枯草芽孢杆菌制剂中有效活菌数测定的能力验证①

2020-03-04李可然王秀丽

热带农业工程 2020年6期

马东李可然王秀丽

（天津坤禾生物科技集团股份有限公司天津 300001）

能力验证是指利用实验室间比对，按照预先制定的准则来评价参加者的能力［1］。能力验证作为一种重要的质量控制手段，在检测领域已广被接受。

近年来，随着发酵行业的快速发展，发酵水平的不断提高，实验室亟需对高含量有效活菌数的检测能力进行验证。然而，中国合格评定国家认可委员会（CNAS）暂未开展高含量有效活菌数检测能力验证实验，也未见相关文献报道。通过对高含量枯草芽孢杆菌（50亿/mL）中有效活菌数检测能力验证进行研究，以期推动完善能力验证在该领域的应用。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

实验仪器和试剂请见表1、表2。

1.2 样品制备

从公司现有库存中取50 亿/mL 枯草芽孢杆菌制剂成品，室温下搅拌（600 r/min）6 h，分装到规格为60 mL 的西林瓶中，每瓶装入50 mL 样品，共50瓶样品，编号。

1.3 样品的均匀性与稳定性检验

按照《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》（CNAS-GL003：2018）［2］、《能力验证提供者认可准则在微生物领域的应用说明》（CNASCL03-A001：2018）［3］的要求进行。

1.3.1 样品均匀性

从样品中随机抽取10个样品进行均匀性检验，每个样品在相同条件下重复测试2次。测试数据转换为以10 为底的对数后进行均匀性评价。以单因子方差分析（F检验）作为初步评价均匀性的方法，在参加者的检测结果返回后，获得σ，再利用Ss≤0.3σ准则进行评价［4］。

表1 实验仪器

表2 实验试剂

1.3.2 样品稳定性

从样品中随机抽取5个进行稳定性检验，将均匀性检验数据作为稳定性检验的第一次测试数据，模拟运输条件放置60 d 后，进行第二次测试。每个样品在相同条件下重复测试2 次。以t检验作为初步评价稳定性的方法，在参加者的检测结果返回后，获得σ，再利用|-x--y|≤0.3σ准则确认样品是否稳定［4］。

1.4 检测方法

实验样品均按照《农用微生物菌剂》（GB 20287-2006）［5］、《微生物肥料产品检验规程》（NY/T 2321-2013）［6］检测有效活菌数。

1.5 数据处理

对供试样品检测结果经对数转换后，按式（1）计算z值：

其中，x为参加者检测结果；X为指定值；σ为能力评定标准差。

依据CNAS-CL03-A001：2018《能力验证提供者认可准则在微生物领域的应用说明》，以z值评价参加者结果，如表3。

表3 CNAS标准评价准则

2 结果与讨论

本次能力验证共有18 个参加者，主要为生产企业和第三方检测机构。

2.1 能力验证样品的均匀性和稳定性

2.1.1 均匀性检验

由表4 可知，F＜F临界值，表明样品间无显著性差异，样品是均匀的。

表4 样品均匀性检验

2.1.2 稳定性检验

由表5 可知，t＜t临界，表明样品在测试期间是稳定的，能够满足能力验证样品的要求。

2.2 检测结果和数理统计

按照CNAS-GL002：2018《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》附录A 中算法A 确定指定值和能力评定标准差[7]。确定指定值为：9.672，能力评定标准差为：0.054 6。按1.5 计算z 值，并按大小顺序排列作柱状图（如图1 所示），图上标有参加者的代码，每个参加者均可通过该图将其结果与其他参加者的差异进行比较，从而了解其检测水平，发现检测方面存在的问题与不足，提升检测能力。