芙蓉叶痔疮栓的制备与药理作用研究

黄赛金，尹爱武，高鹏飞

(1.湖南工程学院 材料与化工学院，湘潭 411104；2.大理大学 药学与化学学院，大理 671000)

“痔”是直肠下端黏膜下和肛管或肛缘皮下的静脉曲屈、扩大所形成的静脉团.痔疮是最常见的肛肠疾病，发病率增高，有“十人九痔”之说[1].临床主要表现便血、脱出、分泌粘液、疼痛和贫血等症状[2].临床上,多数痔疮人群都会出现不同程度的出血，且多次出血的发生率也相对较高，长期反复出血，会导致缺铁性贫血[3].本研究对临床报道的芙蓉叶痔疮栓(黄芪、芙蓉叶、当归、连翘、地榆炭、芒硝、冰片组成)进行动物抗炎、止痛、止血及抗溃疡实验，探讨其药理活性，为临床应用进一步提供理论支持.

1 材料与仪器

昆明种小鼠(20±2)g；SD大鼠(200±20)g.黄芪、芙蓉叶、当归、连翘、地榆炭购于广州清平药材大市场；芒硝、冰片均为分析纯.GJ-8402热板测痛仪，浙江宁海县白石电子医药仪器厂；sartorius BP110S电子天平；SHB-Ⅲ循环水式真空泵，郑州长城科工贸易有限公司；N-1000S-WA旋转蒸发仪，日本EYELA.

2 方法

2.1 药物的提取

按处方量将各种药物(芒硝、冰片除外)，加10倍量水煎煮90 min，过滤，滤渣加8倍量水，煎煮90 min，过滤，合并二次滤液.减压浓缩成清膏备用.

2.2 栓剂的制备

将30%的聚乙二醇1500和45%的聚乙二醇6000在水浴上加热至全熔，将清膏、芒硝及冰片倾入并充分搅拌均匀，然后趁热倾入涂有润滑剂的栓模中至稍溢出模口.冷却、凝固后，削去溢出部分，开启栓模，推出栓剂，包装即得.

2.3 二甲苯所致小鼠耳肿胀实验

取昆明种雄性小鼠40只，按随机分成4组，即空白组(给药量栓剂基质0.10 g/只)、芙蓉叶痔疮栓高(给药量0.15 g/只)、中(给药量0.10 g/只)、低(给药量0.05 g/只)剂量组.将20 μL二甲苯涂于小鼠右耳前后两面，30 min后，各鼠右耳再分别涂以空白基质或药物，1 h后拉颈处死动物，以湿棉球将耳上药物擦净，沿耳廓线剪下两耳，用9 mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，每鼠右耳片质量减去左耳片质量即为肿胀度，按下式计算肿胀抑制率.

肿胀抑制率(%)=

2.4 大鼠足跖肿胀实验

SD大鼠40只，雌雄各半，分组同小鼠耳肿胀实验.各组给药量，空白组(栓剂基质0.3 g/只)，芙蓉叶痔疮栓高剂量组(0.4 g/只)、中剂量组(0.3 g/只)、低剂量组(0.2 g/只).将基质或药物涂布在小鼠右足跖，包括趾蹼之间，用敷料将足包裹固定，连续10 d.末次给药30 min后，排水测量法测定大鼠右后足趾体积一次.于大鼠右后足跖部皮下注射新鲜鸡蛋清(0.1 mL)后1、2 、3、4 、5 h分别测量右后足跖体积.致炎后体积减去致炎前体积等于肿胀度，观察足跖肿胀高峰时间和消退时间，比较各组肿胀度的差异.

2.5 小鼠出血时间的测定(剪尾法)

取小鼠40只，雌雄各半.随机分为组，分组与给药量同小鼠耳肿胀实验.将基质或药物涂布在小鼠尾部，每天1次，连续给药7 d.末次给药1 h后擦去药物，小鼠尾3 mm处横断，待血液自行流出，每隔30 s用滤纸吸去血滴，直至滤纸吸时无血为止，计算出血时间.

2.6 小鼠镇痛实验

利用热板测痛仪(热板温度为 55±0.5 ℃)，取两次痛阈平均值为基础痛阈(痛阈值为将小鼠放置热板上至其舔后足的时间，舔足时间小于5 s或者大于30 s者弃之不用)，基础痛阈在5～30 s内者为合格动物.将100只雌性小鼠随机分组，分组与给药量同大鼠足跖肿胀实验.将基质或药物涂布在小鼠四肢足跖，包括趾蹼之间，用敷料将足包裹固定，给药30 min后去除药物.给药后15 min、30 min分别测定小鼠痛阈值.如60 s仍无反应以60 s作为该小鼠痛阈值.

2.7 大鼠肛门溃疡实验

大鼠用乙醚麻醉后，将用99%冰醋酸溶液浸泡过夜的滤纸片(直径6 mm)，贴于大鼠肛门周围粘膜处，每0.5 min换一次滤纸片，共贴4次.第2 d观察溃疡程度，并按溃疡程度随机将40只SD大鼠分成5组，分组与给药量同小鼠耳肿胀实验.将基质或药物涂布在大鼠肛门周围粘膜处，每天1次，连续给药10 d.其间，每间隔1天观察1次溃疡愈合情况并根据评分标准进行评分.评分标准：有溃疡渗液给1分；有少许溃疡渗液给2分；有焦痂基本愈合给3分；完全愈合给4分.

2.8 统计学方法

3 结果与讨论

3.1 二甲苯所致小鼠耳肿胀实验

结果表明，与空白组相比，芙蓉叶痔疮栓高、中、低剂量组均能够显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀程度(P<0.01).高剂量组小鼠耳廓肿胀抑制率达64.8%，结果如表1所示.痔疮是人类所特有的疾病，由于其解剖、生理的原因，难于用四肢行走的动物制造痔疮的理想模型.因此痔疮在药效学上没有固定的动物模型，本实验根据痔疮临床症状即红肿、出血，疼痛应用抗炎、止血、镇痛、抗肛门溃疡的实验研究其药理学作用.

组别肿胀度/mg抑制率/%空白12.8±4.2-高剂量4.50±1.21)64.8中剂量 8.20±1.31)35.9低剂量9.10±1.91)28.9

注：与空白组比较1)P﹤0.01.

3.2 大鼠足跖肿胀实验

结果表明，与空白组相比，从1 h至5 h，芙蓉叶痔疮栓高剂量组大鼠足跖肿胀度显著降低(P<0.01)，在第5 h，该组大鼠足跖肿胀度是空白组的48%.2 h至5 h，芙蓉叶痔疮栓中、低剂量组与空白组均有显著性差异(P<0.05)，在第5 h，中、低剂量组大鼠足跖肿胀度分别是空白组的69.6%、74.3%.复方芙蓉叶痔疮栓高剂量组与中、低剂量组比较均有显著性差异(P<0.05)，表明给药后大鼠足跖肿胀度与剂量有关.结果如表2所示.

3.3 小鼠出血时间的测定

空白组小鼠出血时间为6.34±2.09 min；芙蓉叶痔疮栓高、中、低剂量组小鼠出血时间分别为3.63±1.47，4.22±1.56，4.79±1.31 min.结果表明，与空白组相比，芙蓉叶痔疮栓高、中、低组有明显的止血作用(P<0.05).

3.4 小鼠镇痛实验

结果表明，芙蓉叶痔疮栓各剂量组有明显著的镇痛作用，与空白组相比有显著性差异(P<0.01).给药15 min后芙蓉叶痔疮栓高、中、低剂量组小鼠的痛阈值分别为36.4 s、28.5 s、26.7 s，给药30 min后，各组的痛阈值分别降至32.8 s、27.3 s、25.2 s.给药30 min后小鼠的痛阈值较给药15 min后要低，其可能的原因是药物在体内代谢，降低了体内的药物浓度.在给药15 min、30 min后，高剂量组小鼠的痛阈值要显著低于中、小剂量组(P<0.01)，表明给药后小鼠的痛阈值与剂量有关.结果如表3所示.

表2 痔疮栓对鸡蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响

注：与空白组比较1)P<0.01，2)P<0.05；与中、低剂量组比较3)P<0.05.

表3 痔疮栓对小鼠的镇痛作用

注：与空白组比较1)P<0.01；与给药前比较2)P<0.01；与中、低剂量组比较3)P<0.01.

3.5 大鼠肛门溃疡实验

结果表明，各给药组在不同时间分别同空白组相比，对醋酸所致的大鼠肛门溃疡，在给药的3～7 d对溃疡积分无统计学差异；在给药后第9 d、11 d，痔疮栓高、中剂量组与空白组比较有显著差异(P<0.05).在给药第9 d、11 d，芙蓉叶痔疮栓高剂量组抗大鼠肛门溃疡的积分显著高于中、低剂量组(P<0.01).表明芙蓉叶痔疮栓对冰醋酸所致大鼠肛门溃疡的修复作用与剂量有关.结果如表4所示.

表4 痔疮栓对冰醋酸所致大鼠肛门溃疡的影响

注：与空白组比较1)P<0.05；与中、低剂量组比较2)P<0.01.

4 结论

发生痔疮的主要原因有：便秘，久坐少动，饮食习惯不良等[4].中医学认为痔疮的发病主要与风、湿、热、燥、气虚、血虚等有关，刘俊等研究结果显示，脏腑积热、湿热下注以及热毒郁结等是引起痔疮的重要因素[5-6].芙蓉叶痔疮栓是纯中药复方制剂，由黄芪、芙蓉叶、当归、连翘、芒硝、冰片等组成，其中冰片可凉血止血，对痔疮热症便血治疗效果显著[7].

本研究结果表明，芙蓉叶痔疮栓有抗炎、止血、镇痛及抗溃疡作用.栓剂是一种给药方便，副作用小的治疗痔疮的理想剂型，该复方有望开发成为一种临床栓剂用药.