结直肠癌错配修复蛋白表达及微卫星不稳定与TNM分期的相关性

陈荣真，张志勇，刘丽云，张梦思，赵猛，郑晓娟

（唐山市工人医院 病理科，河北 唐山）

0 引言

结直肠癌是人类常见的恶性肿瘤，近年来其发病率和病死率逐年升高[1]。我国结直肠癌的发病率年均上升 3%～4%[2]，严重危害我国居民的健康。染色体不稳定（CIN）、微卫星不稳定（MSI）和CpG岛表型甲基化（CIMP）是结直肠癌发生、发展的重要机制[3]。微卫星不稳定性（microsatellite instability，MSI）是指肿瘤组织 DNA 复制过程中某一微卫星由于重复插入或缺失而造成的微卫星长度改变，出现新的微卫星等位基因现象，而错配修复蛋白（mismatch repair protein， MMRP）是导致 MSI 发生的主要原因。此外，由MMR蛋白功能缺陷引起的 MSI 受到广大临床工作者的重视[4-6]。研究发现，MMR蛋白功能缺陷引起的高度MSI在指导治疗及评估预后中意义重大[7-8]。临床工作中，以肿瘤肠壁浸润深度、淋巴结转移情况和远处转移为判断标准的 TNM 分期系统与结直肠癌临床治疗方案的制订密切相关。本研究旨在分析结直肠癌患者 MMR 蛋白表达和MSI与肿瘤TNM分期的相关性。

1 资料与方法

1.1 资料来源

回顾性分析2004年1月至2018年12月在唐山市工人医院收治的具有完整临床病理资 料的结直肠癌患者758例。其中，男性456例，女性302例；年龄为31-94岁，中位年龄65岁。

1.2 方法

收集结直肠癌患者的术后标本，采用免疫组织化学法检测MMR蛋白表达。 术中获取的结直肠癌组织均经3.7%甲醛液固定、脱水、石蜡包埋，连续切片，厚3-4μm，行常规HE及免疫组织化学Envision法染色，抗MLH1、MSH2、PMS2、MSH6 鼠单克隆抗体购自罗氏生物科技公司。按产品说明步骤进行染色。每张切片内的非肿瘤肠上皮黏膜细胞明确的核着色阳性为内对照。MMR蛋白在肿瘤细胞核明确着色表达判定为阳性，任何比率肿瘤细胞的阳性均视为阳性[9]，与核染色强弱以及阳性细胞弥漫或局灶分布无关。细胞核不着色判断为阴性。按第7版美国癌症联合会（AJCC）标准对所有患者行TNM分期并分组，分析不同性别、年龄及分期组MMR蛋白表达和MSI情况。

1.3 统计学方法

采用 SPSS 17.0软件进行统计分析。计数资料的比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MMR 蛋白表达情况

758例标本中，63例（8.3%）MMR 蛋白表达缺失。其中，MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 单独缺失分别有3、3、6、8 例，MLH1联合PMS2缺失27例，MSH2联合PMS2缺失6例，MLH1联合MSH6缺失3例，MLH1、MSH6、PMS2共同缺失3例。

2.2 MMR蛋白表达与 TNM 分期相关性的单因素分析结果

年龄≥60岁与＜60岁患者间PMS2缺失率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；T3期亚组MSH2缺失率与其他T分期亚组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；N1期亚组 MSH2缺失率与其他N分期亚组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；TNM分期Ⅱ期、Ⅲ期亚组MSH2缺失率与其他TNM分期亚组比较，差异均有统计学意义（均 P＜0.05）；TNM分期Ⅲ期亚组MSH6缺失率与其他TNM分期亚组比较，差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。 T2期亚组、T3期亚组及TNM分期Ⅰ期亚组MSI阳性率比较，差异均有统计学意义（均 P＜0.05）（表 1）。

表1 结直肠癌患者错配修复蛋白表达及微卫星不稳定（MSI）与临床病理特征相关性的单因素分析结果[例（%）]

续表1

2.3 MSI 与 TNM 分期相关性的单因素分析结果

T2期亚组、T3期亚组及TNM分期Ⅰ期亚组MSI阳性率比较，差异均有统计学意义（均 P＜0.05）（表 1）。

3 讨论

随着腔镜技术和新辅助治疗在临床的广泛开展，结直肠癌的治疗有很大改善[10]。同时，循证医学的发展为结直肠癌患者提供了更加精准的诊疗。Koopman M建议临床Ⅲ期及以上患者需进行辅助治疗[11]，因此准确的临床分期尤为重要。AJCC和国际抗癌联盟（UICC）提出了TNM分期系统， 虽然在某些方面仍有争议[12]，但在结直肠癌的诊疗及预后方面仍有较大作用。

微卫星又称短串联重复序列，在复制过程中长度通常保持不变。其序列随机分布于人类基因组的编码区和非编码区，这种重复的特性使其在复制过程中容易出现错配。正常生理条件下，DNA错配修复系统可以及时发现并纠正微卫星序列复制产生的错误，进而维持整个基因组的稳定；当DNA复制过程发生错误，MMR蛋白因为功能缺陷不能准确识别、修复错配的DNA时，导致一个或多个重复碱基的插入或缺失，进而引起MSI[13]。目前主要利用两种方法检测MSI：一是通过聚合酶链反应检测样本中微卫星位点序列，并与正常DNA 序列进行比对分析，进而判别MSI状态；二是通过免疫组织化学法检测样本中错配修复蛋白表达情况。因免疫组织化学法相比聚合酶链反应有着易操作、成本低等优势[14]，临床上常用免疫组织化学法检测MMR蛋白以对肿瘤MSI状态进行筛选[15]。研究表明，检测肿瘤MSI对结直肠癌的诊疗和判断预后有重要意义。高水平MSI （MSI-H）结直肠癌与MSS和 低水平MSH（MSI-L）结直肠癌相比，有独特的生物学特征，MSI-H 结肠癌好发于右半结肠、多原发癌、倾向于低分化及黏液腺癌、有较低的淋巴结转移率及远处转移率[16]。Sargent DJ等认为，MSI-H是肿瘤预后良好的标志[17]。Zaanan 等[18]研究发现Ⅲ期MSI-H结直肠癌患者采用FOLFOX方案辅助化疗，无进展生存时间显著延长。Liang 等[19]研究发现，MSI-H 结直肠癌Ⅳ期患者与MSI-L、MSS的Ⅳ期患者相比，以5-氟尿嘧啶为基础的化疗更能带来生存获益。因此，鉴于MSI检测对结直肠癌的诊疗有重要的指向性，2016版美国国立综合癌症网络（NCCN）指南推荐所有转移性结直肠癌患者均进行MMR蛋白及MSI检测[20]。

本研究发现，结直肠癌患者中MMR蛋白表达缺失率为8.3%，与以往报道相似；结直肠癌MMR蛋白表达缺失和MSI与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和远处转移相关；结直肠癌患者MMR蛋白表达缺失和MSI与患者发病年龄有关。因此，MMR蛋白及MSI的检测可以作为判定结直肠癌患者TNM分期的客观参考指标，进而判定患者术后是否需要辅助放化疗。同时，检测肿瘤MMR蛋白表达及MSI也可作为指导临床治疗的重要依据。