4种蔷薇科木本植物花浸提液的抑菌效果比较

2020-01-01徐宁伟李方品吴学谦于秀敏刘玉艳高一梅

山东林业科技 2020年6期

徐宁伟,李方品,吴学谦,于秀敏,刘玉艳,高一梅

（1. 河北科技师范学院，河北秦皇岛066600；2. 河北农业大学，河北保定071001；3. 腾冲市住房和城乡建设局城市绿化管理所，云南腾冲679100；4. 杭州植物园，浙江杭州310013）

植物抑菌作用的研究目前主要集中在植物景观、食品保鲜、医疗保健等领域[1-3]，如蒲公英、风毛菊分别可以用于医疗美容及植物源杀菌剂的开发[4，5]。许多园林植物具有抑菌作用，其抑菌效果因植物种类及配置类型的不同而存在一定差异[6]。有关植物花浸提液的抑菌效果还鲜有报道，本试验选用河北科技师范学院校园内蔷薇科4 种木本植物为材料，比较其花的浸提液的抑菌效果, 旨在为绿化树种的合理配置提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试植物

供试植物为河北科技师范学院昌黎校区的4种蔷薇科木本植物[7]，它们是毛樱桃Cerasus tomentosa (Thunb.) Wall、粉花重瓣麦李Cerasus glandulosa (Thunb.) Lois. f. sinensis、贴梗海棠Chaenameles speciose (Sweet) Nakai、秋子梨Pyrus ussuriensis Maxim.(表1)。

1.1.2 供试菌种

供试菌种为河北科技师范学院农学与生物科技学院微生物实验室提供的大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）3 种具有代表性的空气微生物。

表1 供试植物及其花特征

1.1.3 仪器与试剂

GZX-9240MBE 型电热鼓风干燥箱、DNP-9082-1A 型电热恒温培养箱、PRX-450A 型智能人工气候箱、YXQ-SG41-280 型手提式压力蒸气灭菌器、SW -CJ-1B(U)型单人单面净化工作台、752 型分光光度计、培养皿、涂布棒、接种环等。培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，试剂有75%酒精、75%丙酮、蒸馏水等。

1.2 方法

1.2.1 菌种活化与菌悬液配制

将大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌分别接种在3 个牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，在恒温培养箱37℃温度下培养24 h[8]。用接种环分别挑取少量的3 种菌种分装于盛有无菌生理盐水的锥形瓶中，震荡均匀，并做好标记。将标准菌液培养至OD600=0.3，并稀释至105mL-1，即为供试菌悬液。

1.2.2 花的采集与浸提液制备

采集盛花期新鲜健康的花朵，去掉花柄，用蒸馏水冲洗2～3 次，晾干表面水分后剪碎，分别称量20 g 于研钵研磨后倒入3 个100 mL 锥形瓶中，再分别倒入50 mL 的75%丙酮、75%酒精、蒸馏水，浸提并做好标记，将制备的浸提液放在紫外灯下进行灭菌0.5 h[9]后备用。

1.2.3 抑菌试验

在经过紫外灯杀菌以及酒精擦拭过的超净工作台内进行，使用移液枪分别吸取0.1 mL 不同浸提液于培养基上，并用三角涂布棒均匀涂布，等待吸收后，再使用移液枪分别吸取0.1 mL 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的菌悬液并涂布，设置3 个平行，一组对照，做好标记。放入恒温培养箱，在37℃下培养24 h[8]。

1.2.4 数据记录

记录处理组及对照组菌落数量，如果菌落数量较少的，采用直接数取的方式；如果菌落密度大，则采用平板画线法计数，即将平板平均分为8 个区域，选择一个区域进行计数，最后总数乘以8 即可。通过记录各培养皿处理组与对照组菌落数量，将所有菌落数据进行分类汇总，用Excel 制成表格，计算抑菌率。

抑菌率/%=[(对照菌落数-处理菌落数)/对照菌落数]×100%[8]

2 结果与分析

2.1 供试植物对大肠杆菌的抑制作用

4 种蔷薇科木本植物花的不同浸提液对大肠杆菌生长的抑制作用见表2，除毛樱桃花75%酒精浸提液外，其余浸提液均对大肠杆菌的生长有抑制作用，75%丙酮、75%酒精和蒸馏水3 种花浸提液对大肠杆菌生长的抑制作用最好的是粉花重瓣麦李，抑菌率分别为87.02%、91.43%和83.06%；在每种植物3 种花浸提液对大肠杆菌生长的抑制效果，除毛樱桃为蒸馏水浸提液最好外，其余3 种均为蒸馏水浸提液效果最差；综合每种植物3 种浸提液抑菌效果，大小排序分别是粉花重瓣麦李＞秋子梨＞贴梗海棠>毛樱桃。

表2 4 种蔷薇科木本植物花的不同浸提液对大肠杆菌的抑制作用

2.2 供试植物对枯草芽孢杆菌的抑制作用

表3 显示了4 种蔷薇科木本植物花的不同浸提液对枯草芽孢杆菌的抑制作用，除粉花重瓣麦李花蒸馏水浸提液外，其余浸提液均对大肠杆菌的生长有抑制作用，75%丙酮、75%酒精和蒸馏水3 种花浸提液对枯草芽孢杆菌生长的抑制作用最好的是毛樱桃，抑菌率分别为92.21%、92.91%和89.06%；在每种植物3 种花浸提液对枯草芽孢杆菌生长的抑制效果，均为蒸馏水浸提液的效果最差；综合每种植物3 种浸提液对枯草芽孢杆菌的抑菌效果，大小排序分别是毛樱桃>贴梗海棠＞秋子梨>粉花重瓣麦李。

表3 4 种蔷薇科木本植物花的不同浸提液对枯草芽孢杆菌的抑制作用

2.3 供试植物对金黄色葡萄球菌的抑制作用

4 种蔷薇科木本植物花的不同浸提液对金黄色葡萄球菌的抑制作用见表4，总体显示抑菌效果很差，毛樱桃、粉花重瓣麦李、贴梗海棠花的蒸馏水浸提液以及粉花重瓣麦李花的75%丙酮浸提液对金黄色葡萄球菌均无抑制作用，比较而言，毛樱桃花75%酒精浸提液和贴梗海棠花75%丙酮浸提液对金黄色葡萄球菌的抑制作用较好，抑菌率分别为47.13%和32.70%，而秋子梨花的3 种浸提液虽然对金黄色葡萄球菌均有抑制作用，但抑菌率均低于20%。

3 结论

毛樱桃、粉花重瓣麦李、贴梗海棠、秋子梨4 种蔷薇科木本植物花的浸提液均对细菌有抑制作用，但同一种植物的不同浸提液以及同一种植物的同一浸提液对不同细菌的抑菌效应不同，不同植物的相同浸提液对同种细菌的抑菌效应也有所差异；不同植物不同浸提液的抑菌差异，是花的次生代谢产物成分差异、不同浸提方法浸提的次生代谢产物不同成分含量差异综合作用的结果。