金魔芋炭疽病病原菌生物学特性研究

和丽舒，于兴李

（昌宁县农业科学技术推广所，云南昌宁678100）

魔芋（Amorphophallus konjac）又名蒟蒻，是天南星科，生长在海拔250～2500 m的山间多年生草本植物。魔芋含有十多种氨基酸，还含有很多矿质元素和食物纤维，对防治糖尿病、高血压有特效，近年来种植面积不断扩大。金魔芋是新发现的一个特有珠芽魔芋类品种，其葡甘聚糖含量远高于花魔芋、白魔芋及其他珠芽类魔芋品种，具有很好的加工和推广价值。

炭疽病发病初期在叶片上显现圆形红褐色小斑，后期扩展成深褐色圆形病斑，中间部位则由灰褐色转为灰白色，最后病斑转为黑褐色，末期病斑穿孔，病斑多时融合成片导致叶片干枯，病叶易脱落。本试验通过不同培养基、不同pH值对魔芋炭疽病病原菌生物学特性进行了初步研究，为魔芋炭疽病害防治提供依据。

1 材料与方法

1.1 金魔芋炭疽病害株来源

染病的金魔芋叶片来自保山市龙陵县，经采集后带回实验室中冷藏保存，待用。

1.2 金魔芋病原菌地分离和纯化

按常规方法进行病原菌地分离和纯化。在发病的魔芋叶片病健交界处切取3 cm×3 cm的组织块，经75 %乙醇处理1 min后，用0.1 %的升汞表面消毒3 min，在灭菌水中漂洗3次，每次漂洗时间为3 min，最后除去组织表面多余水分，置于马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）平板上，于30 ℃培养72 h后挑取菌落边缘菌丝进行纯化。

1.3 病原菌致病性测定

将PSA上培养5 d的菌落切成长10 mm，宽5 mm的菌块，选健康的金魔芋植株叶片，用70%的乙醇进行表面消毒后，采用针刺法进行接种。在叶片上接种带菌PSA培养基，采用湿润的脱脂棉保湿，对照叶片滴灭菌水，每处理3次重复。接种的叶片套袋保湿，并将植株置于25～30 ℃的温室中，每隔2 d观察发病情况。

1.4 病原菌形态学特征观察

取纯化后的菌种，在无菌操作台中用肉眼观察、描述菌落形态。取长势好的菌落，用载玻片做成切片，在光学显微镜下观察分生孢子及分生孢子器的形态特征，并测其大小。根据病原菌产孢特征及其在PSA上的形态特征，参照文献《真菌鉴定手册》进行病菌鉴定。

1.5 病原菌生物学特性研究

1.5.1 不同培养基对病原菌生长的影响

供试培养基为马铃薯蔗糖培养基、水琼脂培养基、胡萝卜培养基、燕麦片培养基、番茄培养基，取上述培养的菌落，用镊子挑取长势好的菌丝于培养基上，每个重复3次，然后置于30 ℃恒温箱中培养，4 d后用十字交叉法测量菌落直径并观察记录菌落生长势。

①PSA（马铃薯蔗糖）培养基。用天平称取洗净去皮马铃薯20 g，切碎后放入锅中煮沸30 min，将过滤后的溶液定容至100 mL，加入2 g琼脂和2 g蔗糖，搅拌均匀后移入锥形瓶中，包扎好后放入121 ℃灭菌锅中，灭菌40 min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。

②WA（水-琼脂）培养基。在100 mL蒸馏水中加入2 g琼脂，搅拌均匀后移入锥形瓶中，用报纸包好瓶口，再用橡皮筋扎好。放入121 ℃灭菌锅中，灭菌40 min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。

③CA（胡萝卜）培养基。用天平秤取洗净的胡萝卜20 g，切碎后放入锅中煮沸30 min，将过滤后的溶液定容至100 mL，加入2 g琼脂，搅拌均匀后移入锥形瓶中，包扎好后放入121 ℃灭菌锅中，灭菌40 min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。

④OA（燕麦）培养基。用天平秤取3 g燕麦，放入锅中加水煮沸30 min，将其过滤后定容至100 mL，加入2 g琼脂，搅拌均匀后移入锥形瓶中，包扎好后放入121 ℃灭菌锅中，灭菌40 min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。

⑤TA（番茄）培养基。番茄捣碎后取其汁液20 g，加水定容至100 mL，加入琼脂2 g，搅拌均匀后移入锥形瓶中，包扎好后放入121 ℃灭菌锅中，灭菌40 min。待温度适宜后取出，在超级工作台内倒入培养皿中，待冷凝备用。

表1 分生孢子大小测定值

1.5.2 不同 pH 值对病原菌生长的影响

以PSA培养基为基础培养基，加入HCL（1mol/L）和NaOH（1mol/L）将培养基分别调成1～10不同的pH值，挑取之前培养好的菌落于培养基上，不同pH值的培养基处理4次，处理好放入30℃恒温箱中培养，4 d后用十字交叉法测量菌落直径并观察记录菌落的生长势。

2 结果分析

2.1 病原菌地分离结果与形态特征观察

通过分离得到的魔芋炭疽菌在PSA平板上30 ℃ 培养5 d的菌落直径为4～5.5 cm，菌落为圆形或近圆形，边缘整齐，气生菌丝初为白色，后渐变为灰白色或深灰色，培养7 d后靠近菌落中央产生轮纹状排列的分生孢子盘，分生孢子单胞，无色，镰刀形，产孢量较多，分生孢子大小（18～23）μm×（3.3～4）μm，平均为21.878 μm × 3.427 μm（表1）。由侧生分生孢子梗产生，厚垣孢子球形，表面不光滑，多个在菌丝中间串生；分生孢子萌发的芽管深褐色，有隔，棍棒状，边缘整齐。根据上述病原菌的培养性状和形态学特征，参照真菌分类相关文献《真菌鉴定手册》的描述，初步鉴定该病原菌为炭疽菌（Colletotrichum Corda）。

2.2 病原菌致病性测定结果

将炭疽菌对魔芋叶片进行针刺回接，7 d后针孔周围开始出现褐色圆斑，并逐渐往外扩散，15 d后病斑症状加重，呈不断扩大趋势，发病率达到100%，而对照组除了针刺处有黄白色愈合伤疤，其他正常，发病率为零。

表2 不同培养基对病菌生长情况测定

表3 不同pH对病原菌菌丝生长情况的测定

2.3 病原菌的生物学特性

2.3.1 不同培养基对病原菌生长的影响

测定结果表明，菌落在PSA培养基上生长最好，30℃ 培养 4 d 的菌落直径为72～88 mm，菌丝生长迅速。其次是番茄培养基。在胡萝卜和燕麦培养基中长势稀薄，而在水琼脂培养基上则不能生长（表2）。

2.3.2 不同pH值对病原菌生长的影响

魔芋炭疽病病原菌对pH值的反应以中性生长最好，适宜的pH值为3、6、7、8，以pH值等于7为最适，pH值小于3或大于9时，菌丝不生长（表3）。

4 结 论

从试验结果可知，魔芋炭疽病病原菌（Colletotrichum）在所供试的PSA培养基、番茄培养基、燕麦培养基、胡萝卜培养基上均能生长，而在水琼脂培养基上则不能生长。由此可知炭疽菌地生长需要一定的碳源和营养物质。最有利于病原菌生长的碳源为蔗糖，培养20 d左右会有孢子产生，其余供试培养基均不产生孢子。不同培养基对病菌生长的影响试验结果说明，该病原菌对碳源和营养物质虽有一定的需求，但并不高。

对生长环境测试结果显示，该菌能够在pH 值3～9的范围内生长，而pH值为 7最适合生长，在弱酸弱碱的环境下炭疽菌均能生长，不同pH值对病原菌生长影响试验结果说明，魔芋炭疽菌对土壤酸碱度要求并不高，对土壤的适应能力较强。

魔芋炭疽菌对碳源、营养物质和酸碱度要求不高，良好的适应能力加大了其病害发生的可能，加之近年来魔芋种植面积不断扩大，更使传染概率增加。