12%氟唑菌酰胺·氟环唑乳油高效液相色谱分析

2020-04-21毛健伟刘建国张锡珍尹方坡

农药科学与管理 2020年1期

毛健伟，刘哲，袁媛，刘建国，张锡珍，尹方坡

(吉林省农业技术推广总站，吉林长春 130033)

1 前言

氟唑菌酰胺是巴斯夫公司研发的酰胺类杀菌剂，其化学名称为3-(二氟甲基)-1-甲基-N-(3，4，5-三氟[1，1-联苯]-2-基)-1-吡唑-4-甲酰胺。其作用机制属于琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂，具有防效高、防治病害多、持久性好、选择性强等特点[1-2]，被应用于水稻、黄瓜、苹果树等作物上[3]。氟环唑是巴斯夫公司研发的三唑类杀菌剂，其化学名称为(2RS，3RS)-1[-3-(2-氯苯基)-2，3-环氧-2-(4-氟苯基)丙基]-1氢-1，2，4-三唑。其活性成分氟环唑抑制病菌麦角甾醇的合成，阻碍病菌细胞壁的形成，被广泛应用于水稻、香蕉、小麦等作物上[4-5]。12%氟唑菌酰胺·氟环唑乳油于2016年在我国由巴斯夫欧洲公司首次取得农药登记证，用于防治水稻纹枯病及香蕉叶斑病[3]。

目前国内关于12%氟唑菌酰胺·氟环唑乳油的分析方法未见公开报道。本文采用高效液相色谱法对试样中氟唑菌酰胺和氟环唑进行定量分析，该方法操作快速、简便、准确，分离度和精密度均能达到定量分析的要求。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液乙腈：色谱纯；水：超纯水；磷酸：分析纯；氟唑菌酰胺标准品(99.5%)；氟环唑标准品(98.0%)；12%氟菌·氟环唑乳油(其中氟唑菌酰胺含量6%、氟环唑含量6%)。

2.2 仪器高效液相色谱仪：Agilent 1100，具有二极管阵列检测器和自动进样器，20μL定量环；Agilent色谱工作站；色谱柱：250mm ×4.6mm(id)不锈钢柱 Eclipse Plus C18，5μm填充物；过滤器：滤膜0.45μm。

2.3 液相色谱操作条件流动相：乙腈：水(0.1%磷酸水溶液)=80：20(V/V)；流量：0.8mL/min；柱温：(30±2)℃；检测波长：210nm；进样体积：5μL，保留时间：氟唑菌酰胺约为4.4min，氟环唑约为4.8 min。氟唑菌酰胺和氟环唑标样色谱图(图1)和12%氟唑菌酰胺·氟环唑乳油试样的高效液相色谱图(图2)。

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制称取氟唑菌酰胺和氟环唑标样各0.02g(精确至0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，加入约80mL乙腈溶解，超声10min，恢复至室温后用乙腈稀释定容，摇匀备用。

2.4.2 试样溶液的配置称取12%氟唑菌酰胺·氟环唑乳油试样0.33g(精确至0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，加入约80mL乙腈溶解，超声10min，恢复至室温后用乙腈稀释定容，摇匀备用。

2.4.3 测定在上述操作条件下，确认仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，至相邻2针标样溶液的响应值相对变化﹤1.5%后，即可按标样、试样、试样、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中氟唑菌酰胺(氟环唑)的峰面积分别进行平均。试样中氟唑菌酰胺(氟环唑)的质量分数数ω(%)按下式计算[6]

式中：A1—标样溶液中氟唑菌酰胺(氟环唑)的峰面积平均值；

A2—试样溶液中氟唑菌酰胺(氟环唑)的峰面积平均值；

m1—氟唑菌酰胺(氟环唑)标样的质量，g；

m2—氟唑菌酰胺(氟环唑)试样的质量，g；

P—标样中氟唑菌酰胺(氟环唑)的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择通过Agilent 1100高效液相色谱仪的数据采集功能，对氟唑菌酰胺和氟环唑进行扫描，获得其紫外波长吸收光谱图(图3)。可以看出，氟唑菌酰胺在190～200 nm 附近有最大吸收，后在230 nm处又出现较强吸收(图3)。氟环唑在190～210 nm附近有最大吸收。考虑到在 190～200 nm波长下，溶剂的干扰比较明显，为减少干扰，故选择检测波长为210 nm。

色谱柱选择常规的反相填料Eclipse Plus C18柱。依据氟唑菌酰胺、氟环唑物化性质，用乙腈作为溶剂溶解样品，并选择乙腈和水作为流动相，为了得到更好的分离效果和峰形，按流动相乙腈和水不同比例进行试验，当流动相为：乙腈：水(0.1%磷酸水溶液)=80：20(V/V)，流速0.8mL/min时，得到满意的分析结果，即有效成分之间及杂质能得到很好的分离，峰形对称，基线平稳，峰保留时间适宜。

3.2 分析方法的线性相关性试验准确称取氟唑菌酰胺和氟环唑标准品0.022 8和0.020 4g(精确至0.000 2 g)于100mL容量瓶中，加入约80mL乙腈溶解，超声10min，恢复至室温后用乙腈稀释定容，摇匀备用。按2.3色谱条件进行分析，进样量分别为1、3、5、7、9μL，以质量浓度和峰面积进行线性回归分析，得到氟唑菌酰胺线性方程为Y=4 894.106 91X+77.122 632，线性相关系数R2=0.999 7；氟环唑线性方程为Y=5 373.135 93X+156.555 28，线性相关系数R2=0.999 1。线性相关性具体试验结果(表1)。