藏药宽筋藤化学成分的研究

2019-12-26杨光忠李庆庆徐晓诗符元泽

中南民族大学学报(自然科学版) 2019年4期

杨光忠，李庆庆，徐晓诗，符元泽

(中南民族大学药学院，武汉 430074)

宽筋藤为防己科植物中华青牛胆Tinosporasinensis(Lour.) Merr.的藤茎，为传统藏药勒折，其性寒，味苦，归肝经，具有舒筋活络、清热利湿、祛风止痛的功效，临床常用于治疗风湿关节炎、虚热以及痛风病等[1].其主要分布于广西、广东、云南等地，尤以两广地区分布广，产量大，资源丰富，在民间沿用历史悠久，疗效显著[2].宽筋藤含萜类、黄酮类、生物碱类、苯丙素类等多种结构类型的化学成分[3,4].现代药理学研究表明，宽筋藤提取物具有抗氧化、抗辐射、抗炎、免疫抑制、抗利什曼、保肝等作用[2].为进一步研究藏药宽筋藤的化学成分、探究其药效的物质基础，本文利用溶剂提取法，正、反相硅胶柱色谱和半制备高效液相色谱法对其乙醇提取物进行分离纯化，并根据波谱数据鉴定化合物结构.从其乙醇提取物中分离得到10个化合物，包含6个酚类以及4个生物碱类化合物，其结构分别鉴定为对羟基苯甲醛 (1)、香草醛(2)、香草乙酮(3)、异莨菪亭(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、伪巴马汀(7)、trans-N-coumaroyltyramine(8)、trans-N-feruloyltyramine(9)、trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine (10).化合物3、4和10为首次从宽筋藤中分离得到.

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

核磁共振波谱仪(AVANCE IIITM 600 MHz，德国布鲁克)；高效液相色谱仪(Ultimate 3000半制备型，美国戴安，DAD检测器)；半制备型色谱柱(YMC-Pack ODS-A，250 mm×10.0 mm,5 μm)；三用紫外分析仪(ZF-I型，上海顾村电光仪器厂)；旋转蒸发仪(RE2000A，上海亚荣生化仪器厂)；循环水式真空泵(SHB-III，郑州长城仪器)；正相硅胶(200～300目，青岛海洋化工)；反相硅胶(50 μm ,YMC·GEL ODS-A-HG,AAG12S50)；硅胶板GF 254(青岛海洋化工)；分析纯溶剂(国药集团化学试剂)；色谱纯溶剂(昌泰兴业).

宽筋藤购买于青海西宁，由中南民族大学药学院刘新桥副教授鉴定为防己科植物中华青牛胆Tinosporasinensis(Lour.) Merr.的藤茎.

1.2 提取与分离

9.4 kg干燥宽筋藤粉碎，70%乙醇室温浸提3次，每次24 h，提取液真空抽滤后减压浓缩得乙醇提取物(1.0 kg).乙醇提取物经聚酰胺柱层析，依次用纯水、30%、50%、70%、100%乙醇梯度洗脱，合并相同组分得5个流份(Fr.1～Fr.5).Fr.2(41.3 g) 经反相硅胶柱色谱分离，依次用20%、40%、60%、80%、100%甲醇梯度洗脱，TLC检测合并得15个组分(Fr.2.1～Fr.2.15).Fr.2.11(4.1 g)经正相硅胶柱(200～300目)分离，以二氯甲烷-甲醇(19∶1、9∶1、1∶1)为洗脱剂，TLC检测合并得9个组分(Fr.2.11.1～Fr.2.11.9).Fr.2.11.1经HPLC[流动相，V(甲醇)∶V(水)=37∶63，流速3 mL/min]制备得到化合物1(5 mg,tR=12.13 min)、2(5 mg，tR=13.28 min)、3(5 mg，tR=16.05 min)、4(2.7 mg，tR=15.22 min).Fr.2.11.2经HPLC[流动相，V(甲醇)∶V(水)=28.5∶71.5，流速3 mL/min]制备得到化合物5(20.6 mg，tR=18.31 min)、6(12.7 mg，tR=20.43 min).Fr.2.11.6经HPLC[流动相，V(乙腈):V(1‰甲酸-水)=25∶75，流速3 mL/min]制备得到化合物7(4 mg，tR=13.00 min).Fr.3(48 g) 经正相硅胶柱(200～300目)分离，用石油醚-乙酸乙酯(体积比依次为95∶5，9∶1，8∶2，7∶3，1∶1，3∶7，2∶8，0∶1) 梯度洗脱，TLC检测合并得7个流份(Fr.3.1～Fr.3.7).Fr.3.6(4.1 g)经反相硅胶柱层析分离，30%、50%、70%、80%、100%甲醇依次洗脱，TLC检测合并得15个组分(Fr.3.6.1～Fr.3.6.15).Fr.3.6.5(100 mg) 经HPLC[流动相，V(甲醇)∶V(水)=37∶63，流速3 mL/min]制备得到化合物8(2 mg,tR=36.74 min)、9(29 mg,tR=43.25 min)、10(4.1 mg,tR=46.61 min).化合物1～10的结构式见图1.

图1 化合物1～10的化学结构式Fig.1 Chemical structures of compound 1—10

2 结果

化合物1:白色粉末，分子式为C7H6O2.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.77(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,H-6),6.90(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,H-5),9.76(1H,s,-CHO);13C NMR(150 MHz，CD3OD)δC193.0(-CHO),130.3(C-1),133.6(C-2,C-6),117.1(C-3,C-5),165.6(C-4).上述数据与文献[5]报道的对羟基苯甲醛基本一致，故鉴定化合物1为对羟基苯甲醛.

化合物2:白色针状结晶，分子式为C8H8O3.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.43(1H, s,H-2),6.93(1H,d,J=7.8 Hz,H-5),7.44(1H,d,J=7.8 Hz,H-6),9.73(1H,s,-CHO),3.92(3H,s,3-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC193.0(-CHO),130.5(C-1),111.3(C-2),150.0(C-3),155.4(C-4),116.5(C-5),128.3(C-6),56.5(3-OCH3).上述数据与文献[5]对照基本一致，故鉴定化合物2为香草醛.

化合物4：无色针晶，分子式为C10H8O4.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH6.20(1H,d,J= 9.6 Hz,H-3),7.86(1H,d,J= 9.6 Hz,H-4),7.11(1H,s,H-5),6.76(1H,s,H-8),3.91(3H,s,7-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC164.3(C-2),109.9(C-3),146.4(C-4),113.3(C-5),147.4(C-6),153.6(C-7),104.1(C-8),151.7(C-8a),112.5(C-4a),56.9(7-OCH3).上述数据与文献[7]对照基本一致，故鉴定化合物4为异莨菪亭.

化合物5：白色针晶，分子式为C8H8O4.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.53(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.85(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.57(1H,dd,J=1.8,8.4 Hz,H-6),3.88(3H,s,3-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC123.3(C-1),115.9(C-2),148.7(C-3),152.7(C-4),113.8(C-5),125.4(C-6),170.3(-COOH),56.5(3-OCH3).上述数据与文献[8]对照基本一致，故鉴定化合物5为香草酸.

化合物6：白色粉末，分子式为C9H10O5.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.33(2H，s,H-2,H-6),3.88(6H,s,3,5-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC122.5(C-1),108.3(C-2,C-6),148.9(C-3,C-5),141.6(C-4),170.5(-COOH),56.9(3,5-OCH3).以上数据与文献[9]报道基本一致，故确定化合物6为丁香酸.

化合物7：黄色粉末，分子式为C21H22NO4+.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.62(1H,s，H-1),7.05(1H,s,H-4),3.27(2H,br s,H2-5),4.81(2H,br s,H2-6),9.35(1H,s,H-8),7.64(1H,s,H-9),7.60(1H,s,H-12),8.65(1H,s,H-13),3.99(3H,s,2-OCH3),3.94(3H,s,3-OCH3),4.13(3H,s,10-OCH3),4.06(3H,s,11-OCH3);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC120.6(C-1a),110.0(C-1),150.9(C-2),153.9(C-3),112.3(C-4),130.2(C-4a),28.0(C-5),56.5(C-6),146.3(C-8),124.2(C-8a),107.3(C-9),154.7(C-10),160.1(C-11),106.4(C-12),139.1(C-12a),119.4(C-13),140.7(C-13a),57.0(2-OCH3),56.8(3-OCH3),57.1(10-OCH3),57.5(11-OCH3).上述数据与文献[10]伪巴马汀数据对照基本一致，故鉴定化合物7为伪巴马汀.

化合物8：白色固体，分子式为C17H17NO3.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.40(2H,d,J=8.4 Hz,H-2,H-6),6.78(2H,d,J=8.4 Hz,H-3,H-5),7.44(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),6.38(1H,d,J= 15.6 Hz,H-8),7.05(2H,d,J=7.8 Hz,H-2′,H-6′),6.71(2H,d,J=7.8 Hz,H-3′,H-5′),2.75(2H,t,J=7.2 Hz,H2-7′),3.46(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz, CD3OD)δC127.8(C-1),130.7(C-2,C-6),160.7(C-4),116.4(C-3,C-5),142.7(C-7),118.5(C-8),169.4(C-9),131.4(C-1′),130.9(C-2′,C-6′),116.9(C-3′,C-5′),157.7(C-4′),36.0(C-7′),42.7(C-8′).以上数据与文献[11]报道基本一致，故确定化合物8为trans-N-coumaroyltyramine.

化合物9：白色固体，分子式为C18H19NO4.1H NMR(600 MHz，CD3OD)δH7.10(1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.79(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.01(1H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6),7.44(1H,d,J=16.2Hz,H-7),6.41(1H,d,J=16.2 Hz,H-8),3.86(3H,s,3-OCH3),7.05(2H,d,J=8.4 Hz,H-2′,H-6′),6.72(2H,d,J=8.4 Hz,H-3′,H-5′),2.75(2H,t,J=7.2 Hz,H2-7′),3.46(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC128.3(C-1),111.6(C-2),150.0(C-3),149.4(C-4),116.6(C-5),123.4(C-6),142.2(C-7),118.8(C-8),169.3(C-9),56.4(3-OCH3),131.4(C-1′),130.9(C-2′,C-6′),116.4(C-3′,C-5′),157.0(C-4′),35.9(C-7′),42.7(C-8′).以上数据与文献[11]报道基本一致，故确定化合物9为trans-N-feruloyltyramine.

化合物10：白色粉末，分子式为C19H21NO5.1H NMR(600 MHz,CD3OD)δH7.12(1H,d,J=1.2 Hz,H-2),6.79(1H,d,J=8.4 Hz,H-5),7.02(1H,dd,J=8.4,1.2 Hz,H-6),7.45(1H,d,J=15.6 Hz,H-7),6.41(1H,d,J=15.6 Hz,H-8),3.88(3H,s,3-OCH3),3.83(3H,s,3′-OCH3),6.82(1H,d,J=1.2 Hz,H-2′),6.72(1H,d,J=7.8 Hz,H-5′),6.67(1H,dd,J=7.8,1.2 Hz,H-6′),2.77(2H,t,J=7.2 Hz,Hz-7′),3.48(2H,t,J=7.2 Hz,H2-8′);13C NMR(150 MHz,CD3OD)δC128.4(C-1),111.6(C-2),150.0(C-3),149.4(C-4),116.6(C-5),123.4(C-6),142.2(C-7),118.8(C-8),169.3(C-9),56.5(3-OCH3),56.4(3′-OCH3),132.2(C-1′),113.5(C-2′),149.1(C-3′),146.2(C-4′),116.3(C-5′),122.4(C-6′),36.4(C-7′),42.7(C-8′).以上数据与文献[12,13]报道基本一致，故确定化合物10为trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine.

3 结语

通过对宽筋藤乙醇提取物的系统分离，得到10个化合物，包含6个酚类化合物以及4个生物碱类化合物，其结构分别鉴定为对羟基苯甲醛(1)、香草醛(2)、香草乙酮(3)、异莨菪亭(4)、香草酸(5)、丁香酸(6)、伪巴马汀(7)、trans-N-coumaroyltyramine(8)、trans-N-feruloyltyramine(9)、trans-N-feruloyl-3′-O-methyldopamine(10).其中化合物3、4和10为首次从宽筋藤中分离得到，为宽筋藤质量标准的制定和开发提供了一定的依据.