细胞块石蜡包埋切片与细胞涂片在良恶性胸腹腔积液鉴别中的临床效果对比

王小莉

[摘要] 目的 探討细胞块石蜡包埋切片和细胞涂片在良、恶性胸腹腔积液鉴别诊断中的应用价值，探寻提升肿瘤诊断水平的制片方式。 方法 选取2018年5月～2020年5月在我院就诊的胸腹腔积液患者110例为研究对象，采集其胸腹腔积液标本，制备石蜡包埋切片及细胞涂片，采取双盲法阅片，比较两种诊断方式在恶性胸腹腔积液诊断中的阳性率。 结果 病理学诊断结果提示，70例胸腔积液的标本中，恶性胸腔积液39例，良性胸腔积液31例;40例腹腔积液标本中，恶性腹腔积液27例，良性腹腔积液13例。细胞块石蜡包埋切片在恶性胸腔积液诊断中的阳性率为79.49%，明显高于细胞涂片的58.97%，差异有统计学意义（P<0.05）;细胞块石蜡包埋切片在恶性腹腔积液诊断中的阳性率为81.48%，明显高于细胞涂片的62.96%，差异有统计学意义（P<0.05）;细胞块石蜡包埋切片在恶性胸腹腔积液诊断中的准确度、灵敏度及特异度均高于细胞涂片，差异有统计学意义（P<0.05）;两种诊断方式的组织学分型中均以腺癌发生率最高，分别为81.13%、75.00%。 结论 细胞块石蜡包埋切片在良、恶性胸腹腔积液诊断中的应用价值高，与细胞涂片相比，具有更高的阳性率，且灵敏度、特异度和准确度均较高，是细胞学诊断和鉴别良、恶性胸腹腔积液较好的制片方式。

[关键词] 胸腹腔积液;良、恶性鉴别;细胞块石蜡包埋切片;细胞涂片

[中图分类号] R561          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）31-0134-04

[Abstract] Objective To investigate the application value of paraffin-embedded section of cell block and cell smear in the diagnosis and differentiation of benign and malignant pleural and peritoneal effusion and investigate the section making method to improve the diagnostic level of tumor. Methods A total of 110 patients with pleural and peritoneal effusion admitted to our hospital from May 2018 to May 2020 were selected as the research objects， and samples of pleural and peritoneal effusion and peritoneal effusion were collected， paraffin embedded sections and cell smears were prepared， which were read by double-blind method， and the positive rates of the two diagnostic methods in the diagnosis of malignant pleural and peritoneal effusion were compared. Results Pathological diagnosis showed that among 70 samples of pleural effusion， there were 39 cases of malignant pleural effusion and 31 cases of benign pleural effusion. Among 40 samples of peritoneal effusion， there were 27 cases of malignant peritoneal effusion and 13 cases of benign peritoneal effusion. The positive rate of paraffin section of cell block in the diagnosis of malignant pleural effusion was 79.49%， which was significantly higher than 58.97% of cell smear， and the difference was statistically significant（P<0.05）. The positive rate of paraffin section of cell block in the diagnosis of peritoneal effusion was 81.48%， which was significantly higher than 62.96% of cell smear， and the difference was statistically significant（P<0.05）. The accuracy， sensitivity and specificity of paraffin section in the diagnoses of malignant pleural and peritoneal effusion were higher than those of cell smear， and the differences were statistically significant（P<0.05）. The incidence of adenocarcinoma was the highest in the histological classification of the two diagnostic methods， which were 81.13% and 75.00%， respectively. Conclusion The paraffin embedded section of cell block has high application value in the diagnosis of benign and malignant pleural and peritoneal effusion. Compared with cell smear， it has higher positive rate， and high sensitivity， specificity and accuracy. Meanwhile， it is a better section making method for cytological diagnosis and differentiation of benign and malignant pleural and peritoneal effusion.

[Key words] Pleural and peritoneal effusion; Differentiation of benign and malignant; Paraffin section of cell block; Cell smear

人體正常状态下，腹腔内通常有少量液体（<200 mL），对肠道起润滑作用，一旦人体出现病理改变，导致腹腔内液体量增加至200 mL以上，就称之为腹腔积液;同理，在病理状态下，如人体胸膜腔内液体超过正常范围，就称之为胸腔积液[1]。胸腹腔积液是临床常见的症状、体征，多种疾病均可产生胸腹腔积液。在临床实践中，一些肿瘤和炎症都可导致胸腹腔积液，胸腹腔积液也可能是恶性肿瘤的警报，对胸腹腔积液的良、恶性鉴别对早期发现恶性肿瘤具有重要意义[2]。细胞学诊断是临床鉴别良、恶性胸腹腔积液的常用方式，细胞学制片技术对细胞学诊断的阳性检出率有重要影响，本研究以我院收治的胸腹腔积液患者为研究对象，对其积液标本分别采取细胞块石蜡包埋切片与细胞涂片法进行制片，观察两种制片方式在良、恶性胸腔积液诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2018年5月～2020年5月在我院就诊的胸腹腔积液患者110例为研究对象，其中男58例，女52例;年龄38～76岁，平均（58.32±7.98）岁;胸腔积液70例，腹腔积液40例。纳入标准：①对本研究知情同意。②具有独立清醒意识，治疗依从性强，能配合研究。③临床资料完整。排除标准：①合并血液系统及内分泌系统疾病。②合并语言功能或认知功能障碍。③合并全身感染性疾病。④合并心脑血管疾病及重要脏器严重器质性损害。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2方法

患者行B超检查，确定积液位置，在超声引导下根据积液位置进行穿刺获取检测标本，采集完成后立即送检。细胞涂片的制备：首先进行标本预处理，将送检标本在室温环境下静置150 min，废弃上层液体，剩余约100 mL标本，震荡试管将底部沉淀物混合后，分别倒入2个50 mL离心管中，离心机转数为2500 r/min，离心3～5 min，弃去上清液后保留离心管中的沉淀物。将其中1管沉淀物中间细胞进行涂片，使用95%乙醇固定细胞以保持细胞形态，防止其溶解和腐败，同时方便后续染色，固定时间15 min以上[3-4]。细胞涂片固定后进行巴氏染色，具体方法：①水化：将固定好的涂片置于蒸馏水中进行水洗，使细胞充分水化，方便着色，共水洗两次，2 min/次。②核染：将涂片放置在苏木精液中，观察到涂片上细胞成分出现明显着色后，采用流动水对涂片进行1 min持续冲洗，涂片核染过程通常需要3～5 min。③分色：将涂片放置在盐酸酒精中1～5 s，然后以流水冲洗涂片，以去除核染残留的染液，方便后续操作。④蓝化：将涂片浸泡在铬酸锂溶液中，直至涂片反蓝后取出。⑤脱水：首先用70%乙醇浸泡涂片，持续3 min，取出后置入95%乙醇中继续浸泡3 min。⑥浆染：涂片放置于早橘黄G6中，持续10 s，采用95%乙醇快速冲洗涂片3次，将多余染液去除，然后再置入AE50中1～2 min，取出涂片，再放置于95%乙醇中，连续放置2次，每次持续1～2 min。⑦脱水：将涂片浸泡于无水乙醇中2 min进行脱水，连续浸泡2次。⑧透明：将涂片在二甲苯中浸泡2 min，连续浸泡2次。⑨封片：使用中性树脂对细胞涂片进行封固[5-8]。

细胞块石蜡包埋切片制备：①首先对标本进行预处理，预处理法同细胞涂片，对于血性胸腹水，应当离心弃去上清液后，采用50%乙醇进行再处理后使用。②取材：取其中一管沉淀物进行震荡，使其与离心管分离，采用无菌吸管吸取沉淀物，使用两层擦镜纸对沉淀物进行包裹后，置入脱水盒。③固定：将标本放置在10%福尔马林中进行浸泡，持续3～4 h，以保持细胞结构正常、硬度适当。④脱水：采用梯度酒精脱水法，将细胞块依次置入浓度为50%、70%、80%、90%的酒精中进行逐级脱水，各2 h，然后分2次置入100%酒精中脱水，每次1.5 h，使细胞中的水分完全去除，利于透明剂浸入。⑤透明：将细胞块置入1∶1的100%酒精+二甲苯中20 min，取出后浸入二甲苯15 min，取出再次浸入二甲苯15 min。⑥浸蜡：首先将细胞块置入1∶1的二甲苯+石蜡混合溶液中浸泡30 min，然后放入纯石蜡中浸泡，共浸泡2次，2 h/次，此过程需在54～56℃条件下进行。⑦包埋与切片：完成浸蜡后将细胞块封存在小蜡块中，包埋之后的细胞块能够进行反复切片和长期保存[9]。⑧HE染色：将石蜡包埋切片放入二甲苯2次（20 min/次）、无水乙醇2次（5 min/次）、80%乙醇5 min、蒸馏水5 min进行脱蜡和水化，然后将水化的切片放入苏木精液5 min进行核染，取出后流水冲洗4 s、盐酸乙醇2 s，流水冲洗11～15 min，蒸馏水浸泡2 s;使用0.5%伊红液中进行浆染，使用蒸馏水快速冲洗2～3 s。浆染后的切片放入浓度为80%、95%的乙醇中进行脱水，完成后使用无水乙醇浸泡切片2次，5～15 min/次。脱水后使用二甲苯和中性树胶完成透明和封片[10-12]。

制片完成后，由两名细胞病理学医师在光学显微镜下进行同时阅片，取一致意见为诊断结果。

1.3观察指标及评价标准

以《浆膜腔积液细胞病理学》为诊断依据进行细胞病理诊断，采取3级分类法制作诊断报告：Ⅰ级：未发现恶性细胞，判定为良性胸腹腔积液;Ⅱ级：发现有可疑的恶性细胞，细胞具备部分恶性细胞的特征，但尚缺乏有诊断意义的细胞，疑似是恶性细胞，判定为良性胸腹腔积液;Ⅲ级：发现癌细胞，包括鳞状细胞癌、腺癌、大细胞未分化癌、小细胞未分化癌、腺鳞癌等类型，诊断为恶性胸腹腔积液。根据细胞形态、粘附性及不典型性进行评价，评价标准：阴性，细胞弥散分布、形态温和、无不典型性;阳性，细胞成团分布，形态及细胞核表现为重度不典型性[13]。灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%;特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%;准确度=（真阳性例数+真阴性例数）/总例数×100%。

1.4统计学分析

应用SPSS18.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示，采用t检验;计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理学诊断结果

病理学检查结果显示，70例胸腔积液标本中，惡性胸腔积液39例，良性胸腔积液31例;40例腹腔积液标本中，恶性腹腔积液27例，良性腹腔积液13例。

2.2两种诊断方式在恶性胸腔积液诊断中的阳性率比较

细胞块石蜡包埋切片在恶性胸腔积液诊断中的阳性率为79.49%（31/39），明显高于细胞涂片的58.97%（23/39），差异有统计学意义（χ2=7.920，P<0.05）。见表1。

2.3两种诊断方式在恶性腹腔积液诊断中的阳性率比较

细胞块石蜡包埋切片在腹腔积液诊断中的阳性率为81.48%（22/27），明显高于细胞涂片的62.96%（17/27），差异有统计学意义（χ2=10.069，P<0.05）。见表2。

2.4两种诊断方式在恶性胸腹腔积液中的诊断价值比较

细胞块石蜡包埋切片在恶性胸腹腔积液诊断中的准确度、灵敏度及特异度均高于细胞涂片，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.5两种诊断方式的细胞病理学诊断组织学分型比较

两种诊断方式的组织学分型中均以腺癌发生率为最高。见表4。

3讨论

胸腹腔积液是一种常见的临床表现，产生胸腹腔积液的原因众多，常见原因包括结核菌感染、肝脏疾病、腹膜疾病、营养障碍、缔结组织疾病、恶性肿瘤转移等疾病[14]。相关研究指出，恶性胸腹腔积液是肿瘤侵袭和转移的主要表现，胸腹腔积液中的细胞成分颇为复杂，良性积液中可见淋巴细胞、中性粒细胞、间皮细胞与嗜酸性细胞等，恶性积液中可见鳞癌细胞、腺癌细胞、恶性淋巴瘤细胞等，对胸腹腔积液的良、恶性进行鉴别是诊断肿瘤疾病的重要方式[15]。

恶性胸腹腔积液是肿瘤患者的重要临床体征，恶性胸腹积液产生的机制一般包括：①淋巴系统引流障碍：如果肿瘤细胞阻塞胸腹膜表面淋巴管，可破坏其正常循环，导致体液吸收障碍，积聚后成为胸腹腔积液[16]。②肿瘤细胞转移：当肿瘤细胞转移到胸腹膜时，可对毛细血管产生损害，导致血液或体液从血管中渗出，此种情况引起的积液通常为血性积液。③胸腹膜渗透性增加：肿瘤细胞侵袭胸腹膜后，可引起局部炎症反应，增高毛细血管渗透性，增加体液渗出。细胞病理学诊断在良、恶性胸腹腔积液中的诊断历史可以追溯到19世纪末，至今在胸腹腔积液细胞中发现肿瘤细胞的诊断方式已成为恶性积液诊断的金标准[17-19]。

细胞学诊断的高准确率有赖于细胞学制片质量，细胞涂片法是临床用于胸腹腔积液细胞检查诊断的经典制片方式，该方式操作简单，耗时少，且制作成本不高，因此在临床得到广泛开展，但由于该种制片方式受各种主客观因素的影响较大，容易出现误诊、漏诊[20]。石蜡包埋切片技术要点在于取材后将标本采取甲醛固定液进行固定，制成组织块后再进行包埋、切片与染色，细胞块石蜡包埋切片收集的细胞成分更多，且受胸腹水易凝块影响小，细胞成分集中，因此在较大程度上能够缩短阅片时间[21]。

本研究结果显示，细胞块石蜡包埋切片法在恶性胸腹腔积液诊断中的阳性率明显高于细胞涂片，且其诊断符合率、灵敏度及特异度均高于细胞涂片，此外，石蜡包埋切片法在显微镜下能够观察组织结构，例如腺细胞呈腺腔样排列，因此更加利于组织学的分型。

综上所述，细胞块石蜡包埋切片在鉴别良、恶性胸腹腔积液中的应用价值高，检出率高于细胞涂片，且更利于组织学分型，其作为细胞病理学诊断鉴别胸腹腔积液良、恶性较好的制片方式，值得推广应用。

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（收稿日期：2020-06-23）