南京地区1 776例外周血淋巴细胞染色体核型分析

余梦瑶 顾敏 赵鸿

染色体疾病是由于染色体数目或者结构异常引起的疾病。对高危人群进行染色体核型分析是一个重要的遗传学检查手段，对临床诊断及指导优生优育有重要意义。现对近10年来院就诊的1 776例南京居民患者进行外周血淋巴细胞染色体核型分析，旨在分析和评估其与南京地区常住人口染色体病分布情况关系。

1 对象和方法

1.1 对象

收集2006年1月至2016年1月间由医生开具染色体检查项目，来院进行常规染色体检查的南京地区居民共计1 776人的肝素锂抗凝外周血。其中，男性1 124人，占 63.3%（1 124/1 176），女性 652人，占36.7%（652/1 176），受检者年龄分布在12～45岁之间。

1.2 方法

1.2.1 外周血淋巴细胞培养及染色体制备

无菌条件下抽取肝素锂抗凝外周血2 mL，上下颠倒混匀。吸取1 mL加入淋巴细胞培养基（达晖生物），培养72 h。收获前2.5 h加入10 μg/mL的秋水仙素150 μL/每瓶。2 500转离心10 min弃上清，加入0.075 mol/L KCL溶液9 mL，重悬沉淀。37℃水浴15 min。加入新鲜配置固定剂（甲醇∶乙酸=3∶1）1 mL混匀。2 500 r离心10 min弃上清，加入固定剂10 mL室温静置10 min，2 500转离心10 min。重复固定一次。弃上清液，加入适量固定剂调成适宜浓度的细胞悬液。将细胞悬液滴在预冷的洁净湿片上，放烤箱80℃烘烤4 h，自然冷却。

1.2.2 G显带

玻片置入0.05%胰酶消化60 s。流水冲净，Giemsa（Sigma）染色显带。按照人类细胞遗传学命名国际体系（ISCN 2013）统计染色体核型。

2 结果

2.1 280例异常核型分布情况

1 776例样本中共检出染色体核型异常280例，占15.76%（280/1 776）。其中常染色体数目异常26例，占异常染色体核型的1.46%（26/1 776）；常染色体结构异常33例，占异常染色体核型的1.86%（33/1 776）；性染色体数目异常140例，占异常染色体核型的7.88%（140/1 776）；性染色体结构异常29例，占异常染色体核型的1.63%（29/1 776）；性别扭转39例，占异常染色体核型的2.20%（39/1 776）；嵌合体13例，占异常染色体核型的0.73%（13/1 776）。如表1所示，染色体数目异常者中，最为常见的核型为47，XXY，占染色体数目异常总数的56.02%（93/166）；其他比较常见核型分别为45，XO，占 22.89%（38/166）；47，XY+21，占12.05%（20/166）；染色体结构异常者的主要核型分别为：46，X，i（Xq），占结构异常总数的12.90%（8/62）；45，XY，rob（13；14），占 8.06%（5/62）；46，X，i（Xp），占 9.68%（6/62）。性别扭转或性分化异常（男：46，XX；女：46，XY）共计39例，占异常核型总数13.93%（39/280）。嵌合体中，常见异常核型为45，XO/46i（Xq），占异常总数的2.14%（6/280）。其他比较罕见的染色体异常核型详见表1，约占染色体异常总数的23.21%（65/280）。

表1 280例异常染色体核型及其分布［n（%）］Table 1 Distribution of 280 abnormal chromosome karyotype［n（%）］

2.2 核型异常患者的主要临床表现

男性受检者中，临床诊断为第二性征发育不良者共计460例，导致其异常的主要核型为47，XXY（11.74%）、46，XX（1.30%）和 45，XY，rob（13；14）（0.65%）；弱/无精症患者312例，检出的异常核型主要 为 47，XXY（6.73%）和 45，XY，rob（13；14）（1.28%）；智力低下患者19例，主要核型为47，XY+21（73.68%）；两性畸形者 15例，核型为 46，XX（40.00%）。女性受检者中，临床诊断为原发闭经者共计156例，异常核型主要为45，XO（12.18%）、46，XY（5.13%）和46，X，i（Xq）（3.85%）；第二性征发育不良者128例，其染色体核型大部分正常；矮小、迟缓发育者131例，主要异常核型为45，XO（7.63%）；两性畸形者14例，异常核型为46，XY（71.43%）。

表2 常见染色体核型异常者临床表现与核型分类及异常检出率［n（%）］Table 2 Clinical manifestations，karyotype classification and abnormal detection rate of common chromosomal karyotype abnormalities［n（%）］

3 讨论

遗传咨询患者中经常出现的染色体异常包括染色体数目异常、染色体结构异常及嵌合体等［1-2］。染色体异常又是导致染色体病的重要因素［3］。染色体病可造成患者的畸形和残疾，或者出现多器官、多系统功能异常等［4］，危害患者身心健康，也会给社会家庭带来压力与经济负担。目前临床上尚未有有效的染色体病治疗方法，进行染色体核型分析结合临床表现可以明确病因，为临床诊断、遗传咨询及优生优育等提供重要依据及指导意义。

本次研究中对南京地区1 776例患者进行了细胞遗传学分析，共检测出染色体异常280例，异常率为15.76%，显著高于一般人群染色体异常频率5%［5］，这可能与本研究剔除了多态性核型相关；此外，此次研究核型异常率也高于周静等［6］2012年对南京地区核型异常率（6.37%），可能与两者研究抽样人群、样本量及检测技术的进步相关；但本研究异常率与柯买春［7］2019年对九江地区的研究异常率（11.9%）接近，表明染色体核型异常为遗传咨询患者中常见病因。

本文中染色体异常以性染色体数目异常为主，占比50%，其次为性别扭转、常染色体结构异常、性染色体结构异常和常染色体数目异常，嵌合体比例最低。性染色体数目异常又以47，XXY为主，占性染色数目异常的66.43%（93/140），与邱惠国等研究结果相符［5］；47，XXY 称为克氏综合征，本研究的460例第二性征不良和312例弱/无精症男性受检者中，检出75例，表明该核型异常发生频率高，应通过染色体检查，为患者的诊断和治疗提供指导性依据。而女性染色体数目异常则以45，XO为主，即特纳氏综合征（Turner syndrome，Turner's综合征），占比为27.14%（38/140）。Turner's综合征临床表现为身材矮小、第二性征发育不良、闭经等，本研究在156例原发性闭经患者中检出19例（12.18%），在128例第二性征发育不良患者中检出1例（0.78%）；在131例矮小、发育迟缓患者中检出10例（7.63%），与王新红［8］等人的研究结果一致。性别扭转是指社会性别为女性，而染色体核型46，XY；以及社会性别为男性，而染色体核型为46，XX。本研究中共检出性别扭转39例（2.20%），性别扭转可能导致性别应有性征不明显，比如：XY女性出现原发闭经、阴毛稀少及腹股沟包块等；男性出现乳房发育、阴囊小及喉结不明显等［9］。本次研究中，检出常染色体结构异常33例（1.86%），其中罗伯逊易位核型12例，又以13、14号染色体易位为主，占比高达75%（9/12），与陈春等［10］研究结果相符。罗伯逊易位表型一般正常，但其易位原理决定了其不能产生配子或导致胎儿流产或死胎［7］。本研究临床诊断为第二性征发育不良患者中检出罗伯逊易位3例，弱/无精症4例。因此，十分有必要对于这类患者进行染色体核型分析指导生育，以达到优生优育的目的。本次研究中嵌合体检出占比为0.73%，比例较低，可能由于核型分析检测技术分辨率有限，且嵌合体可因其嵌合比例的不同从而导致临床表型的严重程度不同，因此，或许可以联合其他比较先进的分子诊断技术进行检测，为临床提供更全面准确的诊断依据及咨询指导。

染色体核型分析是一种重要的遗传学检查手段，具有不可替代的临床价值。然而，传统的染色体核型分析技术易受环境因素影响，且其分辨率不高，对于小于10 Mb片段的缺失或重复难以检出，这些缺陷均在一定程度上限制了其临床应用［11］。近年来，随着分子检测技术的不断发展，染色体微阵列分析技术、比较基因组分析、光谱核型分析等基因检测技术的普及使得能够对基因进行精细定位，从而明确染色体复杂结构异常的具体发病机制，提高了染色体病的确诊率，为指导优生优育、预防、诊断及治疗染色体病提供更为全面准确的依据。

接下来的研究将结合传统细胞遗传染色体核型分析技术与FISH、CMA等多种分子遗传学技术，提高对因染色体疾病导致不孕不育的确诊率。笔者将进行跟踪随访，并检测部分弱精患者外周血DNA中相关基因甲基化水平。相信新的研究不仅能为不育男性找出可能病因，也助于其选择更加合适的辅助生育治疗方式，因此对高危人群进行染色体检查是非常有必要的。