不同产地柴胡商品药材的质量评价研究*

于 丹，吴军凯，谢海龙，都晓伟

（黑龙江中医药大学 药学院，黑龙江 哈尔滨150040）

柴胡为伞形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC.北柴胡）、狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.南柴胡）的干燥根，性微寒，味苦，具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气的作用[1]。据现代研究报道，柴胡含有多种化学成分，包括皂苷、挥发油、植物甾醇、香豆素和脂肪酸等[2]，其中柴胡皂苷为柴胡的主要活性成分，也是目前评价柴胡质量的主要指标成分。

柴胡为常用中药材，临床需求量大极大，除药典规定的柴胡品种外，尚有多种来源于柴胡属植物的混淆品种在市场销售[3]。同时，现今市场上流通的正品柴胡药材也大多为栽培品种，由于品种、产地和栽培方式的差异，柴胡药材质量参差不齐[4-6]。因此，对不同产地的柴胡药材进行质量评价，明确柴胡药材的质量现状，对保障人民的用药安全具有重要意义。

1 仪器与材料

岛津LC-2010A高效液相色谱仪；CLASS-VP色谱工作站；茂福炉（沈阳市电炉厂）。

乙腈（色谱级,美国天地试剂公司）；水为重蒸水；硅胶（青岛海洋化工厂）；其余试剂为分析纯。

柴胡皂苷a、d（供含量测定用，批号为110777-201901,110778-201901）和柴胡对照药材（批号为120992-201509）均购于中国食品药品检定研究院。收集柴胡样品24份，主要购于安徽亳州药材市场、河北安国药材市场和黑龙江哈尔滨三棵树药材市场，其中5份样品为饮片，其余均为个子货，其具体来源见表1。

表1 24份柴胡商品药材来源Tab.1 Source of 24 samples of Bupleuri radix

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

参照2015版《中国药典》柴胡项下的薄层鉴别方法，对24份柴胡样品进行鉴定。结果见图1。24份柴胡样品均在与柴胡皂苷a、d相同的Rf值处出现相同颜色的斑点。但与柴胡标准药材比较，3、6、11、12、13、17、18、20、21、22、24 号样品的 TLC 谱图与其一致；其余柴胡样品TLC谱图与标准药材TLC谱图存在差异。

图1 24份柴胡样品的TLC色谱图Fig.1 TLC chromatogram of 24 samples of Bupleuri radix

2.2 总灰分

参照《中国药典》2015版灰分测定法（通则2302），测定24份柴胡样品总灰分。具体结果见表2。

表2 24份柴胡样品总灰分、浸出物和柴胡皂苷含量测定结果（n=3）Tab.2 Total ash,extract content and saikoside content of 24 samples of Bupleuri radix（n=3）

表 2 结果表明，除 7、10、14、18、20、23 样品外，其余样品的总灰分均小于8%，符合药典要求。

2.3 浸出物

参照《中国药典》2015版醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（通则 2201），测定24份柴胡样品醇溶性浸出物。13、14、15、16、18、19、20、21、23、24 样品的浸出物含量不符合药典要求，其余样品的浸出物含量大于11%，符合药典要求，具体结果见表2。

2.4 柴胡皂苷a、d的含量测定

2.4.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈（35～65）-水（65～35）梯度洗脱；流速 1.0mL·min-1，检测波长 210nm。

2.4.2 对照品溶液的制备 分别精密称定对照品柴胡皂苷a、d适量，加甲醇制成a、d分别为0.082mg·mL-1和0.088mg·mL-1的对照品混和溶液。

2.4.3 样品溶液的制备[7]精密称取过60目筛的柴胡粉末约0.5g，用5%NH3·H2O-甲醇溶液25mL浸泡30min，超声提取30min，重复2次，合并滤液，蒸干，残渣以水饱和正丁醇25mL分次转移到分液漏斗中，加氨试液振摇提取4次，每次5mL，弃去氨液，正丁醇液用正丁醇饱和水洗涤2次，每次5mL，弃去水液，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过（0.45μm），取续滤液，即得。

2.4.4 标准曲线制备 精确量取对照品混和溶液2、5、10、15、20、25、35、45μL分别注入 HPLC 色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标,各单体皂苷量为横坐标作标准曲线，得线性回归方程。柴胡皂苷a的线性回归方程为：Y=274046X+3767.4，r=0.9999，在 0.164～3.69μg范围内进样量与峰面积线性关系良好；柴胡皂苷d的线性回归方程为：Y=272436X-1870.3，r=0.9995，在 0.176～3.96μg范围内进样量与峰面积线性关系良好。

2.4.5 方法学考察

2.4.5.1 精密度实验 精确吸取对照品混和溶液20mL，连续进样5次，测定柴胡皂苷a和d峰面积，两种成分峰面积的RSD均小于2%，结果表明色谱系统精密度良好。

2.4.5.2 重现性实验 精密称取柴胡样品粉末约0.5g，平行操作制备5份样品溶液，进样10μL，测定柴胡皂苷a和d的含量，两种成分的RSD均小于3%，结果表明方法重现性较好。

2.4.5.3稳定性实验 精密称取3份柴胡样品粉末各约0.5g，制备5份样品溶液，每隔2h进样一次，测定样品溶液中柴胡皂苷a和d在12h内峰面积的变化，结果两种成分的RSD均小于2%。表明样品在12h内稳定性良好。

2.4.5.4 加样回收率实验 精密称取已知含量的柴胡样品粉末，共5份，分别加入一定量的柴胡皂苷a和d标准品，进样10μL，测定柴胡皂苷a和d的含量，结果平均加样回收率分别为99.26%和100.78%，RSD为0.97%和1.84%。

2.4.6 样品测定 按照样品溶液的制备方法分别制得不同样品溶液，吸取每种样品溶液10μL注入高效液相色谱仪，测定结果见表2，色谱图见图2、3。

图2 柴胡皂苷对照品HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of saikoside standard

图3 柴胡药材样品HPLC色谱图Fig.3 HPLC chromatogram of samples

实验结果表明，24份柴胡样品皂苷含量差距较大，柴胡皂苷a和柴胡皂苷b总含量在痕迹量～14.86mg·g-1之间。其中，1、3、5、6、11、12、13、17、18、19、20、22、23 号样品达到药典要求，19 号（河北3）样品皂苷含量最高，14号（黑龙江泰康3）、15号（黑龙江泰康4）和16号（内蒙古1）样品几乎未检测到柴胡皂苷。

2.5 聚类分析

以柴胡皂苷a和d含量为指标，采用SPSS18.0软件进行聚类分析（图4）。

聚类分析结果表明，24份柴胡样品质量参差不齐，依据柴胡皂苷含量可分为3大类。其中11、22、19、6 号样品皂苷含量较高，为 9.93～14.86mg·g-1，聚为一类；17、23、5、13、1、12、20、3、18 号样品皂苷含量均大于4.08mg·g-1，符合药典要求，聚为一类；其余样品皂苷含量未达到药典标准，聚为一类。

本实验评价的24份柴胡样品收集于安徽、陕西、甘肃、山西、河北、内蒙古、山东、河南、云南、吉林和黑龙江11个省份，其中安徽、甘肃、河北和黑龙江省份的样品数量大于3份。对此4个省份的聚类结果进行分析发现，产地为甘肃省的7、8和9号北柴胡样品聚在一类中；产于华东地区（安徽和山东）的1、3和5号北柴胡样品聚在一类中；产地为黑龙江省的11、12、13和23号南柴胡样品皂苷含量均符合药典要求，但14、15和21号样品皂苷含量较低；产自于河北省的3份药材分布在3大类中。可见，柴胡药材质量与其分布区域具有一定的相关性，但尚与其它因素相关。

图4 聚类分析树状图Fig.4 Cluster analysis dendrogram

3 讨论

《中国药典》收载的柴胡药材基原品种为柴胡和狭叶柴胡，按性状不同，分别习称为北柴胡和南柴胡。目前普遍认为在柴胡的两个基原品种中，北柴胡皂苷类成分含量较高，南柴胡挥发油类成分含量较高。本实验收集的24份柴胡药材14份为北柴胡，10份为南柴胡，但从24份柴胡样品质量评价结果可见北柴胡的柴胡皂苷含量相对较高，但并未绝对优于南柴胡，11、22号南柴胡样品皂苷总含量分别为13.32和13.27mg·g-1，在24份柴胡样品中位于第2、3位。

柴胡药材在我国分布广泛，华东、华北、西北和东北地区均有产出。本实验收集的24份柴胡样品，产地分布于安徽、陕西、甘肃、山西、河北、内蒙古、山东、河南、云南、吉林和黑龙江11个省份。各产地柴胡药材质量相差较大，与其分布区域具有一定的相关性[8]，但尚因有些产区药材样品间皂苷含量差异较大，有些产地由于样品数量较少未能进行分析，故下一步仍需选取大量样本进行深入研究。

柴胡为临床极常用药物，目前，柴胡药材存在的质量差异问题，对药物的临床疗效产生极为重要的影响。除品种和产地影响之外，采收时间、加工方法和贮藏方法等因素均与药材质量密切相关，本实验研究结果也证实同一产地柴胡药材质量也存在差异。因此，若想解决此问题，仍需从柴胡种质、环境因子、采收加工方法等多方面深入挖掘影响柴胡药材质量的因素，为获取质量优良、稳定的柴胡药材提供策略和方法。

4 结论

本实验通过薄层色谱鉴别、总灰分、醇溶性浸出物和柴胡皂苷含量测定对收集于安徽亳州药材市场、河北安国药材市场和黑龙江哈尔滨三棵树药材市场的24份柴胡商品药材进行了质量评价，发现目前市售柴胡商品药材质量参差不齐。此实验结果在一定程度上反映了目前市场销售柴胡药材质量的现状，提示为了确保柴胡药物临床使用疗效，应从多渠道、多途径、多角度入手，保障和提高柴胡药材质量。