三种分子生物学检测方法在肺结核诊断中的价值探讨

谭伟芬

（贵港市人民医院感染科 广西 贵港 537100）

肺结核是临床上一种常见慢性传染性疾病，引发该病的主要因素是结核杆菌侵入人体后，到达肺部组织所致。据世界卫生组织（WHO）报告全球有超20 亿人感染过肺结核，而我国肺结核感染人数位居世界第2 位，由于肺结核具有较强的传染性，且病程相对较长，复发率较高，早期诊断对于治疗起到了至关重要的作用[1]。以往临床认为诊断肺结核的金标准为细菌学检测，但是因为敏感性较弱，误诊、漏诊的发生率较高，加之结核分枝杆菌培养耗时相对较长，临床应用具有一定的局限性，随着医疗技术的不断发展，分子生物学检测开始广泛应用于临床诊断肺结核，为患者早期诊断提供了重要的参考价值。本次将在我院实施诊治的疑似肺结核患者483 例作为研究对象，旨在探讨三种分子生物学检测方法在肺结核诊断中的价值，具体分析如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年1—12 月在我院经病理、细菌学确诊的肺结核患者痰标本483 份开展研究。男性269 例，女性214 例，年龄10 ～74 岁，平均年龄（45.39±5.32）岁。本次研究纳入患者均符合《肺结核诊断标准》[2]中相关诊断标准，研究前患者签署相关知情同意书，医院伦理委员会对本次研究知情并批准进行。

1.2 仪器与试剂

ABI7300 荧光定量PCR 仪、BACTEC MGIT ™960 液体培养系统、GeneXpert 扩增检测仪。抗酸染色试剂、晶芯分枝杆菌核酸检测试剂盒、SAT-TB 试剂盒、MGIT 液体培养管、分枝杆菌联合药敏试剂盒、分枝杆菌培养添加试剂盒及MTB/RIF 检测试剂盒。

1.3 方法

涂片：依据标准化操作程序进行，选取标注干酪、脓样或其他可疑图片，在玻片正右侧约三分之二处均匀涂抹1×2cm 椭圆形痰膜。

标本前处理：吸取约5ml 至50ml 带螺旋盖离心管，加入2%NALC-NaOH 去污染并液化痰液，震荡20s 随后静置15 ～20min，加入PBS 至45ml，3000×g 离心15min 去上清，再加3ml PBS 中和Ph，混匀备用。

1.4 统计学方法

将数据纳入SPSS 21.0 统计软件中进行分析，使用χ2检验(SPSS Statistics 21.0)分别比较3 种分子生物学检测方法的阳性率，P ＜0.05 为差异有统计学意义。结果

2.结果

2.1 三种方法阳性率对比

483 份痰液标本中涂片阳性118 例（24.43%），MTB 960快速液体培养阳性239 例（49.48%），SAT-TB 检测阳性182 例（37.68%），TB-NTM-PCR 检测阳性184 例（38.10%），Xpert MTB/RIF 检测阳性257 例（53.21%）。三种检测方法阳性率差异有统计学意义（χ2=30.855，P=0.000），阳性率最高为Xpert MTB/RIF 法，其次为MTB 960 快速液体培养。

2.2 痰抗酸染色镜检涂阳培阳3 种分子生物学检测方法阳性率对比

483 份痰标本涂阳培阳117 例。SAT、TB-NTM-PCR 及Xpert MTB/RIF 法阳性率分别为83.90%、91.53%及96.61%，三种方法阳性率对比差异显著，P ＜0.05。详见表1。

表1 涂阳培阳时3 种分子生物学检测方法阳性率对比[n(%)]

2.3 痰抗酸染色镜检涂阴培阳3 种分子生物学检测方法的阳性率对比

483 份痰标本涂阴培阳124 例。SAT、TB-NTM-PCR 及Xpert MTB/RIF 法阳性率分别为62.90%、45.97%及80.65%，三种方法阳性率对比差异显著，P ＜0.05。详见表2。

表2 涂阴培阳时3 种分子生物学检测方法阳性率对比[n(%)]

2.4 痰抗酸染色镜检涂阴培阴3 种分子生物学检测方法的阳性率对比

483 份痰标本涂阴培阴234 例。SAT、T B-N TM-PCR 及Xpert MTB/RIF 法阳性率分别为1.71%、6.84%及16.67%，三种方法阳性率对比差异显著，P ＜0.05。详见表2。

表3 涂阴培阴时3 种分子生物学检测方法阳性率对比[n(%)]

2.5 痰抗酸染色镜检涂阳培阴3 种分子生物学检测方法的阳性率对比

483 份痰标本涂阳培阴7 例。SAT 法检测阳性4 例，TBNTM-PCR 法阳性7 例，Xpert MTB/RIF 法阳性7 例。

3.讨论

肺结核具有较强的传染性，早期诊断对于患者病情防治起到了至关重要的作用，以往临床上广泛应用的传统痰液细菌培养检测虽然是结核分歧杆菌诊断的金标准，但是实验过程较长，长达6 ～8 周，而痰液细菌涂片检测则容易受到外界因素的干扰，从而影响检查结果的准确性，导致频发误诊、漏诊的情况，使患者的病情有所延误，未得到及时的诊治，这两种方法临床应用于肺结核患者的诊断中均具有局限性[3]。

近些年来，随着我国医疗技术的不断发展，分子生物学开始广泛应用于临床诊断中，其中主要包括SAT、TB-NTMPCR 及Xpert MTB/RIF 法。Xpert Mtb/RIF 检测方法是具有独立化、自动化的一种诊断平台，其检测方法可以不受人为因素的感染，TB-NTM-PCR 检查方法是依据人体DNA 复制原理对结核分歧杆菌实施有效检测，SAT 检查方法是给予TMA 恒温扩增技术发展的一种新型核酸检测方法，其通过使用M-MLV反转录酶及极高转录活性的T7 R NA 多聚酶同时实现核酸恒温扩增和实时荧光检测，可以较为快速、直观的反应样本中MTB 的存在与否[4]。三种分子生物学检测方法都有着共同的优点，不仅操作简单、同时实验过程相对较短，且具有较高的生物安全性，可以对肺结核患者进行快速诊断，加之诊断准确性较高，所以在临床肺结核的诊断中具有较高的应用价值[5]。在本研究中，将痰直涂阳性和MTB 分离培养阳性作为金标准，同测序相较存在一定缺陷，从总体阳性率上看，Xpert MTB/RIF 总体阳性率53.21%，高于MTB 960 快速液体培养的49.48%，无法进一步判断Xpert MTB/RIF 检测总体阳性率53.21%是否一定由于MTB 960 法。学者蔡昕华[6]使用PCR、CPA 以及Xpert Mtb/RIF 检测肺结核，其结果表明该三种方法对肺结核患者诊断符合率同痰涂片法结果并无二异，PCR 诊断灵敏度76.87%，CP A 法诊断灵敏度61.29%，X pert Mtb/RIF 诊断灵敏度84.62%，结果类似，可见本结果并非偶然。综合来看，该三种分子生物学检测方法对肺结核诊断具备效果，在肺结核的早期诊断中具备优势。

综上所述，SAT、TB-NTM-PCR 及Xpert MTB/RIF 法在结核病的诊断中具有较好的辅助作用，其中Xpert MTB/RIF 法对涂阳、涂阴肺结核患者具有良好的检出率，具备应用价值。