影响动物疫病实验室检测结果的因素分析

文│辛光英 李颖（山东省青岛市黄岛区动物疫病预防与控制中心）

实验室检测是动物疫病防治工作的重要环节，不仅能检测动物免疫抗体水平，还能发现早期动物感染病原，保证动物产品卫生质量。但在动物疫病实验室检测过程中，实际结果与检测结果可能存在误差，主要因素如下。

一、检测人员因素

检测人员是影响实验室检测结果的重要因素。检测人员的文化水平、专业技术水平、工作熟练程度、对待工作的态度以及分析问题、解决问题的能力，直接影响到实验室检测结果的准确度。近年来，国家级、省级、区级兽医主管部门都非常重视检测人员的检测能力，每年都会组织兽医系统实验室进行能力比对，以查找出结果偏差的原因，并及时进行培训。

《质量手册》等相关文件规定，检测人员需有大专以上文化程度，有从事检测控制的相关专业知识，了解有关标准、计量、质量管理及相关法律法规知识，并经培训考核合格后持证上岗。例如血凝和血凝抑制试验，人员倍比稀释至关重要，直接影响结果，稀释的均匀和不均匀，效价会有所不同，配制抗原的比例也就不同，结果就会出现偏差。

二、检测样品因素

动物检测样品有血清、抗凝血、组织、排泄物、分泌物等。要求血清无溶血、无胶冻以及新鲜，否则影响抗体检测结果。采样方法、采样部位、采样数量、采样时间和样品保存质量直接决定检测结果的准确性和结论的科学性。采集的样品要无菌且避免交叉感染，采集的样品必须有代表性，采取的脏器组织应为病变明显部位。

例如检测免疫动物抗体水平时，多采用静脉采血，要在免疫14天或21天以后采血；检测禽流感、新城疫病原时，多采集咽喉、泄殖腔棉拭子或者采集新鲜粪便，要保存在浓度10%甘油的PBS溶液中；检测非洲猪瘟病毒实时荧光PCR试验时，采集的全血需放在抗凝管中，摇匀避免凝固，如要采集组织器官，则要采集脾脏等病变明显部位；检测一些寄生虫疫病时，需采集肠道或者粪便，均需冷藏保存，及时送检。

三、检测试剂因素

检测样品所用的试剂盒，因生产厂家、批次等不同，试剂的稳定性、敏感性、特异性等会有所不同，并且同一厂家的不同品种或者同一厂家的不同批次质量也会有所不同，所以检测结果也会有所不同。实验室要求做好标准试剂验收记录，从试剂的效价评定、生产厂家、运输条件、包装等方面进行验收，验收合格后方可入库使用。这就需要检测人员提高鉴别分析能力，选择一些规范化、口碑好的试剂。

四、仪器设备的因素

不同试验所用的仪器设备不相同，仪器设备因功能、生产厂家、型号、技术参数等不同，检测性能和误差都会有差别。例如移液器有不同的量程，要根据试验的要求选择量程范围，否则不仅会损坏移液器，还会产生较大的误差。冰箱分超低温、低温、冷藏；离心机有高速、低速、常温、低温。要根据试验要求选择合适的仪器，否则会破坏样品和试剂，导致试验结果有较大差别。

一些精密仪器需要的生产厂家比较严格，有的需要进口品牌，例如移液器一般选择德国、芬兰等进口的，用起来轻便、顺滑且精准度比较高。

五、检测方法的因素

不同的试验检测方法和操作规范不相同。常用的检测方法有血凝和血凝抑制试验、液相阻断ELISA试验、荧光RT-PCR试验、琼脂扩散试验和病毒中和试验等。不同的检测项目所用的检测方式不同，而检测用的标准和操作规程也不同，即使是相同的检测项目，使用的检测手段也有差异，所以检测的结果和准确性也存在差异。例如检测禽流感免疫效果，要选择血凝抑制试验，因为检测的是禽流感抗体水平；检测是否感染禽流感病毒，要选择禽流感病毒荧光RT-PCR，检测的是病原。检测口蹄疫免疫效果要选择口蹄疫抗体液相阻断ELISA试验，而口蹄疫非结构蛋白3ABC单抗阻断ELISA抗体试验检测的是存不存在感染抗体，最终确诊是否感染口蹄疫病毒要用荧光RT-PCR试验。所以要选择正确的检测方法，以免影响结果。

六、环境因素

环境因素主要指试验过程中温度、湿度和试验环境的清洁度等。例如血凝和血凝抑制试验、液相阻断ELISA试验等都要求室温，温度过高或过低都会影响试验的反应速度甚至严重时会影响试验结果。如果试验环境被污染，就易出现一些假阳性或假阴性，所以在试验中要减少污染的可能性，同时防治气溶胶的产生，试验完毕及时通风、消毒。

综上所述，影响动物疫病实验室结果准确性的因素比较多，需实验人员认真阅读每种试剂盒的说明书，对试验中出现的问题认真分析，找出预防措施，加强培训学习，不断提升自身的专业技能水平，以促进畜牧业的健康发展。