阿魏酸对大鼠体内氯沙坦钾的药代动力学影响

吴煜 林益渊 王琼 杨金招 熊建华

4-羟基-3-甲氧基苯丙烯酸是植物中普遍存在的一种功能性酚酸类物质，也被称为阿魏酸，是川芎、升麻、当归等常用药物中的主要功能成分之一［1-3］。有研究发现，中草药长期或短期应用均会影响机体较多内源性和外源性物质的功能［3］，如银杏内酯A会影响PXR的表达、贯叶金丝桃会影响CYP3A4的活性。PXR在调节药物代谢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相酶的活性及表达水平有着重要的作用。氯沙坦是心血管系统疾病治疗常用药物［4-5］。阿魏酸被现代药理证实具有免疫调节、抗癌、抗菌消炎、抗血栓、抗氧化等作用［6］。有学者发现阿魏酸长期使用会对氯沙坦钾的药代动力学产生影响［7］。本文探讨阿魏酸对大鼠体内氯沙坦钾的药代动力学影响。

1 材料与方法

1.1 实验药品及仪器（1）实验药品：阿魏酸由北京百灵威科技有限公司提供，药品编号为408508，纯度为99%。氯沙坦钾片由杭州默沙东制药有限公司提供，国药准字号为H20000371，规格50mg/片*7片。羧甲基纤维素钠（CMC-Na）由中国药品生物制品检定所提供，批次为315824。（2）实验仪器：①超高效液相色谱仪：美国Waters公司生产，型号为ACQUITYI-Class；②三重四级杆质谱仪：美国Waters公司生产，型号为XevoTQD。

1.2 实验大鼠采用SD大鼠，共24只，8周龄，均为雄性，体质量为284~328g，平均（301.28±15.85）g。

1.3 实验方法按照随机数字法将24只雄性SD大鼠分为实验组和对照组，每组12只。对照组：每天上午8点灌胃0.5%CMC-Na，灌服剂量为10ml/kg，30min后灌服氯沙坦钾混悬液，灌服剂量为5mg/（kg·d），连续灌服7d。实验组：每天上午8点灌胃阿魏酸混悬液，灌服剂量为50mg/（kg·d），30min后灌服氯沙坦钾混悬液，灌服剂量为5mg/（kg·d），连续灌服7d。分别于灌服前及灌服后20min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min、24h采集SD大鼠的尾静脉血0.3ml，并置于EP管中（含有肝素抗凝），进行离心处理，离心条件为（13000r/min，离心10min），采集上清液，并在-80℃中保存，后进行统一测定。

1.4 测定方法采用超高效液相色谱-四极杆超高分辨质谱联用仪检测各样本中的氯沙坦浓度水平，具体操作方法：（1）开机，启动设备，进入仪器控制面板，设置所需的各项相关参数，其中质谱仪部分参数设置如下：ES+、源温度设置为150℃、毛细管电压设置为3.5kV、去溶剂化温度设置为400℃、去溶剂化气体（氮气）流速为1000L/h、锥孔气体（氮气）流速为50L/h；色谱仪部分参数设置如下：每分钟流量控制为0.4ml/min，色谱柱温度设置为35℃，进样量设为2μl。（2）设置分析用流动相清洗流路，等待色谱柱、系统的平衡，基线稳定，开始进样分析。其中色谱柱为BEHC18的色谱柱（规格为2.1mm×50mm，1.7μm），流动相为美国Merk公司提供的乙腈（A）-0.1%的甲酸（B）。检测时长为2min，分别为0~0.3min，55%A；0.3~0.5min，55%~90%A；0.5~1.2min，90%A；1.2~1.7min，90%~55%A；1.7~2.0min，55%A。将替米沙坦（上海玉博生物科技有限公司，产品编号：S201587，纯度>98%）作为内标。分析结束，数据处理。

1.5 分析方法验证将替米沙坦（Telmisartan）作为内标，氯沙坦（Losartan）在超高效液相色谱-四极杆超高分辨质谱联用仪的相关检测条件下，其出峰时间分别为0.62min，0.84min。见图1。

图1 Telmisartan与Losartan高效液相色谱图

1.6 统计学方法血药浓度按照非房室模型依赖性参数的方法，采用DAS3.0软件进行计算。采用SPSS21.0版对药代动力学参数进行统计学描述，计量资料以（±s）表示，用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组SD大鼠不同时间的平均血药浓度分布情况 实验组灌服后20min、30min、45min、60min的氯沙坦血药浓度与对照组较为接近；灌服后90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min氯沙坦血药浓度高于对照组（P<0.05）。灌服后24h时间段内，两组氯沙坦血药浓度差距逐渐缩小。见图2。

图2 两组SD大鼠不同时间的平均血药浓度分布情况

2.2两组SD大鼠药代动力学参数比较实验组T1/2、AUC（0-t）、AUC（0-∞）低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），实验组CL/F、Cmax高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组Tmax比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 两组SD大鼠药代动力学参数比较（±s）

表1 两组SD大鼠药代动力学参数比较（±s）

组别 n T1/2（h） CL/F［L/（h·kg）］ AUC（0-t）［ng/（ml·h）］ AUC（0-∞）［ng/（ml·h）］ Cmax（ng/ml） Tmax（h）实验组 12 1.48±0.21 2186.89±131.54 2174.05±135.62 2021.62±132.65 832.63±92.36 0.57±0.22对照组 12 1.80±0.52 2024.58±254.36 2398.08±248.62 2342.25±256.38 702.65±65.82 0.64±0.18 t值 2.685 2.028 3.125 3.524 2.952 1.852 P值 0.038 0.049 0.018 0.012 0.031 0.053

3 讨论

本资料对SD大鼠进行阿魏酸联合氯沙坦灌服，其中阿魏酸普通人群常规用量为100~400mg/d（注射液），100~200mg/d（片剂）。氯沙坦普通人群常规使用剂量为50mg/d，根据等效剂量换算原则，计算SD大鼠使用的阿魏酸的灌服剂量为50mg/（kg·d），氯沙坦的灌服剂量为5mg/（kg·d），但由于阿魏酸在水中的溶解度不高，且对光敏感，为此本研究通过以羧甲基纤维素钠（CMC-Na）为溶媒，制成阿魏酸混悬液进行灌注。实验组灌服后的20min、30min、45min、60min的氯沙坦血药浓度与对照组较为接近；灌服后90min、120min、180min、240min、360min、480min、600min、720min的氯沙坦血药浓度高于对照组。灌服后24h时内，两组氯沙坦血药浓度差距逐渐缩小。实验组T1/2、AUC（0-t）、AUC（0-∞）低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），实验组CL/F、Cmax高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组Tmax对比，差异无统计学意义（P>0.05）。表明阿魏酸会改变氯沙坦的药代动力学特征。推测其原因：（1）CYP3A4和（或）CYP2C9是氯沙坦主要代谢酶。有研究发现机体代谢氯沙坦的主要酶类为CYP450酶系，口服氯沙坦后会经CYP450酶系中的CYP3A4和（或）CYP2C9进行生物转化，并有接近14%的氯沙坦被代谢为氯沙坦羧酸（E-3174），后者是发挥相应生理作用的活性物质［8］。有研究［9］发现阿魏酸灌服后会引起增加CYP2C9、CYP3A4的启动子的活性，氯沙坦代谢加快。提示临床上在联合使用阿魏酸及氯沙坦时，需考虑两者间的相互作用，从而尽可能避免药物间的相互作用所带来的安全性问题，提高治疗效果。（2）口服氯沙坦吸收。有研究［10］证实阿魏酸对机体有机阴离子转运体的活性有明显抑制作用，会影响部分药物的吸收，但具体机制仍不明确。而氯沙坦口服后，其吸收效果是否受阿魏酸的影响，目前仍未有相关的研究证实。本资料中实验组和对照组在灌服后60min内氯沙坦平均血药浓度较为相似，提示阿魏酸对氯沙坦口服吸收影响不明显。

综上所述，阿魏酸联合氯沙坦使用，氯沙坦的药代动力学改变更多是有由于阿魏酸增加了CYP2C9、CYP3A4等酶类的活性，而不是通过影响氯沙坦的口服吸收导致。