Th17/Treg及其相关炎性介质在重症脓毒症中的表达机制研究

文明祥 孙鸿鹏 潘渝 梅华鲜 叶八宁 施贤清

（贵州省人民医院 贵州 贵阳 550002）

重症脓毒症是由感染所引起的全身炎症反应所引发的疾病，由于其发病过程中容易导致患者体内多种炎症细胞和炎症介质的产生，继而诱导炎症的级联反应，导致患者易出现各器官功能紊乱和衰竭，严重的情况下会产生休克和死亡等恶性临床事件。在最新的研究指出，重症脓毒症是炎症反应中促炎和抗炎反应相互影响的结果[1]。然而在炎症反应中，Th17细胞及其相关炎症介质（IL-6、IL-17）的促炎作用和Treg细胞及其相关炎症介质（IL-10、TGF-β）的抗炎作用被认为最具有代表性。因此，本文以Th17和Treg细胞及其炎症介质作为重症脓毒症的发病机制进行研究，为重症脓毒症的临床研究提供依据和参考。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年2月-10月在我院接受治疗的重症脓毒症患者35例作为研究组，同时选取健康人群（35例）作为对照组，两组患者在病程、年龄、男女性别比例、病历等资料上均无显著差异。其中准入标准为ACCP（美国胸科医师学院）和SCCM（美国危重疾病医学会）共识会议制定的诊断标准。其中排除标准：患有哮喘、红斑狼疮、类风湿关节炎等免疫系统疾病的患者；患者出现休克等意识不全的患者；患有艾滋病、急性冠脉综合症、肿瘤、肝炎的患者；患者在住院2个月内使用激素类药物和免疫抑制类药物的。

1.2 研究方法

1.2.1 检测样本收集 对研究组和对照组的研究对象全部实施静脉抽血（5ml）来获得其外周血的样本，其中重症脓毒症患者必须在确诊1h内实施静脉抽血,并将获得的血液样本滴加肝素做抗凝处理后，置于冰箱（-4℃）下保存备用。

1.2.2 流式细胞技术检测Th17与Treg细胞 在每个检测的样本中分别取出50ul、100ul分别用于检测样本中Th17与Treg细胞的含量。在50 ul血液样本中添加IL-17APE(EB 公司、5ul)，同时在100 ul血液样本中添加CD-ECD-CD25-PC5-CD127-PE(EB 公司、10ul)，常温下避光培养15分钟，添加红细胞裂解液，并继续避光培养10分钟后，添加PBS（1.5ml）后离心5分钟（1500转/分）去上清（重复一次）。将获得的产物置于流式细胞仪上检测Th17和Treg细胞的含量，其中IL-17A+、CD4+、CD3+、CD3射门均为Th17细胞，而CD4+CD25+CD127为Treg细胞。

1.2.3 Th17细胞相关IL-6、IL-17和Treg细胞相关IL-10、TGF-β的检测 对Th17细胞相关IL-6、IL-17和Treg细胞相关IL-10、TGF-β的检测应用ELISA法，具体的实验操作，参照ELISA试剂盒（上海极威生物科技有限公司）的操作指南进行。

1.3 统计学分析

数据采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 重症脓毒症患者外周血液中Th17、Treg细胞的检测结果分析

重症脓毒症患者的外周血液样本中Th17和Treg细胞的含量显著升高（较对照组），P＜0.05，差异显著有统计学意义，见表1。

表1 重症脓毒症患者外周血液中Th17、Treg细胞的检测结果（）

表1 重症脓毒症患者外周血液中Th17、Treg细胞的检测结果（）

组别 样本数 Th17（%） Treg（%）研究组 35 5.73±0.31 9.53±0.51对照组 35 2.35±0.26 5.98±0.26

2.2 重症脓毒症患者外周血液中Th17/Treg的比值分析

重症脓毒症患者的外周血液样本中Th17/Treg值显著升高（较对照组），P＜0.05，差异显著有统计学意义，见表2。

表2 重症脓毒症患者外周血液中Th17/Treg的比值分析结果（）

表2 重症脓毒症患者外周血液中Th17/Treg的比值分析结果（）

组别 样本数 Th17/Treg研究组 35 0.601±0.062对照组 35 0.393 ±0.029

2.3 重症脓毒症患者外周血液中IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β的检测结果分析

重症脓毒症患者的外周血液样本中IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β的表达量显著升高（较对照组），P＜0.05，差异显著有统计学意义，见表3。

表3 重症脓毒症患者外周血液中IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β的检测结果（）

表3 重症脓毒症患者外周血液中IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β的检测结果（）

TGF-β（Pg/ml）研究组 35 33.62±8.69 113.52±12.61 39.15±9.26 45.36±9.75对照组 35 11.39±3.95 35.41±7.51 12.33±4.26 18.32±5.11组别 样本数 IL-6（Pg/ml）IL-17（Pg/ml）IL-10（Pg/ml）

3.讨论

在重症脓毒症的临床和发病机理研究中，炎症反应是导致其发生的核心病理变化过程，其中最具有代表性的促炎细胞为Th17细胞，及其相关的促炎因子IL-6、IL-17，而最具有代表性的抗炎细胞为Treg细胞，及其相关的抗炎因子IL-10、TGF-β。国内外专家指出，Th17细胞和Treg细胞的动态平衡过程是决定重症脓毒症病变的核心环节，当Th17细胞增多且功能增强时，往往会诱导体内激烈的炎症反应，从而促进重症脓毒症的发生；而当Treg细胞增多且功能增强时，能导致Th17细胞失活和凋亡，从而抑制炎症反应的进程，进而标志着重症脓毒症得到一定的控制。然而国内外报道中并没有从患者外周血液的Th17、Treg和其相关炎症因子的表达变化情况中寻找到直接证据，来充分说明Th17、Treg参与重症脓毒症的生物学机制。

因此，本文对Th17和Treg细胞及其炎症介质作为重症脓毒症的发病机制进行研究。研究结果表明，重症脓毒症患者的外周血液样本中Th1和Treg细胞的含量，IL-6、IL-17、IL-10、TGF-β的表达量、Th17/Treg值都显著升高（较对照组）。而这一结果也表明了，体内的炎症反应是重症脓毒发病的重要因素之一；Th17/Treg值的升高表明患者体内促炎反应（Th17）明显强于其抗炎反应（Treg）。