保婴散对幼龄SD大鼠急性毒性的毒理学研究

蒋文庆，杜青云，郭秋平*，卢 圆，齐珍珍

（1.广州白云山奇星药业有限公司，广东 广州 510530；2.广州医药研究总院有限公司药物非临床评价研究中心，广东 广州 510240）

儿童的生长发育不同于成人，同时由于儿童的器官及组织发育未完善，不能用成人的临床数据和成年动物的临床前安评数据来支持临床儿科用药的安全性。因此，采用幼龄动物开展儿科药物的临床安全性评价非常有必要。近年来，随着在临床上儿科用药需求的增加，儿科药物的安全性受到更多的关注。保婴散是广州白云山奇星药业有限公司的独家中成药品种，由胆南星、钩藤、人工牛黄、冰片、僵蚕（姜制）、全蝎（制）、珍珠、人工麝香、白附子（酱醋制）、天麻（姜制）、蝉蜕（去头足）、琥珀、防风、天竺黄、朱砂组成，具有除痰、定惊、清热解毒的功效，可用于治疗小儿惊风、痰涎壅盛。保婴散方中含有胆南星、全蝎、白附子、朱砂等毒性中药[1-3]，有必要开展保婴散的毒理学试验。本试验以保婴散为研究对象，在出生19天的幼龄大鼠上进行急性毒性试验，为保婴散的临床应用提供参考。

1 材料与仪器

1.1 药物

保婴散，广州白云山奇星药业有限公司提供。批号：20160704，有效期至：2018年6月30日。临用时用0.5%羧甲基纤维素钠配成所需浓度的药液。

1.2 动物

成年SD大鼠，19～20周龄，SPF级，雌雄各12只，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2011-0003。本试验使用的幼龄SD大鼠源于购进的雌雄大鼠交配繁殖。饲养于屏障级动物房，温度20～26℃，相对湿度40～70%，12h/12h明暗光照交替。使用时体重范围：雌性仔鼠42～56 g；雄性仔鼠42～57 g。

2 方 法

2.1 口服给药急性毒性

取出生后19 d的幼龄大鼠30只，按体重随机分为阴性对照组、保婴散低剂量和高剂量（分别为2.2 g/kg、4.4 g/kg，按公斤体重折算，分别相当于人临床用量37倍和74倍）组，每组10只大鼠，雌雄各半。给药前禁食不禁水12 h，各组均以10 mL/kg灌胃给药，24 h给药两次，两次时间间隔6 h以上。阴性对照组给予等体积的0.5%CMC-Na溶液。给药后观察至少4 h，以后每天至少观察1次，持续观察14天。并于给药后第2、3、5、7、11、14天测定动物体重。一般观察包括动物体重变化、饮食、外观、行为、分泌物、排泄物等。记录所有动物的死亡情况、中毒症状及中毒反应的起始时间、严重程度、持续时间、是否可逆等。给药后第14 d，处死动物，解剖，肉眼观察动物心、肝、脾、肺、肾等主要器官。

2.2 统计方法

根据所观察到的各种毒性反应（其出现时间、严重程度、持续时间等）和死亡情况，进行分析比较，确定最大给药量。对体重进行统计分析，计算平均值和标准差，各实验组进行组间比较之前先进行组间方差分析（F-test），当组间方差齐同时，组间比较采用Student-T检验（非配对的T检验）进行统计，组间方差不齐时，采用校正的Student-T检验进行统计分析。病理检查异常情况则按其发生率和程度进行组间比较。

3 结 果

3.1 一般状态观察结果

保婴散低剂量组给药当天及第2～14天全部动物一般观察未见异常。保婴散高剂量组在第二次给药后30 min内，10例动物中有3例雄性动物出现活动减少、闭眼症状，给药后1～4h陆续恢复正常。第2～14天全部动物一般观察未见异常。

3.2 大鼠死亡情况

连续14 d观察中，保婴散低、高剂量组均未见动物死亡。

3.3 保婴散对大鼠体重的影响

与阴性对照组比较，保婴散低、高剂量组雌雄动物体重均未见统计学意义的差异，在观察期14 d体重均保持增长趋势。

表1 保婴散对SD大鼠体重的影响（±s，n=10）

表1 保婴散对SD大鼠体重的影响（±s，n=10）

组别 剂量(g/kg) 性别 D1 D2 D3 D5 D7 D11 D14 增重(g)阴性对照 - ♂ 47±5 52±5 60±7 73±8 86±8 115±16 145±15 98±11♀ 47±4 53±4 59±5 72±7 82±7 110±10 131±10 84±8保婴散 2.2 ♂ 49±2 53±2 60±3 73±2 87±4 115±9 147±6 99±5♀ 47±2 51±2 58±2 72±2 83±2 113±3 135±5 88±6保婴散 4.4 ♂ 49±5 52±7 59±9 73±9 87±10 117±15 147±14 98±11♀ 47±4 51±5 57±4 71±6 80±6 109±7 132±7 84±5

3.4 保婴散对大鼠病理学的影响

各组全部动物大体剖检未见明显异常。

4 结果讨论及评价

根据中华人民共和国《药物非临床研究质量管理规范》[4-5]，在GLP条件下，本试验选用出生19 d的幼龄大鼠（大约相当于2岁左右的婴幼儿）进行了保婴散的急性毒性试验。保婴散2.2、4.4 g/kg（按公斤体重折算相当于每日临床用量的37、74倍）动物未见动物死亡，体重与阴性对照组相比无明显差异，大体解剖也未见明显异常。高剂量组动物在第二次给药后30 min内，有3例雄性动物出现活动减少、闭眼的症状，给药后1～4 h陆续即恢复正常。第2～14天全部动物一般观察未见异常。

综上所述，保婴散每日最大给药量为4.4 g/kg，约为每日临床用量的74倍。保婴散4.4 g/kg给药后30 min内可引起部分雄性动物出现活动减少、闭眼症状，给药后4 h可恢复正常。结合灌胃给药的药液体积和其它各项检查指标综合分析，该反应可能为胃部撑涨、饱腹疲惫的反应，非药物毒性所致，无明显毒理学意义。各组均未见明显的毒性靶器官。