HPLC法测定抱茎苦荬菜中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量

郝羚竹，翟宏宇，闫茹月

（1.吉林省药品检验所，吉林 长春 130033；2.长春中医药大学，吉林 长春 130117）

0 引言

抱茎苦荬菜，又名苦碟子、满天星等，是一种干燥而饱满的抱茎苦荬菜属植物[Ixeris sonchifolia（Bge.）Hance]，主要分布于中国内蒙古、东北地区等[1]。这个药材是菊科植物抱茎苦荬菜经采收、摘选后干燥的地上部分。于大约夏季六月至七月期间，花开时进行采收，先除去根部，再除去其杂质，最后晒干而得[2]。

它是抱茎苦荬菜属的多种可防病、治病的植物之一，值得注意的是，抱茎苦荬菜整棵植物都可以入药使用。其药效包括清热、解毒、凉血、促进血液循环、缓解组织脓液所导致疼痛的作用[3]。它可用于治疗头痛、牙痛、胸痛、胃腹部疼痛、手术后中小疼痛，治疗阑尾炎、痢疾、肠炎、呕吐血液等[4]。相关学者曾进行研究，结果表明，抱茎苦荬菜还具有防止糖尿病等功效[5-6]。因为它可以良好地保护心肌细胞，并使微动脉中的血液和微静脉中的血液二者之间的循环有效改善，促进血液中的各种物质和组织之间交换的特性，所以它常用于治疗冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而导致的各种症状的心脏病[7-9]。柳晓琳等人[10]的研究表明，抱茎苦荬菜还具有抗癌功效。

本文采用高效液相色谱法测定抱茎苦荬菜中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量并对其方法学进行考察（图1～4）。该方法分离效果好，简便、快速，可作为抱茎苦荬菜的质量控制指标。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200 Series高效液相色谱仪；BS 124S型电子天平（德国Sartorius）；KQ-700DV超声波清洗器。

1.2 试药

图1 供试品

图2 对照药材

图3 对照品

图4 阴性

木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111968-201602，纯度97.7%)；甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。样品由华夏药业提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Apollo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（18：82）；流速：0.8 mL·min-1，柱温：35 ℃，检测波长：348 nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含32 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取抱茎苦荬菜药材粉末约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称重，加热回流提取1 h，冷却至室温，再次称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3 方法学考察

3.1 线性关系考察

精密吸取“2.2.1”项下木犀草素-7-Oβ-D-葡萄糖醛酸苷对照品溶液1、3、5、8、10、12、15 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行分析测定，以峰面积为纵坐标，以对照品含量为横坐标绘制标准曲线，其回归方程为Y=2687.4X+14.451（=0.9998）。结果表明，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在0.04318～0.6477 μg，呈良好的线性关系。

3.2 精密度试验

精密吸取同一批抱茎苦荬菜供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行分析，连续进样测定6次，记录峰面积值，其RSD为1.58%，表明仪器具良好的精密性。

3.3 稳定性试验

精密吸取同一批抱茎苦荬菜供试品溶液，分别在0、1、3、12、22、32 h进样测定峰面积，RSD为1.29%，表明木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在32 h内稳定性良好。

3.4 重复性试验

精密称取同一批抱茎苦荬菜药材6份，按“2.2.2”项下方法制备成供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析测定，计算样品中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量，其结果RSD为1.44%（n=6），表明该方法的重现性良好。

3.5 回收率试验

分别称取已知含量的抱茎苦荬菜药材粉末（批号：1707006）6份，每份0.4 g，精密称定，分别精密加入木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品溶液（浓度0.01608 mg/mL）50 mL，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进样分析测定，计算回收率。结果其平均回收率为98.92%，RSD ＝0.51%（n=6）。

3.6 样品含量测定

取10批抱茎苦荬菜药材，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进样分析测定，计算含量。结果显示，10批抱茎苦荬菜药材中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量分别 为0.306%、0.214%、0.228%、0.321%、0.289%、0.247%、0.198%、0.277%、0.180%、0.256%。

4 讨论

4.1 色谱柱的选择

本试验考察了Apollo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Luna C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）三种色谱柱，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷均可达到基线分离，以Apollo C18色谱柱柱效最高。

4.2 柱温的选择

本试验考察了30 ℃、35 ℃、40 ℃三种条件下的柱温，以35 ℃时测定木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的分离效果为最好。

4.3 检测波长的选择

取木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对照品溶液于200～400 nm波长范围内进行紫外扫描。结果木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷在210 nm、255 nm、348 nm波长处有最大吸收，在348 nm波长下，供试品色谱中杂质峰少。因此选定检测波长为348 nm。