探讨甲状腺激素的免疫学检测方法与进展研究

天津市第二医院内分泌实验室 （天津 300211）

内容提要： 甲状腺激素是临床检测的重要指标之一。用不同的检测技术检测血液中甲状腺激素水平，有助于更准确地确定患者甲状腺疾病的类型，目前最典型应用最广泛的检测甲状腺激素水平的方法都是免疫标记法，遂本文选择了几种常用的免疫分析方法试着说明它们的原理与其存在的优缺点。

近年来，甲状腺疾病的发病率逐渐上升，甲状腺疾病的发生主要与免疫因素有关，血液中甲状腺激素的含量直接由免疫标记法测定。这使得那些无法准确定量分析的超微量物质能够精确定量，在很大程度上促进了内分泌等生命科学的发展，随着科技进步，比传统放射免疫分析技术发展快的技术相继诞生[1]。这些检测方法能灵敏、特异、快速、准确地测定血液中不同激素的含量，不仅没有放射性污染，且可自动分析批量测定。目前被广泛应用于激素、药物和特殊蛋白质的检测。

1.甲状腺疾病发病率与危险因素分析

1.1 甲状腺疾病发病率

甲状腺疾病大多起源于滤泡上皮细胞，甲状腺疾病的发生与性别、地区、种族等因素有关，女性发病率较高，甲状腺疾病早期无明显症状和体征[2]。通常情况下，颈部触诊及超声可发现甲状腺小肿块，典型的临床表现为甲状腺肿块，质地坚硬固定，表面不规则，是各类癌症的常见表现，吞咽时腺体不易移动。除了有明显的肿块生长外，还伴有周围组织的侵犯，终末期由霍纳综合征引起的声嘶、吞咽困难、交感神经压迫、颈丛侵犯引起耳、枕、肩痛，局部淋巴结与远处器官转移等表现。

1.2 甲状腺疾病危险因素分析

甲状腺疾病的发病率受到各种因素的影响，这些因素通常包括家庭历史因素、辐射因素、碘过量和缺碘。肥胖和新陈代谢疾病及其他因素[3]。大约5%的甲状腺患者有相同类型的甲状腺疾病的家庭史。放射性辐射是目前唯一决定甲状腺疾病风险的因素，碘过量或缺碘与甲状腺的高发病率也有关，肥胖或新陈代谢疾病中胰岛素抵抗或高胰岛素可导致甲状腺疾病。北原（Kitahara），沃林斯基（Wolinski）等的研究表明，肢端肥大症患者中，甲状腺结节以及甲状腺疾病的发生风险明显增高。过量食用烟熏和盐腌海鲜、油、奶酪、淀粉等可能增加甲状腺疾病的风险，但仍需进一步研究；女性生殖因素（如产次、使用性激素、月经周期规律和绝经状况等）和甲状腺疾病之间的相关性研究中未发现一致的结论。

2.甲状腺激素的作用表现与免疫学检测方法的研究进展

2.1 甲状腺激素的作用与表现

甲状腺激素是甲状腺滤泡上皮细胞合成的酪氨酸碘化物，主要是四碘甲状腺原氨酸（又称甲状腺素，T4）、三碘甲状腺原氨酸（T3）和少量反三碘甲状腺原氨酸（rT3）[4]。甲状腺素是由甲状腺合成和分泌的，具有极其重要的生理功能，如甲状腺激素在调节体温、代谢、生长发育等方面起着重要作用。甲状腺激素分泌过患者会出现兴奋、烦躁、失眠、暴饮暴食、营养不良、体重下降等临床表现，甲状腺激素分泌不足的患者通常皮肤干燥、皮肤粗糙、头发少、嗜睡、疲劳，反应慢、体重增加、记忆力差等临床表现。

2.2 甲状腺激素免疫学检测方法的研究进展

放射免疫分析（RIA）由美国科学家Yalow等于1959年建立[5]。这是划时代的进步。用放射性核素标记抗原或抗体，可与两者分别进行特异性结合形成检测复合物，当前国内一些实验室测定血清中游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺素（TSH）仍采用此类方法。RIA试剂盒适用于不同的检测元素，具有灵敏度高、特异性强、精密度高等特点，可用于抗原或触觉的定量检测。适用于不同激素、微蛋白、肿瘤标志物和医药产品的检测。由于其设备简单、成本低廉，目前仍在使用。

酶免疫法（EIA）由瑞典斯德哥尔摩大学的Perrmann-Engelvall教授于1966年建立[6]。克服了RIA的放射性污染它将抗原抗体特异性免疫反应与酶高效催化结合，用特异性酶标记抗原或抗体，使其成为一种具有微量活性的免疫酶。根据酶催化底物的显色程度，可用于定性或定量测定，具有设备简单、操作安全等优点。

酶联免疫吸附试验（ELISA）于1971年由荷兰的schuurs和vanweeman教授建立[7]。它结合了抗原抗体反应的特异性和酶对底物的非常有效的催化作用，已用于大分子和小分子抗原的定量测定，其特点为灵敏度高、特异性好、简便、稳定等，孙颖等建立了可用于检测血清抗甲状腺过氧化物酶抗体的定量的ELISA方法。

化学发光免疫分析法（CLIA）于1977年由Arakawe首先报道[8]。根据RIA的基本原理，将高灵敏度的化学发光场景结合高特异性的免疫反应检测微量抗原或抗体的一种非放射标记免疫分析技术。20世纪90年代初，英国研究人员率先开发了试剂盒，标志着化学发光技术的临床应用。新一代放射免疫标记、酶免疫分析、荧光免疫分析和化学免疫分析的免疫分析技术。说明CLIA具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单等优点，具有广阔的应用前景。

化学发光酶联免疫分析（CLEIA）属于免疫酶。酶反应的底物是发光剂。该酶用于检测抗原或抗体的免疫反应[9]。复合物上的酶再次作用于发光底物上以测量发光强度。萤火虫在发光系统中可以放大发光信号，使其长期稳定。它具有设备简单、线性范围宽、特异性强、灵敏度高等优点。CLEIA作为同位素标记技术，具有与EIA相同的操作步骤。

时间分辨荧光免疫测定法（TRFIA）是在荧光免疫分析的基础上发展起来的一种特殊的分析技术[10]。可以对荧光波长和激发波波长两者比对后的差异进行分析，有效改善了常规紫外光谱分析中光损失的影响，同时荧光免疫的光电接受器与激发光两者不在同一线上，且激发光直接到达不了光电接受器上，使得光学分析的灵敏度得到了很大提升改善，为目前灵敏度最高技术水平。

电化学发光免疫分析法（ECLIA）它是继RIA、荧光免疫分析、EIA和CLIA之后的新一代免疫标记技术[11]，集电化学发光、生物素-亲和素、磁粉技术和免疫分析于一体，以电化学发光剂为标志物，以抗原为特异性反应，通过电化学血红素发光检测抗体或抗原，结合抗体反应特异性高、对电化学物质敏感性高的特点，具有便于检测、无放射性、线性范围宽等特点，冯勤等人认为，ECLIA比ELISA在精确度和治愈程度上都要好，并且具有高效稳定的特性，符合当下医院的工作需要和患者的更高诉求，在临床应用方面具有较高价值。

3.结束语

甲状腺激素是临床检测的重要指标之一。目前甲状腺激素水平的检测最常用的方法是免疫学鉴定。RIA技术为全自动免疫检测技术的分析奠定了良好的基础，但是由于其放射性污染已逐步被淘汰，EIA技术在其基础发展而来，但因其染色或偏振光技术缺陷存在酶的不稳定性、测量范围窄、灵敏度低、定量困难、漏诊误诊或假阳性等不稳定因素也在临床应用受到限制[12]。随着科技进步CLIA、CLEIA、ELISA、TRFIA等检测技术相继出现，ELISA设备简单、价格低廉，操作复杂，临床应用受到限制。ECLIA具有设备简便、线性范围宽、特异度、灵敏度高等优点，ELISA与ECLIA测定结果均能达到临床要求，具有可比性避免了RIA的放射性污染，但自动化程度不高。CLIA方法具有操作便捷、重复性好、自动化程度高、检测快速及范围广等特点。且准确度和利用率均优于ELISA，具有较高的灵敏度和特异性，TRFIA与CLIA互为补充。ECLIA具有线性范围宽、精密度高、重复性好、操作简便、结果准确可靠等优点。

综上所述，随着自动化分析仪的快速推广与应用，CLIA和ECLIA会成为甲状腺激素测定的优先选择，势必引领行业发展趋势。