软枣猕猴桃组织培养快繁体系的建立

王 禹

(黑龙江省农科院园艺分院，哈尔滨 150069)

软枣猕猴桃[Actinidaarguta(Sieb.et Zucc.)Planch.ex Miq]属于猕猴桃科(Actinidiace)猕猴桃属(Actinidia)多年生落叶藤本植物，又名软枣子，猕猴梨。其果实可食用，富含维生素C、矿物质元素、果胶质等多种有益元素，还可以加工成果酱、果汁、罐头以及糖果等多种食品；根可入药，有清热、健胃、止血，并对消化道癌症有一定的治疗和抑制作用；种子含油率达35.62%，是一种较好的干性油。软枣猕猴桃可应用在医药、科研、保健食品、园林绿化等多种行业中，是一项极具开发利用前景的自然资源。黑龙江省软枣猕猴桃野生种质资源丰富，许多优良的种质资源已被采集、驯化及利用。

植物组织培养具有生育期短、不受季节限制的特点，利用组织培养技术繁育软枣猕猴桃种苗，可提高繁殖速度，有利于野生种质资源的保存、驯化及利用。本试验以软枣猕猴桃的茎段为材料，研究适宜的生长、丛生芽增殖的培养基、继代时间以及生根培养基，并探讨了适宜的移栽条件，以期建立软枣猕猴桃组织培养快繁体系，提高种苗的繁殖速度。

1 供试材料

试验以黑龙江省采集野生资源野生驯化品系雌株4021、雄株4023的一年生嫩枝茎段为材料；采集地为黑龙江省农科院园艺分院；采集时间为6月末～8月初。

2 实验内容与方法

2.1 软枣猕猴桃茎段生长培养适宜的培养基

将采集的茎段剪成1 cm带一个芽的小段，自来水流冲洗1 h，置于超净工作台中，酒精消毒1 min，蒸馏水冲洗1次，0.1%的升汞消毒7min，蒸馏水冲洗3次，接种到生长培养基上。生长培养基采用6-BA+AA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 琼脂 pH 5.4～5.8；培养温度为22～ 25 ℃，光照时间14 h/d。调查6-BA、IAA对茎段萌发的影响。

2.2 软枣猕猴桃增殖培养适宜的培养基

将萌发的软枣猕猴桃芽转接到增殖培养基上，增殖培养基采用6-BA+IAA+ZT+30 g/L 蔗糖+7 g/L 琼脂 pH 5.4～5.8；培养温度为22～25 ℃，光照时间14 h/d。调查6-BA、IAA、ZT对草莓丛生芽增殖的影响。

2.3 软枣猕猴桃增殖培养适宜的继代时间

待芽生出丛生芽且茎节间伸长后，将茎段切成0.5 cm带芽的小段，接种到增殖培养基上继续增殖，调查继代时间茎段增殖的影响。

2.4 软枣猕猴桃组培苗生根的适宜的培养基

将组培苗的茎段切成0.5 cm带芽的小段，转入到生根培养基中，生根培养基采用MS或1/2MS+IBA+IAA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 琼脂pH 5.4～5.8；培养温度为22～25℃；光照时间12 h/d。调查MS或1/2MS、IBA、IAA对软枣猕猴桃生根的影响。

2.5 软枣猕猴桃组培苗适宜的移栽条件

组培苗移栽14 d后，调查遮光率、组培苗高度、根系长度、空气湿度及环境温度对移栽成活率的影响。

3 结果与分析

3.1 适宜软枣猕猴桃腋芽萌发的培养基筛选

表1 生长激素对软枣猕猴桃腋芽萌发的影响

腋芽接种15 d后陆续开始萌发，从表1得出添加1～2 mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L IAA可促进腋芽萌发，且芽体长势强壮。

3.2 适宜软枣猕猴桃丛生芽增殖的培养基筛选

表2 生长激素对丛生芽增殖的影响

从表2得出，以0.5～1 mg/L 6-BA+0.5～1 mg/L ZT增殖效果较好；6-BA达到3 mg/L，叶片尖端发白，生长发育不良。

3.3 适宜软枣猕猴桃丛生芽增殖培养的继代时间

表3 继代时间对丛生芽增殖的影响

从表3得出，丛生芽生长至40 d时增殖系数提高明显，且茎伸长较多；生长50 d以后生长势衰弱，叶片及茎变白。因此，软枣猕猴桃40 d继代一次最佳。

3.4 适宜软枣猕猴桃组培苗生根的培养基筛选

表4 生长激素对组培苗生根的影响

生根实验得出，1/2MS比MS生根快，根生出后MS比1/2MS根粗壮；MS比1/2MS植株长势快，添加IAA植株长势亦快，驯化时植株高、根系长不利于成活。建议培养基使用1/2MS，且不添加IAA，以1/2MS+0.2～0.5 mg/L IBA培养基最佳。

3.5 软枣猕猴桃组培苗移栽适宜条件

实验得出，软枣猕猴桃组培苗移栽时，组培苗矮、根短,移栽成活率较高；移栽后光照较弱不利于软枣猕猴桃组培苗产生新根；环境温度低或者空气湿度小都不利于组培苗新根的生长。从表5得出，软枣猕猴桃组培苗移栽的适宜条件为组培苗高度不超过1.5 cm；根系长度不超过0.5 cm；遮光率不高于60%；空气湿度不低于40%；环境温度不低于15 ℃、不高于30 ℃，移栽成活率可达到93%。

表5 软枣猕猴桃组培苗移栽适宜条件筛选

4 结论与讨论

软枣猕猴桃快繁体系的步骤为：6月末～8月初，采集一年生嫩枝茎段，剪成1 cm带一个芽的小段，自来水流冲洗1 h，置于超净工作台中，酒精消毒1 min，蒸馏水冲洗1次，0.1%的升汞消毒7 min，蒸馏水冲洗3次，接种到生长培养基上。生长培养基采用1～2 mg/L 6-BA+0.1～0.5 mg/L IAA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 琼脂pH 5.4～5.8；培养温度为22～25 ℃，光照时间14 h/d。将萌发的软枣猕猴桃芽转接到增殖培养基上，增殖培养基采用0.5～1 mg/L 6-BA+0.5～1 mg/L ZT+30 g/L 蔗糖+7 g/L 琼脂pH 5.4～5.8、培养温度为22～25 ℃、光照时间14 h/d。待芽生出丛生芽且茎节间伸长后，将茎段切成0.5 cm带芽的小段，继续接种到增殖培养基上，40 d转一次瓶，增殖系数6.3。将组培苗的茎段切成0.5 cm带芽的小段，转入到生根培养基中，生根培养基采用1/2MS+0.2～0.5 mg/L IBA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 琼脂pH 5.4～5.8；培养温度为22～25 ℃；光照时间14 h/d。软枣猕猴桃组培苗高度不超过1.5 cm、根系小于0.5 cm时，转至移栽环境开盖放置1 d。移栽基质采用草炭土，拌入30%的多菌灵(多菌灵∶土1∶100)，喷洒73%炔螨特乳油2000倍液，覆盖塑料布消毒3 d。将组培苗洗净根部培养基栽入育苗盘中，育苗盘采用72穴，厚度5 cm。移栽后遮光率不高于60%，空气湿度不低于40%，环境温度不低于15 ℃、不高于30 ℃，移栽成活率可达到93%。

软枣猕猴桃组培苗增殖时，随着6-BA使用浓度的增高，丛生芽产生的越多，但出现叶片尖端发白，生长发育不良的现象，要控制激素使用量；本实验统计的增殖系数为1个芽可产生的丛生芽数量，未计算节间切割可产生的增殖量，因此可适当添加生长激素，促使丛生芽节间伸长，可以提高增殖量。生根实验得出，1/2MS比MS生根快，根生出后MS比1/2MS根粗壮；MS比1/2MS植株长势快，虽然MS比1/2MS组培苗长势优良，但驯化时植株高、根系长不利于驯化成活。