血清Sestrin 2在子痫前期孕妇中的变化及诊断价值

陈岚 杨纯 孟磊

华中科技大学同济医学院附属协和医院西院1妇产科，2重症医学科（武汉430022）

子痫前期（preeclampsia，PE）在妊娠中发病率为2% ～8%，是孕产妇和胎儿死亡的主要原因［1］。胎盘缺血、发育异常及母体对胎儿过度反应是主要发病机制。胎盘灌注受损出现缺血再灌注损伤、氧化应激和过度炎症反应被认为是贯穿先兆子痫的病理生理过程。PE 的诊断和严重程度评估均基于非特异性临床症状和实验室检查。血浆生物标志物有利于PE 诊断、分类和治疗［2］。Sestrin 是一种具有蛋白质结构的代谢调节剂，在DNA 损伤、缺氧和氧化应激下表达增加，对细胞有潜在的保护作用［3］。Sestrin 家族由Sestrin 1、Sestrin 2 和Sestrin 3 三种成员组成，Sestrin 2 对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，ANG Ⅱ）所致的内皮细胞毒性具有保护作用，具有潜在的抗氧化、抗炎和抑制过度免疫反应作用。鉴于氧化应激和母体对胎儿过度免疫反应在先兆子痫发病机制中发挥重要作用，尚无研究报道Sestrin 2 在PE 中的浓度和诊断价值。本研究旨在评估Sestrin 2 在PE 和健康孕妇血液循环中的浓度及诊断价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象本研究纳入2018年1月至2019年1月于华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科收治的血压正常孕妇和子痫前期孕妇作为研究对象。纳入标准：（1）孕妇符合PE 诊断标准；（2）无严重心肝肾疾病，无严重胎儿缺陷性疾病；（3）孕妇无血液、淋巴系统疾病和恶性肿瘤性疾病；（4）单胎妊娠孕妇；（5）孕妇自愿参与研究且能完全配合研究者。排除标准：（1）多胎妊娠孕妇；（2）早产包括胎膜破裂、胎儿异常、妊娠期糖尿病者；（3）慢性高血压和全身性疾病（如慢性肾病或自身免疫性疾病）者；（4）孕妇或家属不愿意配合或加入研究者。选取同期年龄、孕龄和体质量指数（body mass index，BMI）相匹配的健康孕妇30 例为对照组。本研究共纳入90例孕妇，其中PE孕妇60例，包括轻度PE 30 例为轻度PE 组，重度PE 30 例为重度PE 组。本研究经医院伦理委员会批准同意实施。

1.2 PE 诊断标准（1）轻度PE 诊断标准［8］：妊娠20 周后新发现血压升高，间隔6 h 两次测量血压≥140/90 mmHg，24 h 蛋白尿＞300 mg 或尿蛋白检测＞1 + ；（2）重度PE 诊断标准：妊娠20 周后出现血压升高，血压≥160/110 mmHg，24 h 尿蛋白≥2 g，或出现以下情况：血小板减少症（血小板计数＜100 × 109/μL）、新发生中枢神经系统异常或视觉障碍、进行性肾功能衰竭（血清肌酐＞1.1 mg/dL）、肝酶升高，存在上腹疼痛、肺水肿症状和体征等。

1.3 研究资料采集收集包括年龄、孕周、胎次、BMI、采血时孕周、PE 诊断到分娩时间隔、分娩时孕周和胎儿出生体质量等临床资料。通过彩色脉冲多普勒超声测量冠臀长度（crown-rump length，CRL）确认孕周。平均动脉压（mean arterial pressure，MAP）= 1/3（收缩压-舒张压）+ 舒张压。重度蛋白尿定义为24 h 尿蛋白＞3 g/d 或尿蛋白/肌酐比值＞3 mg/dL 或尿蛋白＞3 + 。出生间隔时间定义为怀孕妇女入院收集血清样本入组研究到分娩所经过的时间。胎儿生长受限（fetal growth restriction，FGR）又称宫内生长受限（intrauterine growth restriction，IUGR）诊断标准为胎儿出生体质量低于同孕龄平均体质量的两个标准差，或低于同龄正常体质量的10 个百分位数。

1.4 血清Sestrin 2 浓度检测在给予任何治疗干预和分娩之前，采集孕妇上肢静脉血样，对照组在常规孕检时采集上肢静脉血样。将外周血样品收集在EDTA 管中，并在收集30 min 内在2 ℃～8 ℃下以1 000g离心15 min。收集血浆并在-80 ℃冰箱冷冻待检。使用夹心酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（Human SESN2 ELISA Kit，Biotech，美国，货号：EH1556）测定血清Sestrin 2 浓度。测定灵敏度＜0.005 ng/mL，组间和组内变异系数分别为＜8.2%和＜5.9%。

1.5 统计学方法SPSS 20.0 统计软件行统计分析。分类变量采用例数和百分比表示，连续变量采用均数± 标准差表示；3 组之间比较采用ANOVA 分析，两组之间比较采用独立样本t检验，Spearman 相关性分析血浆Sestrin 2 浓度与PE 患者临床参数间的关系，ROC 曲线确定血浆Sestrin 2浓度对PE 患者的诊断价值，P＜0.05 表示差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 3 组患者一般临床特征比较3 组患者在年龄和BMI 间差异无统计学意义（P＞0.05）。重度PE组患者的平均血压、重度蛋白尿、HELLP 综合征检出率显著高于轻度PE 组患者（P＜0.01），重度PE组胎儿出生体质量、分娩时孕周和出生间隔显著低于轻度PE 组（P＜0.001），重度PE 组胎儿生长受限较对照组和轻度PE 组更常见（P＜0.001）。见表1。

2.2 3 组患者血清Sestrin 2 浓度比较轻度PE组患者血清Sestrin 2 浓度显著高于对照组［（0.933± 0.35）ng/mLvs.（0.449 ± 0.40）ng/mL，P＜0.05］，重度PE 组血清Sestrin 2 浓度显著高于轻度PE 组患者［（1.891±4.83）ng/mLvs.（0.933±0.35）ng/mL，P＜0.05］。见图1。

表1 3 组患者一般临床特征比较Tab.1 The comparison of clinical characteristic between the mild PE group，severe PE group，and control group（n = 30） ± s

表1 3 组患者一般临床特征比较Tab.1 The comparison of clinical characteristic between the mild PE group，severe PE group，and control group（n = 30） ± s

注：与轻度PE 组比较，*P ＜0.05；与对照组比较，#P ＜0.05

年龄（岁）BMI（kg/m2）平均血压（mmHg）PE 诊断采血时孕周PE 分娩采血孕周新生儿体质量（g）出生间隔（周）HELLP 综合征［例（%）］重度蛋白尿［例（%）］胎儿生长受限［例（%）］对照组轻度PE 组重度PE 组P 值28.8 ± 5.5 28.3 ± 4.4 80 ± 7.5 33.0 ± 2.5 39.0 ± 1.3 3 125 ± 470 5.8 ± 3.6- - -30.1 ± 5.3 31.2 ± 4.9 106.7 ± 6.3#33.1 ± 3.2 35.7 ± 3.0#2 165 ± 1 070#1.5 ± 2.0#0（0）6（20.0）15（50）31.9 ± 5.2 32 ± 8.9 118.3 ± 17*#32.9 ± 3.3 34.5 ± 5.3#1 665 ± 975#0.4 ± 1.3*#4（13.3）*12（40.0）*17（56.6）*0.113 0.095＜0.001 0.978＜0.001＜0.001＜0.001 0.006＜0.001＜0.001

图1 轻重度PE 组患者与对照组血清Sestrin 2 浓度比较Fig.1 The compare of Serum sestrin 2 levels in patients with mild and severe preeclampsia group and control group

2.3 血清Sestrin 2 浓度与PE 患者临床参数间的相关性血清Sestrin 2 水平与年龄、采样血样时孕周、BMI、平均动脉血压、孕周、分娩时孕周之间差异无统计学意义，见表2；血清Sestrin 2 水平与出生间隔之间呈负相关（r=-0.462，P= 0.009），见图2A。与新生儿体质量呈负相关（r=-0.387，P= 0.006）。见图2B。

2.4 血清Sestrin 2 浓度对PE 诊断价值血清Sestrin 2 浓度的截断值为1.637 ng/mL，其诊断PE 患者ROC 曲线下面积（AUC）为0.737（95%CI：0.627 ～0.829，P＜0.001），敏感性和特异性分别为64.2%和96.4%。见图3。

3 讨论

PE 发病机制尚不清楚，可能涉及母体、胎盘和胎儿等多种因素，包括滋养细胞侵袭异常、免疫调节功能异常、内皮细胞损伤、遗传和营养因素等［4］。本研究发现相较于健康孕妇，PE 孕妇平均血压、重度蛋白尿、HELLP 综合征检出率均高于对照组孕妇，且胎儿出生体质量、分娩时孕周和出生间隔均显著低于轻度PE 组和对照组孕妇，这与文献报道结果一致［5］，即重度PE 患者发病时血压更高，蛋白尿更为严重，HELLP 发生率更高，胎儿在宫内生长受限发生率高，疾病更为严重［6］。

表2 PE 患者血清Sestrin 2 浓度与患者临床参数相关性Tab.2 Correlation analyses between the maternal serum Sestrin 2 and the clinical parameters

图2 PE 患者血清Sestrin 2 浓度与出生间隔（A）和新生儿体质量（B）相关性Fig.2 Correlation between serum Sestrin 2 concentration and birth interval（A）and neonatal weight（B）in PE patients

图3 血清Sestrin 2 浓度诊断PE 患者的ROC 曲线Fig.3 ROC curve for Serum Sestrin 2 concentration diagnosis of PE patients

本研究发现PE 患者血清Sestrin 2 浓度显著高于对照组孕妇，且重度PE 组孕妇血清Sestrin 2浓度显著高于轻度PE 组，提示在PE 孕妇中血清Sestrin 2 浓度随疾病严重程度增加而增加，其可能参与PE 发病机制或病理生理过程。PE 患者血清Sestrin 2 浓度增加机制尚不清楚，其可能原因如下：PE 患者存在滋养血管和胎盘发育异常，导致胎盘灌注不足，细胞缺血缺氧导致氧化应激水平增加，缺血和再灌注损伤导致活性氧产生、内质网应激、胎盘合胞体结构的破坏导致细胞合成和分泌Sestrin 2 增加并进入母体循环［7］。研究报道Sestrin 2 在缺氧和氧化应激时表达增加可降低机体细胞内ROS 产生，对氧化应激发挥拮抗作用。Sestrin 2 还可激活腺苷一磷酸依赖性蛋白激酶（adenosine monophosphate-dependent protein kinase，AMPK），其在正常胎盘和胚胎发育中起重要作用［8］。AMPK 的活化增加了血管内皮细胞生长因子水平，进而改善内皮功能，降低氧化应激，减轻继发于胎盘缺血的高血压。合胞体结构损伤后从绒毛区进入母体循环的各种胎盘因子可引发全身炎症反应［9］，进一步加重细胞应激损伤，氧化应激和全身低度炎症反应可刺激和促进机体产生更高水平的血清Sestrin 2浓度。

本研究发现PE 患者血清Sestrin 2 浓度与出生间隔和胎儿体质量呈显著负相关，提示随着PE 病情加重，可能胎儿因为缺血缺氧和营养物质缺乏，导致生长发育迟缓，胎儿生长受限。事实上本研究也发现PE 患者脐动脉和子宫动脉Doppler 超声显示血流异常发生率远高于健康孕妇。这些结果可能提示血清Sestrin 2 浓度可能对PE 严重程度具有一定的诊断和提示价值［10］。本研究发现当血清Sestrin 2 浓 度 为1.637 ng/mL 时，其 诊 断PE 患 者ROC 曲线下面积为0.737，敏感性和特异性分别为64.2%和96.4%，提示其具有良好的诊断价值［11］，可能为反映PE 患者氧化应激状态的一个良好的辅助诊断标志物。

本研究尚存在如下不足：（1）本研究为回顾性研究，纳入病例数较少，尚需多中心大样本研究来证实本结论；（2）母体循环中Sestrin 2 浓度增加的精确机制尚不清楚，孕妇Sestrin 2 浓度的动态变化如何值得进一步研究。

综上，PE 患者血清Sestrin 2 浓度显著性高于健康孕妇，且随着PE 严重程度增加而增加，与PE患者新生儿出生体质量呈显著性负相关，对PE 具有一定诊断价值。