金钱通淋口服液质量标准研究

2020-02-18吴燕红许妍蔡靖波丁银平邬秋萍

药品评价 2020年24期

吴燕红，许妍，蔡靖波，丁银平，邬秋萍

江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，南昌 330029

金钱通淋口服液是江西省药物研究所与江西鹿迪制药有限公司共同研制生产的中药三类新药，处方由金钱草、海金沙、忍冬藤、白茅根、石韦五味药组成，功能为清热祛湿，利水通淋。用于下焦湿热所致淋证，症见尿频尿急，灼热刺痛，腰痛拒按，尿色黄赤；急性膀胱炎、急性肾盂肾炎及慢性肾盂肾炎急性发作见上述证候者。近年来有关金钱通淋口服液的药学研究报道有：工艺方面主要是膜分离技术在金钱通淋口服液中的应用以及正交试验对金钱通淋口服液进行工艺优选［1-3］；标准方面的研究报道主要是对其中绿原酸的含量进行测定［4-5］；目前尚无对金钱通淋口服液进行标准提高方面的报道。金钱通淋口服液法定标准检验项目主要有金钱草和忍冬藤的薄层鉴别以及总黄酮的含量。故本研究拟在对现行标准进行方法验证的基础上对其现行质控方法进行全面提升以更科学地控制产品的质量。

1 仪器与试药

LC-20AD 高效液相色谱仪（日本Shimadzu 公司）；TLC Visualizer 薄层成像系统（瑞士 Camag 公司）；色谱柱：Agela Venusil MP C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；BT25S 型十万分之一电子天平（赛多利斯）；CP225D 型万分之一电子天平（赛多利斯）。

金钱草对照药材（批号：121187-201403）、忍冬藤对照药材（批号：121069-201004）、马钱苷对照品（批号：121187-201403，含量：98.3%）均购自中国食品药品检定研究院；金钱通淋口服液由江西诚志永丰药业有限责任公司（批号分别为：160501-1、160502-1、160503-1）和江西青峰药业有限公司（批号分别为：20160923、20160924、20160925）提供。

硅胶GF254薄层板（10 cm×20 cm,青岛海洋化工有限公司）。试剂：乙腈为色谱纯，其他均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 TLC 鉴别

2.1.1 金钱草TLC 鉴别取本品10 mL，用乙酸乙酯振摇提取3 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加乙醇1 mL 使溶解,作为供试品溶液。另取金钱草对照药材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，放冷，滤过，滤液浓缩至约20 mL，加乙醇30 mL，搅匀，静置，滤过，滤液蒸至无醇味，加水至约10 mL，同法制成对照药材溶液。按处方配比，取缺金钱草的其他药味，按照制法制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备缺金钱草的阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各10 µL，照薄层色谱法（中国药典2015 年版四部通则0502）试验，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.1.2 忍冬藤TLC 鉴别取本品20 mL，用水饱和的正丁醇振摇提取3 次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2 次，每次20 mL，弃去洗涤液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取忍冬藤对照药材2 g，加水80 mL，煎煮30 min，放冷，滤过，滤液同法制成对照药材溶液。按处方配比，取缺金钱草的其他药味，按照制法制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备缺忍冬藤的阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各5～10 µL 照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10 ℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

2.2 忍冬藤的含量测定

2.2.1 色谱条件采用Agela Venusil MP C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱（200 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）；流速：1.0 mL/min；检测波长分别为236 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 µL。

2.2.2 对照品溶液的配制精密称取马钱苷对照品11.21 mg，置50mL 量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液；再精密量取马钱苷对照母液5 mL 至25 mL 量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.3 样品溶液的制备精密量取本品2 mL，置25 mL 量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 专属性实验分别吸取供试品溶液、对照品溶液以及阴性对照溶液各10 µL，注入液相色谱仪，测定，比较供试品溶液、对照品溶液及去忍冬藤的阴性对照溶液色谱图。结果表明供试品中马钱苷色谱峰与杂质峰有较好的色谱分离，阴性对照无干扰。

2.2.5 线性关系的考察精密量取“2.2.2”项下马钱苷对照品1、2、5、10、20 μL、对照品母液5、10、20 μL，注入液相色谱仪进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，以马钱苷对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=1 579 956.425 1X-2 195.285 4，r=1.000 0，马钱苷在0.044 08～4.407 7 μg 之间呈良好的线性。

2.2.6 精密度试验精密吸取马钱苷对照品溶液10 μL，连续进样6 次，结果马钱苷峰面积RSD为0.3%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 重复性试验取本品（批号:160503-1）6 份，照“2.2.3”项下方法制备样品测定，结果样品中马钱苷的平均含量为6.453 7 mg/g，RSD 为1.5%。

2.2.8 稳定性试验精密吸取供试品溶液（批号:160503-1）10 μL，每隔一定时间进样一次，结果表明样品溶液中的马钱苷在24 h 内峰面积无明显变化，RSD 为0.6%。

2.2.9 回收率试验采用加样回收试验，精密量取已知含量的本品（批号：160503-1，含马钱苷0.562 3 mg/mL）1mL，共六份，置25 mL 量瓶中，精密加入马钱苷对照品溶液（0.275 24 mg/mL）2 mL，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进行测定，计算回收率，结果回收率良好，适合本品的含量测定。结果见表1。