产前免疫性抗体检测与ABO血型系统新生儿溶血病相关性的研究

宋文倩 邵林楠 王霓 夏悦昕 周世航 于卫建

[摘要] 目的 研究丈夫为非O型血的O型孕妇的IgG抗-A或抗-B效价与ABO血型系统新生儿溶血病（ABO HDN）的相关性。方法 2016年12月—2017年8月选取186例O型孕妇（丈夫为非O型），采用常规血清学方法检测孕妇血清中的抗-A或抗-B效价，观察抗体分布与效价升高情况，待分娩后通过新生儿溶血3项实验来分析抗体效价与ABO HDN的相关性。结果 抗-A与抗-B抗体效价的升高与ABO HDN的发病率无显著相关性。结论 孕妇产前免疫性抗体检测无法准确预测ABO HDN。

[关键词] 新生儿溶血病;抗体效价;ABO血型系统

[中图分类号] R446.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2019）10（a）-0009-03

Correlation between Prenatal Immune Antibody Detection and Neonatal Hemolytic Disease in ABO Blood Group System

SONG Wen-qian， SHAO Lin-nan， WANG Ni， XIA Yue-xin， ZHOU Shi-hang， YU Wei-jian

Department of Blood Bank， Dalian Blood Center， Dalian， Liaoning Province， 116001 China

[Abstract] Objective To study the correlation between IgG anti-A or anti-B titer of O-type pregnant women with non-O blood type and ABO HDN in ABO blood group system. Methods 186 O-type pregnant women （husband is non-O type） were selected from December 2016 to August 2017. The anti-A or anti-B titers in the serum of pregnant women were detected by routine serological methods. The distribution of antibodies and the increase of titer were observed. Three experiments of neonatal hemolysis were performed to analyze the correlation between antibody titer and ABO HDN. Results There was no significant correlation between the increase in anti-A and anti-B antibody titers and the incidence of ABO HDN. Conclusion Prenatal immunological antibody testing in pregnant women cannot accurately predict ABO HDN.

[Key words] Neonatal hemolytic disease; Antibody titer; ABO blood group system

新生儿溶血病（Haemolytic disease of the fetus and the newborn，HDN）是一种常见的由母婴血型不合导致的免疫性疾病，临床上以ABO和Rh血型不合较普遍[1]。由于中国人群中RhD阴性血仅占总人口数约3%，所以Rh血型系统HDN相对较少，而ABO血型系统HDN较为常见。大多数ABO血型系统HDN患儿症状较轻，表现为轻度黄疸;少数严重病例可能造成核黄疸导致新生儿脑部后遗症甚至死亡[2]。对于ABO血型不合的夫妇，通常建议孕妇在怀孕16～20周时做血型免疫性抗体检测，对于抗体效价≥64的孕妇应每月做一次复查，来预测HDN的发生。如果母婴血型不合的新生儿在出生7 d内出现黄疸症状，需要采集静脉血做直抗、游离和放散3项实验来确诊是否为ABO HDN[3]。该研究2016年12月—2017年8月采用血型血清学方法按照上述常规检测流程对大连地区186例O型血孕妇做血型免疫性抗体的检测，回顾性分析孕妇IgG抗体效价与ABO血型系统HDN的关系，为临床预防和治疗HDN提供参考依据，报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

选取到大连市血液中心做产前血型免疫性抗体检测的O型血孕妇186例，其丈夫均为非O型血。孕妇年龄在23～39岁之间，孕周为16～35周，初次检测为16～20孕周。待分娩后，随访其新生儿血型和ABO HDN发生的情况。

1.2  试剂与仪器

抗-A、抗-B单克隆抗体血清（20160805）、ABO试剂红细胞（2017083018）、抗-D抗体（20171807）、筛选细胞（20177029）、抗-IgG试剂（20175101）、2-巯基乙醇（Millipore，M6250）离心机（KA-2200型）、37℃水浴箱。

1.3  方法

1.3.1 血型鑒定和不规则抗体筛查  采集夫妇两人静脉血各2 mL，分别做ABO、Rh血型鉴定和孕妇的不规则抗体筛查实验，实验方法参照标准操作规程。

1.3.2 IgG抗体效价检测  取100μL孕妇血浆加等量的2-ME混合后置于37℃水浴中10 min，使血浆中的IgM抗体被破坏。用生理盐水倍比稀释后，加入与丈夫血型相同的ABO试剂红细胞，37℃孵育30 min后测定相应的IgG血型抗体效价。

1.3.3 新生兒溶血3项实验  取新生儿柠檬酸盐抗凝血3 mL，红细胞洗涤3次，分别做ABO、Rh血型鉴定、直接抗人球实验、游离抗体实验和放散抗体实验。实验方法参照标准操作规程。

1.4  统计方法

采用SPSS 19.0统计学软件处理数据，计数资料[n（%）]采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  孕妇血浆IgG类ABO抗体效价检测结果

对186位丈夫为非O型的O型血孕妇初次检测的ABO抗体效价统计，其中O-A占37.1%;O-B占45.2%;O-AB占17.7%。每种血型组合对应的抗体效价分布情况见表1。

2.2  O型孕妇IgG抗-A、抗-B效价与ABO血型系统HDN发病率的相关性

186例夫妇血型不合的孕妇中有138例IgG抗-A或抗-B效价大于64，复查后抗体效价升高的状况与分娩后新生儿患ABO血型系统HDN的情况见表2所示，其中丈夫为AB型的抗-A与抗-B效价都统计在内。

3  讨论

多年来，临床上认为母婴ABO血型不合是引起HDN的一个重要原因，孕妇血清IgG抗-A或抗-B效价越高，致敏胎儿红细胞引起溶血的可能性越大[4]。有医院曾在一年内对54例重度ABO HDN患儿进行了换血治疗[5]。为了预测ABO HDN，丈夫为A、B或AB型的O型血孕妇通常从怀孕16～20周开始，每隔一段时间时监测一次IgG抗-A、抗-B效价直至分娩。临床上以64作为抗体效价的参考值，效价<64被认为不会发生ABO HDN;效价>64被认为较易发生ABO HDN;抗体效价值越高，发病概率越大[6]。然而近年来，一些西方发达国家陆续取消产前ABO血型系统抗体检测，仅针对Rh阴性孕妇做新生儿Rh血型系统溶血病的预防性检测。因此，国际上对于是否应该保留产前ABO血型抗体检测一直存在争议。

不同于作为红细胞结构蛋白Rh血型抗原，ABO血型抗原为红细胞表面糖蛋白，其数量随胎儿发育而逐渐增加，直到出生后6个月才接近成人水平。胎儿血浆中可能会存在高效价的抗-A或抗-B抗体，但实验证实均为IgG抗体，即来源于母体[7]。由于胎儿抗原水平低，此类IgG抗体极少能造成胎儿高胆红素血症和严重贫血，积水和核黄疸更是罕见。即使新生儿直接抗人球实验凝集强度为4+，抗体也均为IgG性质，通常不会激活补体系统;同时胎儿红细胞上A或B抗原为弱表达，不会与抗-C3d抗体反应[8]。目前部分统计研究显示孕妇IgG抗A或B效价与ABO新生儿溶血病发病率呈正相关[9-10]，然而该类报道仅探讨抗体效价与ABO HDN发病率的关系，而没有考虑到抗体效价检测结果判断的标准，即抗体持续升高。该实验室在临床检测中发现部分O型未孕女性IgG抗-A或B效价就高达64甚至256，怀孕后所维持的高效价与胎儿红细胞的免疫刺激无关，因此只有抗体效价持续升高的孕妇才应被判断为易发生ABO HDN。然而，该研究的结果显示抗体效价的升高ABO血型系统HDN发病率无显著相关性。在新生儿溶血3项检测中，发现1例孕后期抗-A效价持续升高至2 048的O型孕妇的新生儿为O型，孕期抗体升高的影响因素以及ABO HDN检测的准确性尚待确证。

目前，国内普遍将产前ABO HDN检测作为O型血孕妇产检的常规项目，然而结论的可靠性仍需要进一步研究。该实验由于标本量有限，结论有一定的局限性。后期会继续积累大量数据，进一步做Meta分析，通过严谨的实验数据来帮助临床合理地安排产前项目。

[参考文献]

[1]  刘达庄.免疫血液学[M].上海：上海科学技术出版社，2002.

[2]  曹琼，兰炯采.新生儿溶血病的产前诊断方法研究进展[J].中国输血杂志，2003，16（1）：67-68.

[3]  邱小华，施冬梅，刘碧清.汕头地区孕母产前血型抗体预测新生儿溶血病的研究[J].实验与检验医学，2014（4）：401-402.

[4]  方晓蕾.与丈夫血型不合O型和/或RhD（-）孕妇产前血型免疫学抗体与HDN的关系[J].中国输血杂志，2008，21（2）：122-123.

[5]  陈方祥，何静，陈方祥.54例重度ABO新生儿溶血病换血治疗结果分析[J].重庆医学，2010，39（2）：232-233.

[6]  魏亚明，欧英贤.红细胞免疫抗体检查在输血及产前诊断中的应用[J].中国输血杂志，2000，13（4）：266.

[7]  Fung MK，GB， Hillyer CD.Westhoff CM（eds） Glycine-HCl/EDTA elution procedure （method 4-2） & heat elution procedure（method 4-3）， general laboratory methods. American association of blood bank， Bethesda， Maryland， USA. Technical manual，2014（18）：17-19.

[8]  V Kumawat，K Kulkarni，M Goyal.ABO Hemolytic Disease of Fetus and Newborn; Still a Diagnostic Dilemma： A Case Report[J].Indian Journal of Hematology & Blood Transfusion，2017（4）：1-2.

[9]  张毅，崔吉香，李慧.微柱凝胶技术在O型孕妇IgG抗A/B效价与ABO新生儿溶血病相关性研究中的应用[J].检验医学与临床，2016，13（12）：1626-1627.

[10]  P Li，LH Pang，HF Liang. Maternal IgG Anti-A and Anti-B Titer Levels Screening in Predicting ABO Hemolytic Disease of the Newborn： A Meta-Analysis[J].Fetal & Pediatric Pathology，2015，34（6）：341-50.

（收稿日期：2019-07-04）