红掌无菌系建立及培养技术

任武婷

红掌又称安祖花、花烛等，属天南星科花烛属多年生常绿草本植物，性喜温热多湿而又排水良好的环境，怕干旱和强光暴晒。红掌也是温室名贵花卉之一，由于其花色艳丽，花期持久，一年四季红花绿叶，既能作为盆栽，又能作为切花。随着人们生活水平的提高，红掌的需求量也在加大。短期内要满足红掌的市场需求，用分株方法繁殖时间太长，用播种繁殖易产生变异，不利于大规模生产，只有利用组织培养快速繁殖技术，才能满足人们对红掌的大量需求。

1   准备阶段

首先制定出详细的培养方案，准备试验所需的工具器具，制备适宜的培养基，并经高温高压灭菌备用，然后根据方案配制出试验用的化学消毒剂。

2   外植体采集与消毒

2.1   外植体采集   选择在晴天的中午9：00—10：00采集外植体，以温室里的“红国王”品种的健壮无病虫害的植株上刚长出1～3天的新叶为宜（叶片半卷曲）。

2.2   外植体清洗消毒   用自来水将采集回的叶片冲洗干净，再用洗洁精清洗，在流水下冲洗2小时，然后放到无菌操作台上进行消毒。①先用75%酒精消毒30秒，然后用无菌水冲洗1次，再用0.1%HgCl2浸泡10～15分钟，浸泡时用玻璃棒轻轻搅动，使外植体与消毒剂充分接触，最后用无菌水冲洗5次。当消毒时间为10分钟时，污染率下降至6%，消毒效果较理想。消毒时间为15分钟时，污染率更低，为3%。综合考虑选择消毒15分钟。

3   接种和培养

3.1   接种   接种整个过程均需无菌操作，先将消毒好的叶片放到高温灭菌过的滤纸上，吸干叶片表面的水分，然后用刀片把叶片沿主脉切开，切掉叶片边缘药物侵蚀部分，将剩余部分切成1 cm×1 cm的小方块，再放到培养基中进行愈伤诱导。1/2 MS+0.5 mg/L BA+0.2 mg/L 2，4-D，琼脂4.7 g/L，糖30 g/L，pH=5.8，比较适合作诱导愈伤组织的培养基。每瓶放1个外植体，瓶身标注培养基名称、品种代码、接种日期、接种员代号，每天检查是否有感染，并及时清理。

3.2   培养   接种完毕送到培养室去培养，对愈伤组织的诱导来说，暗培养比较合适。湿度50%，温度23～32 ℃，20～26天后叶片开始膨大，等叶片边缘出现黄色颗粒状愈伤组织时，转为光照培养，光照强度800～1 500 lx，每天用光照12小时，35～50天后叶片边缘愈伤组织由淡黄色转变为墨绿色。

4   芽诱导

将诱导出的愈伤组织接种到芽诱导培养基中。1/2 MS+1.0 mg/L BA+0.3 mg/L IBA，琼脂4.7   g/L，糖30 g/L，pH=5.8，适合作芽诱导培养基。

5   芽增殖培养

将长出的丛芽（1～3个芽）分别接种到如下增殖培养基中：MS+0.5 mg/L BA+0.2 mg/L IBA，琼脂4.7 g/L，糖30 g/L，pH=5.8。每天光照时间12～14小时，光照强度2 000 lx左右，温度20～25 ℃。增殖率高，苗无畸形和玻璃化现象，30天可以进行继代。在增殖过程中选取最优质的大苗，淘汰弱苗，9～10次增殖率最高，随着继代次数的增加，增殖率下降。

6   生根培养

选择健壮且带有3片叶子的芽，转接到生根培养基（1/2 MS+1.0 mg/L IBA +0.5 mg/L IAA +2 g/L碳粉）中进行培养。光照2 500～      3 000 lx，每天光照時间为12小时，温度25 ℃，湿度50%。培养15天就可以长出3条根，根长0.2～0.5 cm，培养30天根长1～1.5 cm，就可以移入温室驯化炼苗。

7   驯化及出瓶移载

从培养室把瓶苗移到温室苗床上后驯化2周，对瓶苗适当遮阴，白天温度25～27 ℃，晚间温度21～23 ℃，湿度60%～70%。出瓶前一天打开瓶盖，使瓶内湿度接近温室湿度，出瓶时注意不要弄伤叶片和根，先把苗用纯净水清洗干净，再放到10%多菌灵溶液中消毒1分钟，然后再将苗栽到配好的泥炭基质中，苗移栽后用喷壶浇水，定期喷施杀菌剂（甲基菌硫灵和多菌灵）防止病虫危害。