应用高效液相色谱检测仪对他克莫司滴眼液的含量测定检测

2020-01-18福建省微生物研究所福建福州350007

中国医疗器械信息 2020年3期

福建省微生物研究所（福建福州 350007）

内容提要：目的：建立测定他克莫司滴眼液含量的高效液相色谱法。方法：以高效液相色谱法（HPLC）测定他克莫司含量，Agilent SB-CN柱为色谱柱；流动相乙腈：0.1磷酸=35:65（V/V），柱温40℃，流速2mL/min，紫外检测波长210nm。结果：在0.0248～0.2480mg/mL范围内（r=0.9997），他克莫司峰面积和质量浓度呈良好线性关系，平均回收率为99.0%，RSD为0.79%。3批他克莫司滴眼液含量分别为99.3%、99.6%、100.1%。结论：该含量测定方法准确度高，操作简便，检测结果具有较高稳定性，专属性强，在制剂质量控制中有明显效果。

他克莫司（Tacrolimus）又名FK506，是从链霉菌属中分离出的发酵产物[1-3]。FK506在临床上使用范围较大，常用的比如一些自身免疫系统疾病治疗，器官移植后排斥反应抵抗治疗，以及一些与免疫相关眼科疾病中也有应用[4-8]。

1.仪器与试药

高效液相色谱仪选择的是安捷伦科技有限公司生产制造的Agilent1260，电子分析天平型号选择为梅特勒托利多公司的XA105；他克莫司（福建科瑞药业有限公司，批号：181001，含量：99.6%）；他克莫司对照品（福建科瑞药业有限公司，批号：170801RS（1），含量：97.3%）；乙腈（色谱纯，merck）。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

流动相乙腈：0.1%磷酸，比例为35:65，紫外检测波长210nm，色谱柱为Agilent SB-CN（4.6mm×250mm，5μm），柱温40℃，流速2mL/min。

2.2 专属性试验

取FK506对照品溶液、阴性样品溶液以及他克莫司滴眼液，在色谱条件下进样20μL，分析色谱图谱。

2.3 制备溶液

2.3.1 配制对照品溶液

取适量FK506对照品，在其中加入一定量的流动相，超声下进行溶解稀释定容，得到1mL中含0.1mg溶液，将制得溶液20μL加入到液相色谱仪中。

2.3.2 样品溶液的配制

取一定量样品溶液加人适量流动相，超声下进行溶解稀释定容，得到1mL中含0.1mg溶液，将制得溶液20μL加入到液相色谱仪中，记录色谱图。

2.3.3 配制阴性样品溶液

依照处方配制不含他克莫司样品，作为阴性样品，照样品溶液配制方法配制阴性样品样品溶液。

2.4 重复性试验

样品取6份后进行测定含量数据值99.4%，RSD数据值为0.52%。试结果可见含量测定方法具有较好重复性。

2.5 中间精密度

样品取6份后进行测定，最终结果与重复性试验所得到的结果进行统计分析，得出含量数据99.3%，RSD数据为0.98%。结果可见样品含量测定有较高精密度。

2.6 标准曲线制备

精密称取他克莫司对照品25.00mg，置25mL容量瓶中加流动相稀释到刻度。精密吸取0.5mL，1mL，2mL，3mL，4mL，5mL分别置20mL容量瓶中，加流动相定容。分别进样20μL二次，以对照品进样浓度为横坐标，峰面积积分值为纵标，绘制标准曲线，计算回归方程y=7543.2x+351622，r=0.9997，他克莫司在0.0248～0.2480mg/mL范围内呈良好线性关系。

2.7 稳定性试验

将试品溶液配制后对其稳定性进行检测，在不同时段下测定，测定时段为0h、1h、2h、4h、8h和12h，峰面积RSD为0.56%，可见溶液具有较高稳定性，在常规分析中适用性较强。

2.8 加样回收率试验

取含量已知的样品9份，分为3批3份，每一批中分别加入FK506对照品储备液0.8mL、1.0mL和1.2mL，放入10mL量瓶中，然后再在其中加入流动相，稀释到刻度位置后，依据样品含量进行测定，得出回收率99.0%，RSD数值0.79%。

2.9 样品含量测定结果

精密称取他克莫司滴眼液3批样品，在其中加入一定量的流动相，在超声状态下进行溶解，稀释后定容，使得每1mL溶液中含量为0.1mg，在液相色谱仪中加入20μL制得液体，分析其色谱图。3批样品含量测定结果：批号20181201含量99.3%；20181202含量99.6%；20181203含量100.1%。