新型DBI试剂盒在食品微生物生化鉴定中的应用

吴艳辉，王杰伟，何艳玲

(北京陆桥技术股份有限公司，北京 100123)

病原微生物是食品安全最大的威胁之一。随着经济全球化进程的加快，国际食品贸易的迅速增加，食品中病原微生物的准确快速鉴定越来越受到重视[1-4]。已有食品中微生物检验主要采用生化鉴定方法[5-8]，该方法操作过程复杂，并具有一定的危险性[9]。基于实际生产的需求，本实验室研制出一种克罗诺杆菌属和单增李斯特氏菌干制生化鉴定(DBI)试剂盒，通过标准菌株和样品分离菌株的鉴定试验，并与生化管和API 20E细菌鉴定系统比对，验证其鉴定结果的准确性，以期满足大量样品准确、简便、高效的检测需求。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种

标准菌株：阪崎克罗诺杆菌ATCC29544、ATCC51329，大肠埃希菌CMCC44103、ATCC25922，单增李斯特氏菌ATCC19111、ATCC19115，绵羊李斯特氏菌ATCC19119，均由本实验室保存。

样品分离菌株：阪崎克罗诺杆菌疑似菌株14株分离自市售婴幼儿奶粉；单增李斯特氏菌疑似菌株30株分离自市售乳制品、肉制品及蔬菜。

1.1.2 培养基及试剂

脑心浸出液(BHI)肉汤、大豆酪蛋白琼脂(TSA)培养基、阪崎克罗诺杆菌生化鉴定套装及DBI试剂盒、单增李斯特氏菌生化鉴定套装及DBI试剂盒均由北京陆桥技术股份有限公司提供；API鉴定系统及配套鉴定试剂为法国生物梅里埃公司产品。

1.2 方法

1.2.1 菌株活化

将标准菌株及样品分离菌株分别接种至BHI肉汤，36 ℃培养18～24 h，使其活化，并转接至TSA培养基备用。

1.2.2 菌株生化鉴定比对试验

标准菌株及样品分离菌株生化管鉴定试验分别按照各自对应的生化鉴定套装说明书进行，DBI试剂盒鉴定试验与API细菌鉴定系统分别按照各自对应的说明书进行。比较3种生化鉴定试验结果的准确性。

2 结果与分析

2.1 标准菌株的对比试验

阪崎克罗诺杆菌及单增李斯特氏菌传统生化管与DBI试剂盒、API生化鉴定条鉴定结果分别见表1和表2。由上述结果可知，在阪崎克罗诺杆菌及其质控菌大肠埃希菌标准菌株鉴定中，DBI试剂盒与生化管对其所有生化项目鉴定结果完全一致，与GB 4789.40—2010《食品微生物学检验 阪崎克罗诺杆菌检验》判定标准一致；在李斯特氏菌标准菌株鉴定中，培养24 h后，DBI试剂盒鉴定结果与GB 4789.30—2010《食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》判定标准一致，而传统生化管中的鼠李糖与木糖则为假阴性，需继续培养至48 h才出现阳性结果，表明DBI试剂盒在保证鉴定结果准确的前提下，将鉴定时间缩短了24 h左右。

表1 阪崎克罗诺杆菌生化鉴定结果

注：-表示阴性，+表示阳性，/表示未检出。表2同。

表2 单增李斯特氏菌生化鉴定结果

2.2 样品分离菌株的对比试验

DBI试剂盒与生化管对样品分离菌株鉴定结果见表3。由表可知，DBI试剂盒与生化管对从样品中分离出的阪崎克罗诺杆菌疑似菌株鉴定结果完全一致，对单增李斯特氏菌疑似菌株鉴定结果的相符率也较高，达到90%以上，表明DBI试剂盒的鉴定结果准确，可用于食品中致病菌的生化鉴定。

表3 DBI试剂盒与生化管生化鉴定结果的比较

3 讨论

本研究研制的DBI试剂盒是将生化鉴定所需的所有生化试剂，经过特殊工艺干制于特制的生化鉴定卡上，接入菌液后培养到一定时间，即可通过颜色变化或滴加试剂后变色来观察结果。DBI试剂盒将生化试剂进一步微量化，在菌悬液浓度不变的条件下，增加了体系中的菌体浓度，从而加快了反应速度，缩短了检测时间，尤其是在单增李斯特氏菌检测中，糖类发酵项目反应时间相对于生化管大约缩短24 h。通过对标准菌株的鉴定试验，DBI试剂盒准确率达到100%，与生化管同时对从样品分离出的阪崎克罗诺杆菌和单增李斯特氏菌疑似菌株进行鉴定，两者相符率分别达到100%和94.1%。综上所述，本试剂盒操作简单，对于大批量样品检测具有很高的实用价值，该检测方法耗时短，提高了检测效率，且准确度高，与传统液体生化管的鉴定结果基本上完全一致，在食品致病菌检测中应用前景广阔。