HPLC法测定蒙药栀子-3汤中栀子苷含量

张跃祥，张智慧，王玉华*，王 伟

(1.内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010110；2.内蒙古盛唐国际蒙医药研究院有限公司，内蒙古 呼和浩特 010010)

栀子-3汤是由栀子、苏木、红花三味药材等比例组成的蒙药制剂。本品具有清血热，活血通经的功效，临床上主要用于小腹胀痛、月经不通等症。栀子是方中君药，文献[1-2]研究显示，栀子具有泻火除烦、清热利湿、消肿止痛的功效，用于治疗热病心烦、湿热黄疸、淋证涩痛、血热吐衄和扭挫伤痛等。主要成分是环烯醚萜、黄酮、三萜、有机酸和挥发油等成分，环烯醚萜类成分栀子苷是栀子的主要指标成分。目前,栀子-3汤无含量控制标准，因此本文采用高效液相色谱法[3]建立了栀子-3汤中栀子苷的含量测定方法，该法的建立为栀子-3汤质量标准的研究奠定了基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津SCL-10AVP型高效液相色谱仪(岛津仪器有限公司，日本)；SBL-20DT型超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司，宁波)；Mettler-Toledo XPR10型万分之一电子天平和Mettler-Toledo MS105DU型百万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司，江苏)。

1.2 试药

栀子苷对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号110749-201919，纯度97.1%)；栀子-3汤样品(锡林郭勒市镶黄旗蒙医院提供，批号201809006、201809012、201809013)；自制样品(批号201908018)；流动相所用乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Alltima C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；乙腈-水(15∶85)为流动相；流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量为10μL；检测波长238nm；理论板数按栀子苷峰计算理论板数应不低于1500。

2.2 制备对照品溶液

取栀子苷对照品加入甲醇使溶解并制成每1ml含30μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 制备供试品溶液

取本品约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，准确加入甲醇25ml，密塞，称定溶液和瓶子的总重，超声处理(功率250W，频率40kHz)20分钟，放到室温，再称定重量，用甲醇补足因超声提取过程中减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 制备阴性对照溶液

按本品处方配制不含栀子药材的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。

2.5 专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪中，记录色谱图。见图1。

图1的结果显示，供试品图谱和对照品图谱在相同的保留时间处有对应的栀子苷的色谱峰，且色谱峰的对称性好；阴性对照图谱中在此保留时间处无色谱峰出现，表明其他共存成分无干扰，方法专属性好。

2.6 线性关系

精密吸取对照品溶液1、3、5、7、10、15、20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值(Y)对栀子苷的进样量(X：μg)进行回归分析。结果显示，在0.027～0.541μg 范围内栀子苷与积分值呈良好线性关系，回归方程为Y=638.5896X-143.6079(r=0.9999)。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液于制备后0、1、2、3、4、5、6、7h进样，记录色谱图。结果显示，在所考察的不同时间点范围内所测得峰面积积分值基本不变，RSD为1.51%。供试品溶液在12h内稳定，能够满足测定所需要的时间。

2.8 精密度试验

取同一供试品溶液，连续进样6次，记录色谱图。6次测定峰面积积分值的RSD为0.92%，表明该液相色谱仪精密度良好。

2.9 重复性试验

取批号201809006供试品6份，每份约0.1g，制备供试品溶液，测定栀子苷含量。结果显示，样品中栀子苷平均含量为11.34mg/g，RSD为1.07%，方法重复性良好。

2.10 加样回收试验

取已知含量供试品(批号201809006，栀子苷含量为11.34mg/g)9份，每份约10mg，精密称定，分别加入一定量的栀子苷对照品溶液，制备加样供试品溶液，进样，记录色谱图，计算加样回收率。栀子苷的平均回收率为102.24%，RSD为1.50%，表明方法准确度好，结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

3 样品测定

取三批样品(批号201809006、201809012、201809013)及自制样品(批号201908018)各两份，每份约0.1g，制备供试品溶液，进样10μL，记录色谱图。计算，即得结果。测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果

结果显示，三批样品及自制样中栀子苷的含量有所差异，可能是因栀子药材的来源不同及制备过程的损失量不同造成，因此需控制样品中栀子苷的含量以达到保证质量的目的。

4 讨论

4.1 测定指标的选择

栀子是栀子-3汤的君药，栀子苷则是栀子主要活性成分之一，具有镇痛、抗炎、抗氧化、解热、利胆和轻泻等多种药理作用[4-6]，故本试验选择栀子苷进行含量测定。

4.2 色谱条件的选择

本试验在确定色谱条件时，应用《中国药典》2015年版“栀子”项下测定方法，并对柱温为25℃、30℃、35℃的条件进行了考察[7-8]。结果显示，在柱温30℃，流动相为乙腈-水(15∶85)条件下测定，栀子苷峰分离度及对称性良好，出峰时间适中。

4.3 超声提取时间的选择

在保证样品粉碎粒度、提取溶剂一致的情况下，分别考察超声提取10min、20min、30min后，栀子-3汤中栀子苷的含量。结果显示，超声提取20min后，栀子苷含量不再增加，故选择超声20min可以保证提取完全。