慢性乙型肝炎患者血清α1微球蛋白水平与HBV-DNA载量的相关性研究*

耿 辉，魏雁虹，杨广民

吉林省人民医院医学检验中心，吉林长春 130021

慢性乙型肝炎(CHB)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染导致的一种传染性肝脏疾病，若不及时治疗，较易发展为肝硬化与肝癌。据统计，全球约有4亿人为HBV携带者，近30%的世界人口感染或曾经感染过HBV[1]。2006年全国乙型肝炎流行病学调查表明，我国1～59岁人群HBV携带率为7.18%，5岁以下儿童为0.96%，现有HBV感染者约9 300万人，其中CHB患者约2 000万人[2]。因此早期发现病毒性肝炎患者的肝脏损伤程度十分重要，目前临床中用于检测肝脏功能的指标较多，但准确客观地反映肝脏的实际功能情况的指标较少。CHB患者的血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)水平随分期不同而存在一定变化，在临床中可作为判断患者病毒感染程度的重要指标[3]。同时，HBsAg水平和病毒载量密切相关，可用于评价CHB的治疗效果。乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量升高被认为是反映HBV复制最灵敏的检测指标。研究显示，血清HBV-DNA载量不仅与肝脏损伤相关，同时也是选择临床治疗药物的重要依据[4]。有研究表明，血清α1微球蛋白(α1-MG)可作为评价肝脏损伤有效指标，临床价值较高[5-6]。本研究旨在探讨CHB患者血清α1-MG水平与HBV-DNA载量的相关性，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2016年5月至2018年9月收治的300例CHB患者为研究对象。患者均符合文献[5]的诊断标准。排除合并甲型、丙型、戊型肝炎，长期嗜酒，特殊用药者27例，以及肾功能异常患者40例，最终纳入研究的CHB患者共233例。患者中HBsAg阳性患者190例(HBsAg阳性组)，乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性患者43例(HBeAg阳性组)。同时，根据HBV-DNA复制情况将233例CHB患者分为HBV-DNA低载量患者(HBV-DNA载量<103copy/mL)及HBV-DNA高载量患者(HBV-DNA载量>103copy/mL)。

1.2仪器与试剂 ABI-7500型PCR检测仪(检测下限为5×102copy/mL)，贝克曼AU2700型全自动生化分析仪，Heraeus Biofuge stratos低温台式离心机，DYY-Ⅲ垂直电泳槽，GILSON加样器。肝功能、肾功能检测试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司)，血清α1-MG、β2微球蛋白(β2-MG)检测试剂盒[英科新创(厦门)科技有限公司]，Trizol，氯仿，异丙醇，无水乙醇、DEPC处理水(美国伯乐生命医学产品有限公司)。

1.3方法 所有患者于入院后6 h内采用带分离胶采血管采集静脉血5 mL，离心后吸取上层血清，分装备检。所有患者均未进行过抗病毒治疗。取出备检血清室温融化，采用免疫比浊法检测血清α1-MG。采用紫外-乳酸脱氢酶法检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)，采用紫外-苹果酸脱氢酶法检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，采用散射比浊法检测前清蛋白(PA)，采用AMP缓冲液法检测碱性磷酸酶(ALP)，采用肌氨酸氧化酶法检测肌酐(CRE)，采用紫外-谷氨酸脱氢酶法检测血尿素氮(BUN)。采用免疫比浊法检测血清β2-MG、α1-MG水平。检测的仪器均为全自动生化分析仪。各指标参考范围如下：ALT>60 IU/L；BUN≤7.2 mmol/L；CRE水平，男性≤106 μmol/L，女性≤97 μmol/L。采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA载量。取混匀的血清20 μL加入20 μL裂解液，混匀后100 ℃沸水浴10 min，最后以15 000 r/min离心3 min，取4 μL上清液待检。检测时，加入4 μL待检上清液于底层反应液中，混匀后高速离心片刻，然后放入PCR仪进行检测，设置程序94 ℃预变性2 min，再按94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s扩增35个循环。以上所有操作均严格按照操作说明书进行。

2 结 果

2.1HBsAg阳性患者中不同HBV-DNA载量水平患者血清α1-MG水平的比较 190例HBsAg阳性患者HBV-DNA载量分析结果显示，HBV-DNA高载量患者88例(高载量A组)，HBV-DNA低载量患者102例(低载量A组)。高载量A组α1-MG水平为(26.5±8.5)mg/L，低载量A组α1-MG水平为(20.5±5.5)mg/L，两组比较，差异无统计学意义(t=1.105 7，P>0.05)。

2.2HBeAg阳性患者中不同HBV-DNA载量水平患者血清α1-MG水平的比较 43例HBeAg阳性患者HBV-DNA载量分析结果显示，HBV-DNA高载量患者15例(高载量B组)，HBV-DNA低载量患者28例(低载量B组)。高载量B组α1-MG水平为(19.2±7.2)mg/L，低载量B组α1-MG水平为(18.5±6.3)mg/L，差异无统计学意义(t= 1.325 1，P>0.05)。

3 讨 论

目前，血清α1-MG已用于评价肾功能，且应用于临床相关疾病的诊断、治疗、判定预后。梁旭霞等[7]研究发现，α1-MG预测子痫前期的灵敏度、特异度均较高，并对疾病的发展及预后评估有一定价值。谢庆平等[8]发现α1-MG及血清胱抑素C联合检测可以作为诊断早期糖尿肾病的重要依据。耿辉[9]研究显示，α1-MG在肝功能异常患者中与肝功能指标ALT及AST呈显著负相关，且其水平随着肝损伤程度的加重而降低。莫明发[10]研究表明，肝炎、肝硬化等肝病及艾滋病患者中α1-MG水平降低。徐美等[11]研究发现，在HBV慢性感染的不同阶段，患者血清中HBsAg水平存在明显差异，从免疫耐受期到HBeAg阴性期，患者血清中HBsAg水平呈不断升高的趋势，而HBV-DNA载量则呈下降趋势。以上结果说明HBsAg阳性患者HBV-DNA载量与HBsAg水平呈负相关。此外，周锐峰等[12]研究发现，在病程早期，HBV-DNA载量和HBeAg水平与原发性肝癌(PHC)分期及进程有一定相关性。王志剑等[13]发现，HBeAg转阴前，CHB患者总HBV-DNA水平和cccDNA水平呈正相关，HBV与丙型肝炎病毒感染和PHC的发病进程存在相关性[14]。本研究共检测了233例CHB患者血清中α1-MG水平，根据HBsAg、HBeAg阳性情况对患者进行分组，结果表明，HBsAg阳性患者中，HBV-DNA高载量A组α1-MG水平为(26.5±8.5)mg/L，低载量A组α1-MG水平为(20.5±5.5)mg/L，差异无统计学意义(t=1.105 7，P>0.05)；HBeAg阳性患者中HBV-DNA高载量B组α1-MG水平为(19.2±7.2)mg/L，低载量B组α1-MG水平为(18.5±6.3)mg/L，差异无统计学意义(t=1.325 1，P>0.05)。说明患者在不同HBV-DNA复制水平情况下CHB患者血清α1-MG 的水平差异较小，α1-MG水平变化并非病毒导致，患者血清α1-MG水平与HBV感染无关。

综上所述，血清α1-MG与HBV-DNA载量无明显相关性，不能用于判断CHB患者病毒复制情况，对病变的严重程度、观察疗效及评估预后无指导作用。