长链非编码RNAMIAT 在甲状腺乳头状癌中的表达及其与预后的关系

彭妲

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2016 年1 月～2017 年10 月在本院治疗的62 例PTC 患者的临床资料。①纳入标准：患者临床资料及随访资料完整；术后病理结果证实为PTC；有完整PTC 癌组织标本及癌旁组织标本；未合并其他甲状腺疾病。②排除标准：预计生存期＜3 个月；术前接受过任何放化疗亦或分子靶向治疗；存在其他内分泌系统疾病；处于妊娠期或哺乳期的女性。患者中男12 例、女50 例,年龄23～49 岁、平均年龄(39.24±5.47)岁,肿瘤直径6～18 mm、平均肿瘤直径(12.13±2.05)mm,多发灶13 例,临 床分期：Ⅰ期19 例、Ⅱ期28 例、Ⅲ期15 例,淋巴结转移情况：转移40 例、无转移22 例。采集PTC 患者的石蜡包埋癌组织及其癌旁组织(距离癌组织＞5 cm)标本,标本均由医院内2 名专业的病理医师进行严格鉴定。

1.2 方法 ①PTC 癌组织及其癌旁组织中lnc RNA MIAT表达水平检测：将新鲜组织50～100 mg 研磨至粉末状,Trizol法提取组织总RNA,而后进行逆转录得到RNA 总量,将产物cDNA 取出后利用无酶水稀释至500 μl 并保存待用,反应体系为20 μl,包含引物、模板各5 μl,FastStart Universal SYBR Green Master (ROX)10 μl,而后进行qPCR 检测,其中MIAT正向引物：5'-GCTCACACCTCCTATTCCT-3',反向引物：5'-CTTCACCAACTCTCCCACT-3'；引物由华大基因生物科技有限公司合成,PCR 反应条件：温度95℃、5 min；95 ℃、30 s；60℃、30 s；72℃、30 s,共重复40 个循环,每个样本重复测量3 次取平均Ct 值,相对定量采用2-ΔΔCt法,ΔCt=Ct(目的基因)-Ct(管家基因),ΔΔCt=实验组ΔCt-对照组ΔCt。②一般资料收集和预后随访：采集患者的性别、年龄、病理分期、肿瘤直径、淋巴结转移情况等一般资料,通过电话或复诊形式随访病例患者术后2 年复发情况(随访时甲状腺彩超检查可见瘤灶),并对患者术后2 年总生存率进行随访。

1.3 观察指标 比较PTC 癌组织及其癌旁组织中lnc RNA MIAT 表达情况；PTC 患者病理特征及预后与lnc RNA MIAT表达的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0 统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差()表示,组间对比行独立样本t 检验或重复测量方差分析；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验；相关性检验采用Pearson 相关分析。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 PTC 癌组织及其癌旁组织中lnc RNA MIAT 表达情况比较 PTC 癌组织中lnc RNA MIAT 表达水平为(4.232±0.351),高于癌旁组织的(1.065±0.126),差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 PTC 癌组织及其癌旁组织中lnc RNA MIAT 表达情况比较 ()

表1 PTC 癌组织及其癌旁组织中lnc RNA MIAT 表达情况比较 ()

注：与癌旁组织比较,aP＜0.05

2.2 PTC 患者病理特征与lnc RNA MIAT 表达的关系 PTC患者有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ期、有包膜侵犯、复发者lnc RNA MIAT 表达水平显著高于同类其他,差异具有统计学意义 (P＜0.05)。见表2。

表2 PTC 患者病理特征与lnc RNA MIAT 表达的关系()

表2 PTC 患者病理特征与lnc RNA MIAT 表达的关系()

注：有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ期、有包膜侵犯、复发者lnc RNA MIAT 表达水平显著高于同类其他,P＜0.05

2.3 PTC 患者预后生存情况与lnc RNA MIAT 表达的关系依据PTC 患者癌组织中lnc RNA MIAT 表达水平为3.195 时约登指数最大,故以3.195 为最佳截断点,将PTC 患者分为高表达组(46 例)、低表达组(16 例)；62 例PTC 患者的随访资料均完整,结果发现高表达组术后2 年随访总生存率95.65%(44/46)较低表达组100.00%(16/16)略低,但比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.4 PTC 患者病理特征及预后复发情况与lnc RNA MIAT 表达水平的相关性分析 Pearson 相关性分析提示PTC 患者淋巴结转移、临床分期、包膜侵犯及复发与lnc RNA MIAT 表达水平呈明显正相关(P＜0.05)。见表3。

表3 PTC 患者病理特征与lnc RNA MIAT 表达水平的相关性分析

3 讨论

PTC 为甲状腺癌最为常见的病理类型,PTC 的生物学行为总体良好且绝大多数可长期生存,尽管不少甲状腺癌患者可通过外科手术以及碘剂放疗得到有效疗效,但治疗后患者复发风险依然较高,尽早预测患者复发风险对改善预后至关重要［1-6］。lnc RNA 属于一类转录本＞200 个核苷酸的ncRNA,lnc RNA 并不参与基因的转录以及翻译过程,但其在基因调节网络中起到重要作用,国内外不少学者研究证实lnc RNA 的异常表达与乳腺癌、肺癌以及卵巢癌等的发生及进展密切相关［7-9］,lnc RNA 是目前备受关注的基因调控因子,而MIAT 属于一种新型肿瘤相关lnc RNA,MIAT 异常表达存在于不同肿瘤患者中,有望成为新型肿瘤生物标志物［10］,关于lnc RNA MIAT 与PTC 的关系尚处于初步探索阶段,因此探究lncRNA MIAT 与PTC 患者病理特征以及预后的关系或可为PTC 的早期诊治提供新的方向。

早期刘永武等［11］研究证实结直肠癌组织中lnc RNA MIAT 表达量明显高于癌旁组织,MIAT 是结直肠癌的促癌基因,其可激活有关信号通路从而发挥明显的促癌作用,本次分析结果显示,PTC 癌组织中lnc RNA MIAT 表达水平为(4.232±0.351),高于癌旁组织的(1.065±0.126),差异有统计学意义(P＜0.05)。提示lnc RNA MIAT 在PTC 癌组织中呈高表达,早期细胞实验证实沉默MIAT 可明显降低肿瘤细胞的增殖、迁移以及侵袭能力,并有效抑制肿瘤细胞生长［12］,由此说明MIAT 或可作为PTC 的促癌基因。相关研究发现MIAT 基因可促进肿瘤细胞中组蛋白甲基转移酶以及基质金属蛋白酶 9(MMP9)的结合能力,上调MMP9 的表达水平,从而实现对肿瘤细胞的调控作用,在促进肿瘤增殖、侵袭以及转移中有明确作用［13］,有学者研究通过外源性沉默MIAT,发现肿瘤细胞增殖、抗凋亡以及侵袭转移等恶性生物学行为减弱［14］,近期一项研究则表明［15］,高表达的MIAT 可明显促进胃癌细胞增殖以及转移和侵袭,并有效抑制肿瘤细胞的凋亡过程,由此说明lnc RNA MIAT 与肿瘤的恶性生物学行为密切相关；而本分析结果还显示,PTC 患者有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ期、有包膜侵犯、复发者lnc RNA MIAT 表达水平显著高于同类其他,差异具有统计学意义 (P＜0.05)。相关性分析提示PTC 患者淋巴结转移、临床分期、包膜侵犯及复发与lnc RNA MIAT 表达水平呈明显正相关 (P＜0.05),表明PTC 患者lnc RNA MIAT 表达量越高,临床分期以及淋巴结转移、有包膜侵犯和复发的风险越高,提示lnc RNA MIAT或可作为PTC 患者恶性生物学行为的有效标志物,在评估患者预后复发率方面有一定参考价值。受经费和时间限制,本文仅随访了患者术后2 年的生存率情况,结果发现lnc RNA MIAT 高表达组术后2 年随访总生存率95.65%与低表达组100.00%比较差异无统计学意义(P＞0.05),原因与随访时间较短或PTC 患者预后存活率普遍高等有关。

综上所述,本文初步证实了PTC 患者恶性生物学行为及预后复发与lnc RNA MIAT 表达密切相关,或可为PTC 患者早期诊治及预后评估提供参考。但本文依然存在样本量小、随访时间短等不足,未来有待完善研究。