普伐他汀钠片有关物质方法的优化

2019-12-20陆常辉张云云

中西医结合心血管病杂志(电子版) 2019年33期

陆常辉，张云云

（1.瀚晖制药有限公司，浙江杭州 310000；2.杭州和泽医药科技有限公司，浙江杭州 310000）

普伐他汀钠片为他汀类降脂药物，适用于饮食限制仍不能控制的原发性高胆固醇血症（Ⅱa型和Ⅱb型）[1]。有关物质是药品质量控制中重要的项目之一，为了严格控制药物的质量，对杂质必须能够有效分离，故对现行国家标准有关物质检查方法进行适当优化，从而保证有关物质检查结果的准确性。

1 用现行标准测定存在的问题

1.1 现行标准测定要求[2]

现行标准为《中国药典》2015年版药品标准，按该方法测定普伐他汀钠片有关物质，结果如下。

色谱条件：

仪器：戴安U3000，HPLC，赛诺飞。

色谱柱：Zorbax SB-C18 4.6 mm×75 mm 3.5 μm；波长：238 nm；流速：1 ml/min。

溶剂：甲醇-水（50:50）

供试品溶液：精密称定，加溶剂溶解并稀释成每1 ml中1 mg的溶液。

流动相A：水-磷酸缓冲液（取0.08 mol/L磷酸溶液，用三乙胺调节pH值至7.0）-乙腈(52:30:18) ；

流动相B：水-磷酸缓冲液（取0.08 mol/L磷酸溶液，用三乙胺调节pH值至7.0)-乙腈（10 : 30 : 60）。

梯度洗脱程序如表1所示。

表1 梯度洗脱程序

1.2 测定结果

以下为3批普伐他汀钠片（规格：20 mg）测定结果，见图1所示。通过色谱图结果可知，用此梯度洗脱方法，普伐他汀峰后的杂质峰（峰5）未能完全分离，无法对该杂质进行准确积分，定量。

图1 有关物质图谱（中国药典方法）

2 测定方法优化

本次方法优化的目的为使主成分（普伐他汀峰）与其后杂质峰达到完全分离，首先在原色谱方法条件下，进行了梯度优化，在减小有机相变化速率的过程中，两者分离度略有改善，但并不能达到完全分离。故对选择性改变更显著的色谱柱进行筛选。

2.1 色谱柱选择

选用不同品牌不同参数的色谱柱，分离度效果均不好，如选用色谱柱（Thermo Accucore C18 4.6 mm×100 mm 2.6 μm），主成分峰与后杂分离度未能改善；选用色谱柱（Thermo symcronis C18 4.6 mm×150 mm 3 μm），主成分峰与后杂分离度大于1.5，但主成分与前杂共出峰；选用色谱柱（Ultimate XB-C18 4.6 mm×250 mm 5 μm），主成分峰与后杂分离度未能达到分离度要求，但有所改善，故选用该色谱柱进行进一步梯度优化。

2.2 梯度优化

梯度方法1：

色谱柱：Ultimate XB-C18 4.6 mm×250 mm 5μm ；

其他参数不变，洗脱梯度如表2，相关色谱图见图2。

表2 梯度洗脱程序

梯度方法2：

色谱柱：Ultimate XB-C18 4.6 mm×250 mm 5 μm；

流动相A：水-磷酸缓冲液（取0.08mol/L磷酸溶液，用三乙胺调节pH值至7.0）-乙腈（50:30:20）；

流动相B：水-磷酸缓冲液（取0.08mol/L磷酸溶液，用三乙胺调节pH值至7.0)-乙腈（10:30:60）。

其他参数不变，洗脱梯度如表3，相关色谱图见图2：

表3 梯度洗脱程序

选择色谱柱（Ultimate XB-C18 4.6mm×250mm 5μm），在梯度2条件下主成分峰及其前后杂分离度均大于2，但主峰与后杂不能达到基线分离。在梯度3条件下，主成分峰及其前后杂分离度均大于2，且能达到基线分离。更换同品牌的不同批号的色谱柱考察，重现性良好。

图2 有关物质图谱（梯度方法1/2）

2.3 优化测定结果

（1）对已知杂质进行定位，见图3。

（2）选用多批样品，按优化色谱方法进行检测。图4为供试品图谱。

系统适用性溶液中，杂质I、杂质II和杂质III的分离度均大于2。供试品溶液中普伐他汀峰和其后杂完全达到分离，分离效果明显改善。

（3）对优化的有关物质进行专属性考察

取本品（17PS03005-2）细粉适量（约相当于普伐他汀钠50 mg），置50 mL量瓶中，分别进行酸破坏（加1 mol/L盐酸溶液1 mL，室温放置3小时），碱破坏（加1mol/L氢氧化钠溶液1 mL，室温放置24小时），热破坏（60℃水浴8小时），光照破坏（置25℃、10000 lux 日光灯下，照射5天），氧化破坏（加5%双氧水1ml，室温放置10分钟），再加稀释剂稀释至刻度，摇匀。按优化的有关物质方法进行检查，记录色谱图。结果见图5，结果表明：各降解产物与普伐他汀钠峰能达到完全分离，说明本法专属性强。