牛布鲁氏菌病的诊断程序及免疫

文│冯辉（内蒙古自治区科尔沁右翼前旗巴日嘎斯台乡政府）

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病，是世界范围内流行广泛的人畜共患病之一，给畜牧养殖业带来较大损失。笔者从布鲁氏菌的病原、生存环境、鉴定、诊断程序和免疫几方面进行简要介绍，希望为布鲁氏菌病防控提供参考以及借鉴。

一、病原特点

布鲁氏菌的菌落较小，不能游动，呈球杆状，为革兰氏阴性菌。由于不能通过含0.5%乙酸的改良抗酸染色技术进行脱色，因此抗酸染色阳性。体液或组织涂片中的布鲁氏菌经抗酸染色呈特征性的成簇分布的红色球杆菌。由于布鲁氏菌的遗传相似程度高，所以有人建议都归入马耳他布鲁氏菌。然而，这一决定在2005年发生了变化，重新认定6种布鲁氏菌。此外一些新的种属，包括来自海洋哺乳动物和田鼠的布鲁氏菌，根据血清学特性，分为流产布鲁氏菌、马耳他布鲁氏菌、猪布鲁氏菌、绵羊布鲁氏菌、犬布鲁氏菌、沙林鼠布鲁氏菌、海豚布鲁氏菌、海豹布鲁氏菌。

二、生存环境

布鲁氏菌通常存在于性成熟的雄性和雌性动物的生殖器官，每种布鲁氏菌会感染特定的动物种类。被感染的动物作为传染源通常会持续感染其他动物。感染动物排泄的细菌在潮湿环境中可以存活几个月。通常是通过直接接触感染的动物和流产相关的体液和组织来传播。

三、布鲁氏菌的鉴定

布鲁氏菌可通过菌落的外观形态、生化实验、特定的培养需求和染料的生长抑制来鉴定。此外，与单特异性血清的凝集、对噬菌体的易感性及分子生物学方法也被用于细菌种类的鉴别。

分离初期，流产布鲁氏菌、马耳他布鲁氏菌和猪布鲁氏菌的菌落小而光滑，3～5天后变为有光泽的、带蓝色的、半透明的菌落。随着培养时间的增加，菌落变得不透明。相反，绵羊布鲁氏菌、犬布鲁氏菌的菌落呈粗糙型、无光泽、黄色、不透明、易碎。布鲁氏菌在血琼脂培养基上不溶血。

四、诊断程序

布鲁氏菌的诊断主要依赖血清学检测和细菌的分离鉴定。运输与处理样品时应非常小心，应在安全柜中操作。

实验室检测的样本必须与特定的临床症状相关。用MZM染色涂片法对标本进行检测，尤其是胎盘绒毛小叶、胎儿真胃内容物和子宫分泌物，常常显示出特征性的MZN阳性球杆菌。在含有细胞的样品中，这些细菌可能成簇出血。可用PCR方法检测样品，对此方法已有不同的描述。其优点是灵敏度高，可用于检测少量的样品和微生物。常用营养丰富的培养基来分离。培养基在37℃、5%～10%二氧化碳中可保存5天。虽然二氧化碳是个别细菌种类所需的特殊物质，但多数的布鲁氏菌是嗜二氧化碳的。在国家根除方案中，血清学检测用于国际贸易及鉴别被感染的牛羊群和个别动物。布鲁氏菌的抗原和一些其他的革兰氏阴性细菌如小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型，在凝集实验中产生交叉反应。

五、诊断

尽管初产母牛和经产母牛的流产会预示此病，但是临床感染没有特异性。胎盘绒毛小叶涂片的改良的抗酸染色，显示成簇的阳性球杆菌可确诊此病，此外通过检测胎儿皱胃内容物和子宫排放物也可发现抗酸染色阳性球杆菌。流产布鲁氏菌的分离鉴定方法已经被确认。分离鉴定标准：菌落的特征，改良的抗酸染色阳性，高效价抗血清的细菌凝集，快速尿素酶活性。生物学鉴定试验，已经开发出来包含PCR分子生物学方法等。

六、免疫

感染布鲁氏杆菌的牛难以治愈。国家扑杀计划是以检测和屠杀受感染牛为基础，通过血清学方法来检测。幼龄母牛的预防接种是根除计划早期的一项战略性措施，当布鲁氏菌病达到较低的流行水平时可以被终止。布鲁氏菌主要是细胞介导免疫。目前，牛主要用减毒株19（s19）疫苗，以及更新的RB51疫苗：减毒株19疫苗可在雌性小牛（5个月龄以上）接种。而成熟动物接种后可保持持续性的抗体效价。

RB51株式是稳定的、粗糙型突变体，它对预防动物流产有良好的保护作用，并且在传统的布鲁氏菌病监测中不会监测到血清学反应。在一些国家，它是预防布鲁氏菌的官方指定疫苗。

佐剂灭活疫苗虽然保护效果不显著，但是在过去已被用于一些国家的根除计划中。