断药材，除杂，用8倍量水洗10 min，5倍水浸润2 h，切制成4 mm厚片，在60 ℃干燥温度下烘干。经最佳工艺验证，证明选出的续断生品炮制工艺稳定可行，可为续断生产提供参考。

4.2 讨论

本研究以生续断炮制过程中的水洗量、水洗时间、浸润水量、浸润时间、切制厚度、干燥温度6个单因素考察，以川续断皂苷VI的含量为指标，对续断的炮制工艺进行优选。根据结果分析，得到水洗量、水洗时间、浸润水量具有显著性差异。但是在做正交实验得出结果，却无显著性差异，且含量有所降低，可能是在炮制过程中，各道工序对指标成分有综合影响，从而含量有所降低，这可能就是同种药材，经过炮制加工后，生品与炮制品药效不同，是炮制理论中“生熟异治”的体现，且不同炮制品药效强弱亦不同，不过这还有待进一步的通过药理试验来证明。