30批牛黄解毒片的质量分析报告及探索性研究小结

周仲强，程晓英，裴明日

（1吉化集团公司总医院药剂科，吉林 吉林；2吉林省吉林市食品药品检验所，吉林 吉林）

0 引言

牛黄解毒片的配方中含有大黄、黄芩、牛黄、冰片等药物，毒性较低，唯有雄黄毒性最强[1]，用量又大，其主要成分为二硫化二砷，砷占75%、硫占24.9%，遇热易分解氧化，变成有剧毒的三氧化二砷，因此牛黄解毒片的质量问题就显得很重要[2]。此次收集6个省、直辖市、自治区的16家生产企业30批牛黄解毒片，按药典规定检验方法进行了全项检验，以期为评价该药品的质量和提高质量标准提供依据。

1 检验方法

1.1 性状、鉴别（一项显微鉴别、五项薄层鉴别）全部合格。

1.2 检查项中三氧化二砷按药典方法检验，所显砷斑颜色均浅于标准砷斑。但是每次显示结果的颜色不统一，有时偏黄色，有时偏绿色。实验中应注意严格把握反应温度、时间，尽量避光操作。

1.3 检查

土大黄苷为补充方法，取本品大片2片（小片3片），除去糖衣，研细，加乙酸乙酯20ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，静置，取上清液作为供试品溶液。取土大黄苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不应显相同颜色的荧光斑点，检查结果全部合格。

1.4 含量测定

按药典标准测定，本品每片含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，大片不得少于4.5mg；小片不得少于3.0mg。结果显示最低为3.4 mg/片，最高为9.3 mg/片，差异比较大，客观可以反映药品质量。

2 三氧化二砷检验结果分析

砷是一种有害元素，可经呼吸道、消化道及皮肤吸收而进入人体，从而引起人体器官的各种病变。在临床上由砷引起慢性中毒，如脑、末梢神经、皮肤病等，甚至还包括呼吸道癌和皮肤癌。从牛黄解毒片的组方看三氧化二砷主要来源于雄黄,每片(大片)牛黄解毒片含有50mg、小片33mg雄黄。雄黄占整个处方量的6.41%，雄黄的化学成分为二硫化二砷,属不可溶性砷，无毒性，但是遇热分解变成有剧毒的三氧化二砷,也就是俗称的砒霜,口服10mg即可中毒,100mg即可致死。由于组方中含有雄黄，而药典方法受环境与人员操作影响较大，难以得到满意的观察结果，为了更好地控制三氧化二砷的限度，采用原子荧光定量方法进行含量的测定[3]。

3 探索性研究及其检验结果分析

仪器：原子荧光光度计 AFS-933 北京吉天仪器有限公司。

测量条件：元素：As， 光电倍增管负高压（V）：270，原子化器高度（mm）：8。

灯电流（mA）：60，载气流量（ml/min）：400，屏蔽气流量（ml/min）：800。

试剂：硝酸、盐酸均为优级纯，水为去离子水，硫脲为分析纯。

标准物质：砷单元素标准溶液1000μg/ml GBW08611 11115 由中国计量科学研究院提供。

实验前玻璃和塑料器械的处理：使用前先用1∶1HNO3和1∶1HCl交替浸泡12h，再用去离子水浸泡2h，最后用去离子水冲洗干净后，晾干待用。

操作方法：标准曲线制备：取砷单元素标准溶液1000μg/ml，精密吸取1ml用5mol/盐酸稀释至100ml量瓶中，再精密吸取1ml用5mol/盐酸稀释至100ml量瓶中。精密吸取1ml、2ml、4ml、8ml、10ml分别至100ml量瓶中,分别加10%硫脲10ml，再用5mol/L盐酸稀释至刻度，制成1、2、4、8、10ng/mL的标准溶液，至60℃-70℃水浴上加热30min后，放冷至室温，用原子荧光光度计测定标准曲线。见图1。

图1 线性关系

相关系数：0.9999 曲线方程：I=112.3922×C-5.2246

供试品制备：精密称取牛黄解毒片0.2g，于50ml离心管中，精密加入50%甲醇25ml，于37℃水浴中浸提24h后，超声提取20min，置离心机中离心（3000r/min）10min，精密吸取上清液5ml，置蒸发皿中，于60℃水浴上，挥去甲醇，用5mol/盐酸定容至50ml量瓶中。精密吸取1ml置200ml量瓶中，加10%硫脲10ml，再用5mol/盐酸稀释至刻度，至60℃-70℃水浴上加热30min后，放冷至室温，用原子荧光光度计测定。本实验共测定8批样品，砷的含量分别为0.261mg/g、0.299mg/g、0.044mg/g、0.242mg/g、0.175mg/g、0.304mg/g、0mg/g、0.164mg/g。

在《中国药典》2015年版一部牛黄解毒片中，关于砷的测定方面只做了可溶性砷（三氧化二砷）的限量检查，采用古蔡氏法判断砷斑，精密度不高重复性差，难以做到准确测定[4-6]。已有的研究以侧重于牛黄解毒片中砷含量测定方法的研究为多，但对砷测定的前处理方法的影响因素考察较小，本文采用原子荧光光度法测定砷含量，为牛黄解毒片的质量控制和安全性评价提供科学依据[7,8]。