腐植酸对蛋鸡产蛋后期产蛋性能、抗氧化及促产蛋激素分泌的影响

鲁鑫涛，邱家凌，祝家明，周 琴，刘 兵，余东游

（浙江大学动物科学学院，农业农村部华东动物营养与饲料重点实验室，浙江杭州 310058）

随着我国对动物饲用抗生素使用的不断严格控制，寻找一种替代抗生素使用的饲料添加剂已变得越来越重要。腐植酸能作为一种促生长剂能促进动物充分利用营养物质，并通过增强机体免疫力，对抗病原体，来改善动物的健康状况与生产性能[1-2]。腐植酸主要来源于土壤或腐殖质，是动植物残骸在土壤中经微生物及物理化学分解转化形成的一种具有芳香族杂环化合物与聚羧酸侧链的复杂有机混合物[3]。腐植酸分子结构中含有许多酚羟基、羧基和醌基等活性基团，其作为电子或氢的提供体，可激活多酚氧化酶、过氧化物酶和抗坏血酸氧化酶等活性酶，提高机体抗氧化水平、免疫功能和抗病力。此外，腐植酸及腐植酸盐资源丰富、富含多酚类物质，生物学活性高，对猪、鸡及反刍动物安全且无毒副作用[4-7]。

根据来源不同，腐植酸可分为天然和人工合成腐植酸，其有效成分和含量有一定的区别[8-9]。在产蛋后期，蛋鸡的生产性能及健康状况会逐步下降。已有研究表明，腐植酸可改善蛋鸡的健康状态，提高生产性能，但其在蛋鸡上的应用效果存在较大差异[10-15]，而目前关于天然和合成腐植酸对产蛋后期蛋鸡的影响研究尚鲜有报道。本试验以产蛋后期蛋鸡为研究对象，在饲粮中分别添加不同来源的腐植酸，探究天然和合成腐植酸对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、抗氧化指标和促性腺激素水平的影响，旨在为腐植酸在蛋鸡生产中的应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 天然提取腐植酸（HAA），有效成分（风干基础）包括有机物质62.88%、钙0.93%、铁 1.59%；人工合成腐植酸（HAB），含有机物质60.51%、钙1.17%、铁1.21%。

1.2 试验设计 试验采用单因子试验设计，选用52 周龄健康、体重（1.31±0.12）kg、产蛋率（81.39±0.23）%的海兰白蛋鸡405 羽，随机分成3 个组，每组设9 个重复，每个重复15 羽。对照组（CON 组）饲喂基础饲粮，试验组分别在对照组基础上添加1 000 mg/kg 的HAA和HAB。预试期2 周，在此期间对鸡群进行调整，使各组蛋鸡的饲料消耗量、产蛋率、蛋重差异不显著，正试期8 周。蛋鸡试验的基础饲粮参照NRC（1994）和《海兰白蛋鸡饲养手册》配制成粉料，基础饲粮组成及营养成分见表1。

1.3 饲养管理 蛋鸡饲养于农业农村部华东动物营养与饲料重点实验室研究试验基地半开放式鸡舍，采用上中下3层阶梯式笼养，每层5 个鸡笼（45 cm×30 cm×30 cm），每笼养3 羽。按蛋鸡场常规方法进行饲养，采用不锈钢料槽与乳头饮水器，每天定时喂料和清粪，使蛋鸡自由采食、饮水，鸡舍采用人工光照16:8（L/D），光照强度为20 Lx。每周对鸡舍进行消毒1 次。

1.4 样品采集与制备 在试验第8 周末，以重复为单位，每个重复随机选取1 羽蛋鸡，用促凝管在翅静脉采血5 mL，以3 000 r/min 离心10 min 制备血清，上清液分装于1.5 mL的Eppendorf 管中，保存在-80℃的冰箱中待用。

1.5 测定指标与方法

1.5.1 生产性能指标 以重复为单位，每天记录产蛋数量、不合格蛋数（包括软壳蛋、破壳蛋、沙壳蛋等）及总蛋重量，每周通过减量法计算鸡群的饲料消耗量，然后统计产蛋率、平均蛋重、平均日采食量、不合格蛋率和料蛋比等。

表1 基础饲粮组成及营养成分（饲喂基础）

1.5.2 蛋品质指标 试验第8 周末，从每个重复中随机选取2 枚鸡蛋，每组18 枚鸡蛋，使用实验室DET-6 000 全自动蛋品质测定仪（日本Nabel 公司）测定蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色和哈氏单位等蛋品质指标。

1.5.3 血清生化与抗氧化指标 采用SpectraMax M5 多功能酶标仪（美国Molecular Devices 公司）测定血清中的生化指标与抗氧化指标，生化指标包括碱性磷酸酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性及总蛋白、白蛋白、尿酸、总胆固醇、甘油三酯和葡萄糖含量；抗氧化指标包括谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性及丙二醛含量；相应的试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，严格按照其说明书进行指标测定操作。

1.5.4 血清促性腺激素水平变化 血清促黄体素（LH）与促卵泡素（FSH）采用酶联免疫吸附（ELISA）法进行测定，对应的试剂盒购买于南京建成生物工程研究所，严格按照其说明书进行指标测定操作。

1.6 统计分析 数据经WPS Excel 初步整理后，采用SPSS 20.0 统计软件进行单因素方差分析（One-Way ANOVA），用Duncan´s 法比较组间差异显著性，并用平均值± 标准差表示。P＜0.05 表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著，0.05＜P＜0.1 表示有提高或降低的趋势。

2 结果

2.1 不同来源腐植酸对蛋鸡生产性能的影响 由表2 可知，与CON 组及HAB 组相比，饲粮中添加HAA 可提高产蛋率（P＜0.01）；HAB 组与CON 组差异不显著；与CON 组相比，饲粮中添加HAA 与HAB 均可提高平均蛋重（P＜0.05），降低不合格蛋率（P＜0.05）与料蛋比（P＜0.01），且HAA 组的料蛋比低于HAB 组（P＜0.01）。各组间日均采食量无显著差异。表2 饲粮中添加不同来源腐植酸对蛋鸡产蛋后期生产性能的影响

表2 饲粮中添加不同来源腐植酸对蛋鸡产蛋后期生产性能的影响

2.2 不同来源腐植酸对蛋鸡蛋品质的影响 由表3 可知，与CON 组相比，HAA 组与HAB 组中蛋白高度与哈氏单位均有提高（P＞0.05）。饲粮中添加腐植酸对鸡蛋的蛋壳强度、蛋黄颜色与蛋壳厚度等均无明显影响。

表3 饲粮中添加不同来源腐植酸对蛋鸡产蛋后期蛋品质的影响

2.3 不同来源腐植酸对蛋鸡血清生化指标的影响 由表4 可知，与CON 组相比，饲粮中添加HAA 或HAB 均可降低血清中的甘油三酯含量（P＜0.01），且HAA 可降低血清中白蛋白含量（P＜0.05），HAB 可提高血清中乳酸脱氢酶活性（P＜0.05）。

2.4 不同来源腐植酸对蛋鸡血清抗氧化指标的影响 由表5 可知，与CON 组相比，饲粮中添加HAB 可提高血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性（P＜0.05），各组间总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和丙二醛均无明显影响。

2.5 不同来源腐植酸对蛋鸡血清促性腺激素水平的影响由表6 可知，与CON 组相比，饲粮中添加不同来源的腐植酸均可提高血清中LH 水平（P＜0.01），FSH 水平有升高的趋势（0.05＜P＜0.10）；且HAA 组LH 水平高于HAB（P＜0.01）。

3 讨 论

3.1 不同来源腐植酸对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响 生产性能与蛋品质是影响蛋鸡生产养殖的主要经济指标。饲粮中添加腐植酸可以提高蛋鸡的生产性能。Eren等[12]和Kucukersan 等[16]报道，在饮水或饲粮中添加腐植酸可显著提高蛋鸡的产蛋率和饲料转化率，但对蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄蛋白指数及哈氏单位无显著影响。上山勝行等[15]试验发现，饲粮中添加1%或3%的腐植酸有抑制高龄蛋鸡产蛋率下降的作用。本试验中，饲粮中添加HAA 和HAB 均能降低产蛋后期蛋鸡的不合格蛋率和料蛋比；2 种腐植酸均不同程度地提高了促性腺激素水平，进而提高蛋鸡后期的产蛋率，其中HAA 效果更佳。这表明不同来源腐植酸可能因分子结构中的酚羟基、羧基和醌基等活性基团种类和数量不同，从而导致在蛋鸡上的应用效果存在差异。本试验中2 种腐植酸对蛋品质均无显著影响，但也有报道与该结果存在差异。如ArPá 等[11]报道，在饲粮中添加0.5%的腐植酸能提高鸡蛋的哈氏单位及蛋白高度；Rosa 等[17]试验也表明，在蛋鸡的换毛期添加0.1%或0.2%的腐植酸能有效提高蛋鸡的蛋壳厚度及蛋白含量。这可能是由于不同品种导致腐植酸对蛋品质的效果出现差异。Lala 等[10]研究发现，在蛋鸡饮水中添加腐植酸可以提高ISA Brown 和Fulani ecotype 2 种蛋鸡的产蛋率和总采食量，但Fulani ecotype 在营养物质利用率上比ISA Brown 更优。因此，蛋鸡试验采用的腐植酸来源、蛋鸡品种和所处产蛋阶段等因素均可能对蛋鸡实际生产性能产生一定的影响。

表4 饲粮中添加不同来源腐植酸对蛋鸡产蛋后期血清生化指标的影响

表5 饲粮中添加不同来源腐植酸对蛋鸡产蛋后期血清抗氧化指标的影响

表6 饲粮中添加不同来源腐植酸对蛋鸡产蛋后期血清促性腺激素的影响

3.2 不同来源腐植酸对蛋鸡血清生化指标的影响 血清生化指标是评价机体新陈代谢情况及健康状况的重要指标，可以反映动物体内糖类、蛋白与脂肪代谢的状况。禽类血清中的总胆固醇与甘油三酯含量的变化能反映机体脂类的沉积与代谢[18]。Ozturk 等[19]研究表明，在罗斯308 肉鸡饲粮中添加1 000 mg/kg 或1 500 mg/kg 腐植酸显著降低了血清总胆固醇含量。Hayirli 等[20]研究发现，在产蛋高峰期的蛋鸡饲粮中添加3 000 mg/kg 腐植酸盐可显著降低血清甘油三酯含量。本研究在产蛋后期添加2 种腐植酸均降低了甘油三酯含量，表明天然和合成的腐植酸均可通过甘油三酯的调控从而对蛋鸡脂类代谢产生影响。血清中总蛋白与白蛋白含量可反映机体营养状态及蛋白质吸收和代谢水平[21]。Bubel 等[22]研究表明，腐植酸制剂能有效降低产蛋后期蛋鸡的总蛋白。而本研究中添加HAA 降低了产蛋后期蛋鸡血清中白蛋白含量，这表明HAA 参与到了产蛋后期蛋鸡的蛋白质代谢中。此外，本试验结果表明添加HAB 对血清乳酸脱氢酶活性也有所提高。血清中乳酸脱氢酶与蛋鸡自身氧代谢旺盛程度相关[23]，其为糖代谢中催化丙酮酸最终生成乳酸的酶[24]。本试验表明HAB 可能对产蛋后期蛋鸡机体糖代谢水平产生了影响，这表明不同来源腐植酸由于其结构成分不一致可能对蛋鸡生化指标的调节也不一致。

3.3 不同来源腐植酸对蛋鸡血清抗氧化指标的影响GSH-Px 是机体内广泛存在的内源性酶抗氧化剂，作为机体抗氧化体系中重要的酶，在抗氧化过程中发挥重要作用，其能保护细胞膜不受活性氧的影响，其活性中心是硒半胱氨酸，其活力大小可以反映机体硒水平[25]。有研究表明，腐植酸与辅酶Q 在分子结构上存在一定相似性，腐植酸可能会影响线粒体氧化还原系统[2]。腐植酸具有从微生物处还原得到电子的能力，且不同来源的腐植酸在被还原时主要以其中的醌基作为电子受体，可产生半醌自由基。ESR 光谱研究表明腐植酸得电子的能力与半醌自由基浓度呈正相关[26-28]。Akbas 等[29]试验表明，腐植酸可以通过预防氧化应激对肾缺血再灌注损伤进行治疗，减轻了大鼠肾缺血再灌注损伤。本试验中，添加腐植酸在不同程度上提高了蛋鸡谷胱甘肽过氧化物酶活性，且HAB 的抗氧化作用明显优于HAA，表明腐植酸可以提高蛋鸡的抗氧化机能，但不同来源腐植酸的抗氧化作用有一定差异性，这可能与腐植酸分子结构中醌基含量相关。

3.4 不同来源腐植酸对蛋鸡血清LH 与FSH 水平的影响促性腺激素释放激素（GnRH）能选择性地刺激促性腺激素细胞释放促性腺激素LH 和FSH。LH 和FSH 分别刺激卵巢性腺激素的产生和配子的形成[30]。Sharp 等[31]和Yuichi 等[32]报道，血浆中LH 与家禽产蛋率直接相关，机体LH 水平升高，产蛋率提高。王新谋等[33]报道，高温条件会使产蛋鸡血浆中LH 水平下降，从而导致产蛋性能急剧降低。张利娟[34]试验表明，在产蛋后期的蛋鸡饲粮中添加不同浓度的黄芪多糖及小檗碱复合的中草药可提高血清中LH 与FSH 水平，进而提高生产性能。这些研究表明血清中LH 水平与蛋鸡生产性能存在一定正相关，血清中LH 水平提高可促进卵细胞的生成，提高产蛋率。据报道，黄芪多糖及小檗碱等中药中富含多酚类等生物活性物质，可促进下丘脑-垂体-性腺轴分泌促性腺激素[35]，提高血清中LH 水平。本试验中HAA 组、HAB 组血清中LH 水平均有极显著提高，这可能与腐植酸分子结构中的酚羟基、羧基和醌基等活性基团有关。而从LH 提高程度上来看，HAA 明显优于HAB，可能是由于HAA 含有的活性基团总量或类别比HAB 多，2 种腐植酸基团的差异还有待进一步研究。

综上所述，饲粮中添加腐植酸可通过提高机体抗氧化能力，改善体内促性腺激素水平，促进蛋鸡健康，提高产蛋性能。

4 结 论

本研究结果表明，饲粮中添加腐植酸可提高机体中LH 生成，改善血清生化指标及抗氧化指标，能不同程度提高产蛋后期蛋鸡的生产性能，且对蛋品质无负面影响，但不同来源的腐植酸对蛋鸡的作用效果存在一定差异。在本试验条件下，玉米-豆粕型饲粮中添加天然提取的腐植酸对产蛋后期的蛋鸡作用效果更佳。