市售农药残留快速检测酶试剂盒对有机磷和氨基甲酸酯类农药灵敏度的测定

摘要：了解农药残留快速检测酶试剂盒对不同农药的灵敏度。通过4种市售酶试剂盒对克百威等5种农药分别进行5个浓度的测定，来比较试剂盒的优劣。4种酶试剂盒不是对所有的有机磷农药和氨基甲酸酯类农药都敏感;4种试剂盒优劣为：试剂盒A>试剂盒C>试剂盒B>试剂盒D。在日常检测中需要对所购买的快检产品进行一定的实验验证，选取适合的产品。在条件允许的情况下对于抑制率超过50%的样品不仅需要复测，还需要采用色谱、质谱定性、定量等方法进行检测。

关键词：酶试剂盒;有机磷;氨基甲酸酯类农药;灵敏度

中图分类号：S-3

文献标识码：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191215006

引言

在食品安全问题越来越受到关注的今天，水果蔬菜中的农药残留超标问题日益突出，严重危害人体健康，因此准确又快速筛查出果蔬中的农药残留是否超标具有重大意义[1，2]。当前农药残留检测的主要方法为酶抑制率法和色谱法等[3]。酶抑制率法由于成本低、操作简便、时间短等优点被广泛应用于流通市场及蔬菜基地的快速筛查中，在果蔬的农药残留的监管中，成为一种重要的监管手段[4-6]。市面上出现了多种农药残留快速检测酶试剂盒，质量参差不齐，且在进行农药残留检测时，仅能检测大部分有机磷和氨基甲酸脂类农药，而且对不同的农药品种灵敏度是不一样的[7]。作为农药残留酶试剂的生产厂家，为了更好地改进、研发酶试剂以及为使用者在选购产品时提供一定的参考借鉴，采购了2种市售其他家的酶试剂和自身生产的2种不同状态的酶对5种农药的灵敏度进行了测试，以KJ201710国家食药监总局2017年第113号公告附件中的方法为依据来进行评价。

1材料与方法

1.1实验仪器

GNSPRD-16型16通道农残速测仪（厦门绿安分析仪器有限公司）;HH-2型恒温水浴锅（金坛区白塔金昌实验仪器厂）;JJ-200电子天平（河南双杰计量仪器有限公司）;5mL移液枪（宁波托普森科学仪器有限公司）;100μL移液枪（美国Thermo公司）。

1.2试剂

酶试剂盒A（郑州华洲，显色剂、底物、缓冲剂为粉末状，酶为液态）;酶试剂盒B（郑州华洲，酶、显色剂、底物、缓冲剂均为粉末状）;酶试剂盒C（外采品牌，显色剂、底物、缓冲剂为粉末状，酶为液态）;酶试剂盒D（外采品牌，显色剂、底物、缓冲剂为粉末状，酶为液态）。在实验前按照说明书要求将试剂盒里的缓冲剂、酶试剂（粉末状需要配制，液态状直接使用）、显色剂、底物进行配制：缓冲剂用500mL的蒸馏水溶解配制，粉末状酶试剂和显色剂分别用10mL的缓冲液溶解混匀，底物用10mL的纯净水进行溶解配制。

克百威、敌百虫、丙溴磷、敌敌畏、灭多威5种农药标准品（1000μg/mL，农业环境保护科研检测所），使用时按照需要梯度稀释成1μg/mL标准中间液。

1.3实验设计

本实验参照KJ201710蔬菜中敌百虫、丙溴磷、灭多威、克百威、敌敌畏残留的快速检测中第1种方法酶抑制率法，根據方法中给出的检测限：敌百虫0.1mg/kg，丙溴磷0.5mg/kg，灭多威0.2mg/kg，克百威0.02mg/kg，敌敌畏0.2mg/kg为依据，不同的农药按照检出限不同设置5个浓度梯度，每1个浓度梯度设置3次重复。

1.4对照液的测试

分别移取3mL缓冲溶液于10mL 带盖的玻璃瓶中，再加入0.1mL的酶液、0.1mL的显色剂，摇匀后于37℃水浴锅中放置15min，再加入0.1mL底物摇匀，立即放入仪器的比色池中，用农残仪测定3min内的吸光度变化值即为ΔA0。

1.5样品处理方法

向1.3中制备的5个浓度的农药中分别加入10mL缓冲液，混匀后备用。分别移取3mL的样品提取液于10mL 带盖的玻璃瓶中，依次往提取液中加入0.1mL的酶液、0.1mL的显色剂，摇匀后于37℃水浴锅中放置15min，再加入0.1mL底物摇匀，立即放入仪器的比色池中，用农残仪测定3min内的吸光度变化值，通过仪器读出其抑制率。

1.6实验数据的处理

根据每一个处理的3次测定值计算出平均值，根据平均值列出抑制率、农药浓度的数据表（见表1），根据数据比较4种不同酶试剂盒对5种农药的灵敏度。

4种酶试剂盒在KJ201710中5种农药检出限浓度的抑制率与农药浓度的对应关系（见表2），根据数据可以看出更接近或优于标准方法的酶试剂盒。

2结果分析

从表1中可以看出，对于克百威来说，试剂盒A和试剂盒C均在推荐的检出限浓度可以测出阳性，试剂盒A在克百威浓度为0.005mg/L时抑制率即为60.8%，而试剂盒C在克百威浓度为0.02mg/L时抑制率为59.1%，试剂盒B在克百威浓度为0.04mg/L时抑制率为57.1%。说明对于克百威来说，试剂盒C是最佳的选择。

对敌百虫来说，浓度为0.01mg/L时，试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D的抑制率分别为77.8%、80.1%、70.6%，试剂盒A在敌百虫浓度为0.03mg/L抑制率为59.9%，而此时另外3种试剂盒抑制率均超过90%，说明这4种试剂盒对敌百虫都比较敏感，尤其是试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D，同时也反应出对于试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D应该稀释更低的浓度去进行实验。

对丙溴磷来说，浓度为0.05mg/L时，试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D的抑制率分别为60.8%、60.0%、66.2%，而试剂盒A在丙溴磷浓度为0.5mg/L时抑制率为69.2%，说明对于丙溴磷来说，试剂盒A是最佳选择，其他3种试剂盒普遍存在对丙溴磷较敏感。

对敌敌畏来说，浓度为0.03mg/L时，试剂盒B、试剂盒C、试剂盒D的抑制率均超过90%，试剂盒A在敌敌畏浓度为0.06mg/L时抑制率为53.9%，在敌敌畏浓度为0.2mg/L时抑制率为72.7%，其它3种试剂盒的抑制率均达到100%，说明4种试剂盒均对敌敌畏比较敏感，而试剂盒A在敌敌畏浓度增加过程种，抑制率增幅不大，比较稳定。

对灭多威来说，4种试剂盒的抑制率趋势不一样，试剂盒D在实验的5个浓度中始终没有达到50%以上，试剂盒C在灭多威浓度为0.2mg/L，抑制率达到50%以上，而试剂盒A、B在浓度为0.1mg/L时，抑制率即达到50%以上，但是在浓度为0.2mg/L抑制率增加的并不多。

表2主要是对表1进行简化，能够更直观的反应出4种试剂盒的优劣，在方法推荐的检出限下，试剂盒A整体要优于另外3种试剂盒，尤其是对敌百虫、丙溴磷、敌敌畏来说。

3结论

在方法推荐的检出限下，4种试剂盒优劣为：试剂盒A>试剂盒C>试剂盒B>试剂盒D，从表1和表2中也可得知，如果蔬菜中残留了一定量的敌百虫、丙溴磷、敌敌畏，因为试剂盒B、C、D均对低浓度的这3种农药敏感，就很容易导致假阳性的出现;而如果蔬菜中残留了一定量的克百威、灭多威，因为試剂盒D对这2种农药不灵敏反而容易导致假阴性的出现。根据国标和行业标准的规定[8]，样品的抑制率达到50%则判定样品农药残留超标，因为国家限量标准对每一种农药的限量不同，每种试剂盒对每一种农药的敏感度也不一样，因此在日常检测中需要对所购买的快检产品进行一定的实验验证，选取适合的产品。在条件允许的情况下对于抑制率超过50%的样品不仅需要复测，还需要采用色谱、质谱定性、定量等方法进行检测。

参考文献

[1] 蒋雪松，王维琴，许林云，等.农产品/食品中农药残留快速检测方法研究进展[J].农业工程学报，2016（20）：267-274.

[2]胡明燕，车明秀，张艳，等.快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留方法的优化[J].湖北农业科学，2018，57（21）：112-114.

[3]陈冬兰，夏彤，王志波，等.几种常用蔬菜农药残留检测技术概述及比较[J].现代农业科技，2010（9）：172-175.

[4]王洁莲.酶抑制率法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留[J].山西农业科学，2011，39（2）：156-158.

[5]张宝华，魏巍.酶抑制率法检测蔬菜农药残留的效果研究[J].南方农业，2018，12（9）：105-106.

[6]刘顺宇，郭淑贞，林双娣，等.酶抑制法在农药残留快速检测中的应用分析[J].湖南农业科学，2017（7）：85-87，91.

[7]罗俊霞，李德瑜，袁小伟，等.酶抑制法测定多种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的试验[J].浙江农业科学，2015，56（6）：883-887.

[8]GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测[S].

作者简介：

张欣（1987-），女，硕士，检测部经理。研究方向：食用农产品快速检测。