滋益颗粒的工艺研究及质量标准的建立

2020-02-19张春婷邱智东李博文刘欣蔚董雪莲

吉林中医药 2020年2期

张春婷，邱智东，李博文，邹睿，刘欣蔚，董雪莲

（长春中医药大学，长春 130117）

滋益颗粒为长春中医药大学附属医院的临床经验方，该方由生地黄[1-3]、牡丹皮、浙贝母、北沙参、金荞麦、丹参、佛手、黄芪等8 味中药经现代工艺提取制成的一种复方制剂，具有增强免疫力的功效。本研究通过正交实验对提取工艺进行优化，对辅料及粘合剂进行单因素考察，参考2015 版《中华人民共和国药典》方法对处方中的部分中药进行定性鉴别，为今后的进一步研究提供参考。

1 材料与仪器

1.1 试药滋益颗粒（批号：20192001、20192002、20192003、20192004、20192005、20192006、20192007、20192008、20192009、20192010）；黄芪甲苷对照品（批号：110781-201616）、黄芪对照药材（批号：Y19D8H51060）、佛手对照药材（批号：Y12A9H58681）、丹参酮Ⅱa 对照品（批号：110766-201721）、丹酚酸B 对照品（批号：111562-201716）、丹参对照药材（批号：120923-201615）、地黄对照药材（批号：121180-201506)、牡丹皮对照药材（批号：121490-201603）、毛蕊花糖苷对照品（批号：111530-201713）。实验中用到的固体试剂为化学纯，所用到的液体试剂除色谱甲醇及乙腈外均为分析纯。

1.2 仪器设备 AgiLent1260 高效液相色谱仪（二极管阵列检测器）；ZF-2 型紫外仪，上海安亭；MS105DU型十万分之一天平；TG328A 型分析天平；HHS 型恒温水浴锅，江苏常熟；DZF-6090 型真空干燥箱，上海一恒。

2 方法及结果

2.1 提取工艺的优化

2.1.1 正交实验设计选定煎煮时间、煎煮次数和加水量3 因素，每个因素取3 个水平。按L9（34）正交试验表进行正交试验[4-5]，确定最优提取工艺，水煎煮因素水平表见表1，水煎煮法提取工艺正交试验结果见表2，方差分析见表3。

表1 水煎煮因素水平表

表2 水煎煮法提取工艺正交试验结果

表3 方差分析

2.1.2 优选提取工艺根据直观分析和方差分析结果，A 因素水平变化对试验结果影响较小，B 和C 因素水平变化对试验结果有显著影响，确定水煎煮法提取最佳工艺是A1B2C2，即水煎药材加即8 倍量水，提取2次，每次1 h。

2.1.3 优选提取工艺的验证试验按处方2 倍量比例称取药材，按优选的最佳水煎煮工艺条件提取，重复验证3 次，测定验证样品中平均总毛蕊花糖苷含量为45.38 mg，RSD=1.13 %，说明重现性良好，确定优选出的工艺条件为最佳工艺，见表4。

2.2 成型工艺优选

2.2.1 辅料的选择单因素考察淀粉、糊精、乳糖3种辅料[6-9]。糊精成型性好、价格低廉，选择糊精作为辅料，见表5。

2.2.2 润湿剂的选择对乙醇进行考察，乙醇浓度为75%时，颗粒软材的软硬度适宜，选择75 %乙醇作为润湿剂，见表6。

2.3 滋益颗粒的定性鉴别

2.3.1 黄芪 TLC 鉴别参考2015 版《中国药典》一部黄芪颗粒项下的薄层色谱鉴别方法[10-11]，取10 g 滋益颗粒精细研磨并放入锥形瓶中，加入25 mL 蒸馏水，超声0.5 h，过滤，滤液用饱和正丁醇提取2 次，每次25 mL。合并提取液，浓氨水洗涤2 次，每次30 mL，蒸发正丁醇。残渣加正丁醇1 mL，得供试品溶液。取黄芪对照药材1 g，煮0.5 h，冷却、过滤，同法制备对照药材溶液。取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇得2 mg·mL-1对照品溶液。相同工艺制备缺黄芪的滋益颗粒，取10 g同法制成阴性对照溶液。以上溶液分别点10 μL 于同一硅胶G 薄层板。用氯仿—甲醇—水（13:7:2）的下层溶液为展开剂，展开、取出吹干，喷10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰。供试品色谱中，相同颜色斑点与对照药材色谱、对照品色谱相同位置显出；无阴性干扰，见图1。

表4 工艺验证实验结果

表5 辅料的考察结果

表6 润湿剂的考察结果

2.3.2 佛手 TLC 鉴别参考2015 版《中国药典》一部佛手项下的薄层色谱鉴别方法[10]。取出5 g 滋益颗粒并精细研磨，加无水乙醇10 mL，超声20 min，过滤，滤液蒸干。残渣加0.5 mL 无水乙醇，为供试品溶液。取佛手对照药材1g，同法制备对照药材溶液。相同工艺制备缺佛手滋益颗粒，取5 g 同法得阴性对照溶液。以上溶液分别点10 μL 于同一硅胶G 薄层板。用展开剂环己烷—乙酸乙酯（3:1）展开，取出干燥，置365 nm 紫外光下检视。供试品色谱中，相同颜色的荧光斑点与对照药材色谱对应位置上显示；无阴性干扰，见图2。

图1 黄芪薄层色谱鉴别图

图2 佛手薄层色谱鉴别图

2.3.3 丹参TLC 鉴别参照2015 版《中国药典》一部丹参项下的薄层色谱鉴别方法[10]。取滋益颗粒1 g，研磨成粉末，加乙醇5 mL，超声15 min，离心，取上清液作为供试品溶液。另取丹参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮ⅡA 对照品、丹酚酸B对照品，加乙醇制成0.5 mg·mL-1和1.5 mg·mL-1的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，使成条状，以三氯甲烷—甲苯—乙酸乙酯—甲醇—甲酸（6:4:8:1:4）为展开剂，展开，展至约4 cm，取出，晾干，再以石油醚（60～90℃）—乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，展至约8 cm，取出，晾干，分别在日光及紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点，见图3。

图3 丹参薄层色谱鉴别图

2.3.4 地黄TLC 鉴别取滋益颗粒21 g 研磨成细粉，加入25 mL 环己烷，将混合物在室温（25 ℃）超声2 h，放置12 h。过滤，弃去滤液，滤渣风干。加25 mL 乙酸乙酯，并在室温（25 ℃）条件下超声1 h 提取充分。取出后过滤，置于蒸发皿中浓缩滤液，并蒸发至干，用1 mL 氯仿溶解后，得到对照药材溶液。取1 g 生地黄对照药材，并使用以上方法制备供试品溶液。相同工艺制备缺生地黄的滋益颗粒，取21 g 同法得阴性对照溶液。以上溶液分别点10 μL 于同一硅胶G薄层板，用展开剂正己烷—丙酮—乙酸乙酯（10:2:1）展开。取出干燥，喷5%硫酸香草醛乙醇溶液，105 ℃烘至斑点清晰[12-13]。供试品色谱中，相同颜色斑点在与对照药材色谱相应位置显出，阴性无干扰，见图4。

2.3.5 牡丹皮TLC 鉴别取滋益颗粒25 g，加乙醚25 mL，超声0.3 h，过滤，蒸干滤液。加1 mL 丙酮，得供试品溶液。取牡丹皮对照药材1 g，同法制备对照药材溶液。相同工艺制备缺牡丹皮滋益颗粒，称取10 g 同法得阴性对照溶液。以上溶液分别点10 μL于同一硅胶G 薄层板，用展开剂环己烷—乙酸乙酯（3:1）展开，取出吹干，喷盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点清晰。供试品色谱中相同颜色的斑点在与对照药材色谱相应位置显示[14-15]，无阴性。见图5。