改良血清胱抑素C试剂盒的性能评价

张海悦，王姝（通信作者），程慧敏，孙景春，魏滢

吉林省富生医疗器械有限公司 （吉林长春 130607）

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂 C ，即血清胱抑素C（Cystatin C，Cys C），是一种小分子蛋白质，大量的临床应用表明血清Cys C是预测肾小球滤过率下降的最敏感指标，是一种理想的反映肾功能损害的标志物[1-4]。目前，临床对Cys C的检测方法包括酶联免疫吸附测定法、化学发光法和免疫比浊法[5]；其中，酶联免疫吸附测定法和化学发光法由于操作烦琐、耗时长、费用高等不足，限制了其广泛应用；而随着全自动生化仪的普及和多种快速免疫比浊检测技术的发展，免疫比浊法因具有反应时间短、精密度高、检测范围宽，以及黄疸、溶血、脂血标本影响小和易于自动化等优点，已成为临床Cys C的主流检测方法，其中的免疫透射比浊法与免疫散射比浊法的检测精密度相当[6]。但是，由于免疫比浊法的检测原理缺乏酶促放大反应，导致现有的Cys C免疫比浊检测试剂盒不可避免地出现精密度较低等不足[7-8]。我们对试剂盒原料进行了改良，添加β-环糊精等试剂，并采用包埋工艺以提高试剂盒的精密度、稳定性。本研究对改良血清Cys C试剂盒的性能进行评价，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

日立7600全自动生化分析仪；吉林省富生医疗器械有限公司自制的胱抑素试剂盒及校准品；质控液购买于英国朗道公司。

1.2 标本及检测

采集空腹静脉血5 ml，于分离胶试管中离心分离血清，采用免疫比浊法测定血清Cys C含量。

1.3 方法

1.3.1 精密度

（1）重复性：检测浓度（1.00±0.10 ）mg/L的控制血清，重复测定10次，计算变异系数。（2）批间差：分别用3个不同批号的试剂盒检测浓度（1.00±0.10 ）mg/L的控制血清，每个批号检测3次，计算批间差。

1.3.2 准确度

选择外观正常的高、中、低值Cys C血清各1份作为基础血清（0.72 mg/L、1.48 mg/L、3.73 mg/L），分别加入不同浓度的校准品（4 mg/L、8 mg/L、12 mg/L），样品制备如下。（1）基础样品：血清0.9 ml+蒸馏水0.1 ml。（2）分析样品：血清 0.9 ml +Cys C 校准品 0.1 ml。

回收浓度=分析样品测得浓度-基础样品测得浓度。回收率（%）=回收浓度/加入浓度×100%。

1.3.3 最低检测限

采用10 g/L牛血清白蛋白+0.9%氯化钠注射液作为空白样本，空白样本应不含被测物；在生化分析仪上连续重复检测20次，记录检测结果。

1.3.4 稳定性

取Cys C检测试剂盒进行稳定性试验，37 ℃下分别放置3、7、15、30 d后进行检测；开封稳定性试验分别按2～8 ℃下放置3、7、15、30、45、60 d 后进行测定；与2～8 ℃储存试剂同时测定2份（低值、高值）血清。

1.3.5 抗干扰性

选择正常与异常浓度的 Cys C（0.62～4.07 mg/L）3个浓度9个血清样本，分别加入含干扰物质（胆红素、血红蛋白、甘油三酯）的血清溶液（血清:干扰物质=9:1），使试样本中胆红素浓度分别为40 、80、160、320 μmol/L，血红蛋白浓度分别为2、4、8、10 g/L，甘油三酯浓度分别为4、6、8、10 mmol/L，每个样本重复检测3次，结果取平均值[9]。

2 结果

2.1 精密度

2.1.1 重复性

重复测定10次控制血清样本，变异系数为1.40%，见表1。

表1 重复性试验结果

2.1.2 批间差

3个不同批号的试剂盒检测浓度（1.00±0.10 ）mg/L的控制血清，批间差为2.94%，见表2。

表2 批间差试验结果

2.2 准确度

不同浓度Cys C的回收范围为96.25%～104.50%，平均回收率为101.27%，见表3。

2.3 最低检测限

最低检测限为0.030 mg/L，见表4。

表4 最低检测限试验结果

2.4 稳定性

Cys C检测试剂盒于37 ℃、避光环境中贮存30 d，开封后于2～8 ℃、避光环境中贮存60 d的偏差的绝对值均＜5%，见表5～6。

表5 高温稳定性试验结果

表6 开封稳定性试验结果

2.5 抗干扰性

胆红素≤320 μmol/L、血红蛋白≤10 g/L、甘油三酯≤10 mmol/L时对Cys C检测试剂盒检测结果的干扰均＜5%，见表7。

表7 抗干扰性试验结果（%）

3 讨论

Cys C是新近发展起来的一个评价肾功能早期损害的灵敏指标，其可在体内以恒定速度产生，不受年龄、性别、体重、炎症状态等因素影响[10]。由于血清中Cys C浓度较低，故其测定方法需具有较高的灵敏度及特异度。免疫比浊法虽然检测灵敏度较差，但仍可达150 μg/L左右，远远低于健康人血清Cys C浓度的下限值，可满足临床需要。本研究中的改良试剂盒最低检测限更是可达到0.030 mg/L（即30 μg/L）；同时干扰试验证明，本试剂盒基本上不受血红蛋白、胆红素、甘油三酯的影响，具有较好的抗干扰性；回收率可达96.25%～104.50%，批间变异系数均较小（＜2.94%），说明改良试剂盒具有较高的精密度、准确度和抗干扰性。

目前，市场上出现的Cys C检测试纸及试剂盒，因其会受到温度、光照等外界因素的影响，导致结果偏差较大，所以市场前景不好；而本研究中的试剂盒经过改良具有较好的高温稳定性和开封稳定性[11-12]。这些结果均表明改良Cys C试剂盒性能稳定性能好、干扰少、准确度和精密度高、操作简便快速，可以用于临床常规血清Cys C的检测，并且在诊断肾功能早期损害和评价肾移植患者肾功能等领域中有广阔应用前景。