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二十五种中草药对烟草普通花叶病毒病的防治效果

2020-03-16任琼丽

南方农业·上旬 2020年1期
关键词:中草药防治效果烟草

任琼丽

摘   要   烟草普通花叶病毒病在云南省玉溪烟区发生日趋严重,影响烟叶产量和品质,威胁玉溪烟草生产,目前尚无一种较为理想的防治药剂。试验测定了25种中草药在普通烟品种K326上对烟草普通花叶病毒病的防治效果及对烟叶中丙二醛、类黄酮和总酚含量的影响。结果表明:烟株接种烟草普通花叶病毒24 h后,分别喷25种中草药的粗提物200倍液,14 d后,烟叶中丙二醛的含量显著低于清水对照,类黄酮和总酚的含量显著高于对照;对烟草花叶病的防效较好的是射干、柴胡、五倍子和虎杖,防治效果分别为57.95%、53.33%、50.26%和48.72%。

关键词    中草药;烟草;普通花叶病毒;防治效果

中图分类号:S435.72    文献标志码:A    DOI:10.19415/j.cnki.1673-890x.2020.1.006

烟草普通花叶病毒病是一种在世界各烟区广泛分布、局部地区严重流行的烟草病害,在我国各产烟区普遍发生[1]。近年来,云南省玉溪烟区普通花叶病毒病发生日趋严重,且有不断上升趋势,严重影响了烟叶的产量和品质,威胁玉溪烟草生产。前人对烟草花叶病毒病的防治做了一些研究,但由于病毒扩散、传播方式特殊,与寄主的寄生关系和复制(增殖)方式复杂及农药自身的特性等,迄今為止尚无一种较为理想的防治药剂[2]。中草药的应用在我国有着古老的历史,在人、畜病毒病的防治中发挥着重要作用[3]。从植物中筛选抗病毒物质是开发植物抗病毒抑制剂的重要途径之一[4]。本研究旨在筛选能有效防治烟草花叶病毒病的中草药,为烟草花叶病毒病防治探索新的途径[5]。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试中草药:供试的25种中草药(见表1),购自玉溪市一心堂药店,厂家为云南鸿翔药业。

供试作物:普通烟(Nicotiana tabacum L.),品种为K326(玉溪中烟种子有限公司生产)。漂浮育苗,于6~7叶时进行盆栽。

供试毒源:供试毒源Tobacco mosaic virus(TMV)保存在普通烟上。采用常规汁液摩擦法接种。病毒接种液由病叶和PBS缓冲液按1∶20(w/v)的比例加少量金刚砂研磨后,用4层纱布过滤所得[6-7]。

1.2 试验方法

1.2.1 中草药粗提物的制备

用中药粉碎机将中草药粉碎成粉末,在室温下加入样品量6倍的分析甲醇(V/M),浸泡72 h,期间不断搅拌,使其充分溶解,用漏斗过滤后,蒸发浓缩获得膏状提取物,置于4 ℃冰箱保存[8]。

1.2.2 接种

烟株盆栽10 d后接种病毒,采用常规汁液摩擦法接种。接种后用清水冲洗,24 h后喷中草药粗提物200倍液,对照喷清水。试验设26个处理,每种药剂为1个处理,以清水为对照,每处理重复3次,每次重复20株。

1.2.3 病情调查

接种14 d后调查各处理烟株的发病率和病情指数,计算防治效果。病害分级与调查方法按照国标GB/T 23222-2008《烟草病虫害分级及调查方法》进行,以株为单位,分为:0级,全株无病;1级,心叶脉明或轻微花叶,病株无明显矮化;3级,1/3叶片花叶但不变形,或病株矮化为正常株高的3/4以上;5级,1/3至1/2叶片花叶,或少数叶片变形,或主脉变黑,或病株矮化为正常株高的2/3至3/4;7级,1/2至2/3叶片花叶,或变形或主侧脉坏死,或病株矮化为正常株高的1/2至2/3;9级,全株叶片花叶,严重变形或坏死,或病株矮化为正常株高的1/2以上[9]。发病率、病情指数、防治效果计算公式如下:

发病率=(发病株数/调查总株数)×100%

病情指数=[∑(各级病株×该病级值)/(调查总病株×最高级值)]×100

防治效果=[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100%

1.2.4 烟株生理指标的测定

病情调查后,取样测定烟叶的丙二醛、类黄酮和总酚含量。

1.2.4.1丙二醛(MAD)测定

丙二醛(MAD)含量的测定采用硫代巴比妥酸法[10-11],具体过程为:称取各处理新鲜叶片0.5 g,加入5%三氯乙酸(TCA)5 mL,研磨后所得匀浆在3 000 r·min-1下离心10 min,取上清液2 mL,加入0.67%硫代巴比妥酸(TBA)2 mL,混合后在100 ℃水浴上煮沸30 min,冷却后再离心一次,最后以0.67%硫代巴比妥酸(TBA)溶液为对照,分别测定上清液在450 nm、532 nm、600 nm处的吸光度值,并按公式算出MDA浓度,再算出单位鲜量组织中的MDA含量(nmol·g-1)。

C(μmol·L-1)=6.45(A532-A600)-0.56A450

1.2.4.2类黄酮、总酚含量测定

类黄酮、总酚含量的测定参照余清等[12-15]的方法进行。具体过程为:用电子天平称取0.500 g新鲜叶片,剪1~2 mm的小块,加1%HCl的甲醇溶液5 mL提取24 h(4 ℃),取0.5 mL提取液用蒸馏水稀释至25 mL,测定OD280和OD325,类黄酮含量以OD325/g鲜重表示,总酚含量以OD280/g鲜重表示。

1.3 数据处理

试验数据采用Excel 2007进行数据统计,DPS7.0分析软件进行显著性测验,Duncans新复极差法进行多重比较。

2 结果与分析

2.1 25种中草药对烟草普通花叶病的防治效果

喷药14 d后调查各处理烟株的发病情况,计算病情指数和防治效果,结果见表2。由表2可见,防治效果最好的是射干,防效达57.95%;其次是柴胡、五倍子和虎杖,防效分别为53.33%、50.26%和48.72%;再次是连翘、贝母、玄参、夏枯草,防效分别为44.61%、43.59%、41.54%、41.54%;甘草、黄连、佩兰、苦杏仁、桔梗、槐花、板兰根和地榆的防效在30.26%~39.49%;其余处理的防效都低于30%。

2.2 25种中草药对烟叶丙二醛含量的影响

测定各处理烟叶的丙二醛含量,结果表明(见表3),对照烟叶的丙二醛含量最高,达13.83 nmol·g-1;最低的是射干,烟叶丙二醛含量为7.58 nmol·g-1;枙子、黄花、黄岑、知母、牡丹皮、地黄、鱼腥草、薄荷、板兰根、地榆、淡竹叶、槐花、桔梗处理的烟叶丙二醛含量高于10 nmol·g-1;其余处理的烟叶丙二醛含量都低于10 nmol·g-1。

2.3 25种中草药对烟叶类黄酮含量的影响

测定各处理烟株烟叶内类黄酮的含量,结果表明(见表3),对照处理的烟株中类黄酮含量最低,为0.501 OD325/g;枙子、黄花、黄岑、知母处理的烟株类黄酮含量低于1.000 OD325/g;其余处理的烟株烟叶类黄酮含量均高于1.000 OD325/g,其中射干处理的烟株烟叶类黄酮含量最高,达1.553 OD325/g。

2.4 25种中草药对烟叶总酚含量的影响

测定各处理烟叶的总酚含量,结果表明(见表3),射干处理的烟叶总酚含量最高,达1.779 OD280/g;对照处理的烟叶总酚含量最低,为0.567 OD280/g;射干、五倍子、虎杖、连翘、贝母、夏枯草、黄连、苦杏仁、佩兰、柴胡、玄参、桔梗、淡竹叶、地榆、槐花和板兰根处理的烟叶总酚含量高于1.000 OD280/g。

3 结论与讨论

试验结果表明,烟株接种普通花叶病毒24 h后,分别喷25种中草药的粗提物200倍液,7 d后,25种中草药处理的烟叶中丙二醛含量显著低于清水对照,类黄酮和总酚含量显著高于对照;其中对烟草花葉病的防效较好的是射干(防效达57.95%)、柴胡(防效达53.33%)、五倍子(防效达50.26%)、虎杖(防效达48.72%)。

MDA含量作为细胞膜损伤程度的生理指标和膜质过氧化指标,反映了细胞质过氧化程度和植物对逆境条件的反应强弱[15-16],总酚和类黄酮含量与植物抗病性关系密切[17-21]。本研究中射干、柴胡、五倍子、虎杖等中草药能降低烟叶中丙二醛含量,提高烟叶类黄酮、总酚含量,从而增强烟草的抗病性,但其对烟草的抗病活性物质和抗病机理还有待进一步研究。

植物病毒病有“植物癌症”之称,目前还没有一种植物病毒病的理想防治药剂[22]。中草药中普遍存在生物碱类、苷类、有机酸、黄酮类、氨基酸、挥发油、酚、醛、鞣质、多糖和单糖等抗病毒物质[23],这些物质易在植物体内运输,在环境中易被降解,不易造成环境污染和残留问题。刘学端等[24]利用商陆、甘草、连翘等几种中草药复配成MH11-4可湿性粉剂能明显抑制植物体内TMV的增殖。刘华山等[25]研究3种中草药对烟草普通花叶病有一定的防效。本试验结果表明,射干、柴胡、五倍子对普通烟K326烟草花叶病的防效高于50%。我国中草药资源丰富,在进行抗病毒活性中草药的筛选时,要充分扩大筛选范围,有利于从中发现高活性中草药,由此开发出高效植物抗病毒抑制剂。

参考文献:

[1] 佟爱仔,赵兴能,孔宝华,等. 2011年云南烟草病毒病发生动态及复合侵染分析[J].植物病理学报,2013,43(1):100-103.

[2] 杨德廉,王凤龙,钱玉梅,等.我国烟草病毒病的防治研究策略[J].中国烟草科学,2001(1):46-48.

[3] 褚秀玲,苏建青,韦旭斌.中草药抗病毒的研究动态及思路[J].湖北农业科学,2009,48(5):1253-1255.

[4] 刘国坤,谢联辉,林奇英,等.15种植物的单宁提取物对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用[J].植物病理学报,2003,33(3):279-283.

[5] 伍小良.抗烟草花叶病毒病的药剂筛选及复配增效作用研究[D].重庆:西南大学,2007.

[6] 陈启建,刘国坤,吴祖建,等.26种植物提取物抗烟草花叶病毒的活性[J].福建农林科技大学学报(自然科学版),2004,33(3):300-303.

[7] 陈雅寒,汝冰璐,翟颖妍,等.抑制烟草花叶病毒(TMV)植物提取物的筛选[J].植物保护学报,2018,45(3):463-469.

[8] 徐晓庆,张秀丽,郭勃予,等.15种中草药抗烟草花叶病毒活性的研究[J].安徽农业科学,2014,42(6):1691-1693.

[9] GB/T2322-2008,烟草病虫害分级及调查方法[S].北京:中国标准出版社,2008.

[10] 赵世杰,许长成,邹琦,等.植物组织中丙二醛测定方法的改进[J].植物生理学通讯,1994,30(3):207-210.

[11] 朱振国,周广苗,谭效磊,等.赤霉素对烟草幼苗生长发育及生理生化特性的影响[J].山东农业科学,2019,51(4):139-143.

[12] 余清,刘勇,杨树军.几种烟草抗病毒剂在田间药效及对烟株抗病性的影响[J].云南农业大学学报,2001,16(1):9-12.

[13] 白海群,田泽华,杨明,等.几种植物提取液对感染TMV烟草叶片核酸及类黄酮含量的影响[J].安徽农业科学,2010,38(34):19438-19439.

[14] 李鑫,顾晶晶,赵秀香,等.铜元素诱导烟草抗马铃薯Y病毒脉坏死株系机理研究[J].病毒学报,2009,25(3):226-230.

[15] 康华靖,刘鹏,徐根娣,等.大盘山自然保护区香果树对不同海拔生境的生理生态响应[J].植物生态学报,2008,32(4):865-872.

[16] 耿艳秋,李大勇,吴莹,等.低温胁迫对玉米萌发出苗生理生化指标的影响[J].东北农业科学,2016,41(6):11-15.

[17] 范志金,刘秀峰,刘凤丽,等.植物抗病激活剂诱导植物抗病性的研究进展[J].植物保护学报,2005,32(1):28-30.

[18] 唐永萍,石亚莉,贺军花,等. 不同灰霉病抗性苹果果实中酚类物质代谢特征[J].西北植物学报,2017,37(3):510-516.

[19] 李洪连,王守正.植物诱导抗病性的现状与展望[J].河南农业大学学报,1994,28(3):219-223.

[20] 徐翠莲,杨楠,杨国玉,等.壳寡膦酸酯对烟草花叶病毒抗性及其机理的初步研究[J].中国烟草学报,2012,18(1):58-63.

[21] 马志卿,殷培军,郭志波,等.植物源病毒抑制剂VFB诱导烟草抗烟草花叶病毒机理的初步研究[J].植物病理学报,2007,37(3):296-300.

[22] 易克,彭冠云,周清明.抗植物病毒天然产物开发利用的研究进展[J].湖南农业科学,2009(2):42-45.

[23] 郑敏,陈鸿珊.中草药及其有效成分抗病毒研究进展[J].中草药,1998,29(9):633-635.

[24] 刘学端,肖启明.植物源农药防治烟草花叶病机理初探[J].中国生物防治,1997,13(3):128-131.

[25] 刘华山,杨素勤,韩锦峰,等.中草药剂对烟草普通花叶病毒病的防治效果[J].河南农业科学,2002(12):21-24.

(责任编辑:易  婧)

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