单煎液与合煎液中青皮总黄酮含量的测定

杜胜国 彭学东

（商河县人民医院 山东商河 251600）

1 前言

橙皮苷等黄酮类化合物对胃肠平滑肌有较好的松弛作用，可以治疗腹痞满胀痛[1]，本实验着重研究处方配伍方式对方中橙皮苷含量的影响。本文建立紫外-可见分光光度法测定青皮汤中橙皮苷含量的方法，研究配伍对橙皮苷的影响和引起变化的可能因素，探讨方剂的配伍规律。

2 试药与仪器

紫外-可见分光光度计；电子分析天平；超声波清洗器；超纯水器。青皮汤处方：青皮3 g，莪术、三棱各2.1 g，陈皮、神曲各1.5 g，延胡索1 g。

3 实验方法与结果

3.1 水煎液样品制备

3.1.1 青皮单煎液

按处方量取青皮单独放置于烧杯中，同时按处方量取处方中其他药材放入另一烧杯中，加12 倍水浸泡约30min，煮沸30min 后，趁热滤过；滤渣加10 倍水煮沸20 min，趁热滤过，合并2 次滤液，浓缩干燥得水煎液样品1（青皮单煎与其他煎液合并溶液）。

3.1.2 陈皮单煎液

按处方量取陈皮单独放置于烧杯中，同时按处方量取处方中其他药材放入另一烧杯中，加12 倍水浸泡约30 min，煮沸30 min 后趁热滤过；滤渣加10倍水煮沸20 min，趁热滤过，合并2 次滤液，浓缩干燥得水煎液样品2（陈皮单煎与其他煎液合并溶液）。

3.1.3 合煎液

按处方量取处方中全部药材放入另一烧杯中，加12 倍水浸泡约30 min，煮沸30 min 后趁热滤过；滤渣加10 倍水煮沸20 min，趁热滤过，合并2 次滤液，浓缩干燥得水煎液样品3。

3.1.4 水煎液样品浸膏得率

通过测定发现，样品1、样品2 和样品3 的出膏率分别是11.5%、12.7%和13.9%。

3.2 对照品溶液制备

称取橙皮苷对照品10 mg，精密称取，加甲醇制成饱和溶液，作为对准品溶液。

3.3 水煎液样品溶液制备

称取水煎液样品100mg，精密称取，加甲醇20mL，加热回流20 min，滤过，取滤液5 mL，浓缩至1 mL，作为供试品溶液。

3.4 薄层定性分析

照薄层色谱法实验，吸取上述2 种溶液各2 μL，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）为展开剂a，展至约3 cm，取出，晾干；再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上层溶液为展开剂b，展至约8 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显现相同颜色的荧光斑点。

3.5 紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量

3.5.1 对照品溶液的制备

称取橙皮苷对照品约10 mg，精密称取，用90%碱性甲醇溶解并定容至100mL，作为橙皮苷对照品溶液。

3.5.2 供试品溶液的制备

称取水煎液样品约30 mg，精密称取，置100 mL锥形瓶中，精密加90%碱性甲醇100 mL，超声20 min，过滤，将溶液转移置100 mL 容量瓶中，用碱性90%甲醇定容至刻度，混匀，即得。

3.5.3 测定波长的选择

精密量取对照品溶液和供试品溶液各1.5 mL，分别至25 mL 量瓶中，用90%碱性甲醇定容至刻度，混匀，以90%碱性甲醇溶液为空白，在200～800 nm进行扫描，确定最大吸收波长为285 nm。

3.5.4 标准曲线的绘制

精密量取橙皮苷对照品溶液0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、6 mL 分别置于10 mL 容量瓶中，用90%碱性甲醇定容，配成系列对照品溶液，在285 nm 处测定吸光度。以吸光度对橙皮苷的浓度做回归方程。回归方程为Y=17.15X-0.001 4，r=0.999，橙皮苷质量浓度为0.01～0.06mg/mL 时，与吸光度呈良好线性关系。

通过考察可知，用紫外分光光度法准确、稳定、简便，可用来测定青皮汤水煎液中总黄酮的含量。

3.6 总黄酮测定

精密量取“3.5.2”项方法制备的供试品溶液5 mL，置于10 mL 量瓶中，用90%碱性甲醇定容，在285 nm处分别测定吸光值，计算出各供试品中总黄酮的含量，结果详见表1。

表1 水煎液样品总黄酮测定值（单位：%）

4 讨论

4.1 水煎液总黄酮含量测定

橙皮苷是二氢黄酮类成分，是青皮汤中的主要有效成分之一，其含量可作为评估含青皮制剂质量的客观指标之一[2，3]。本实验是以橙皮苷作为对照品，用紫外分光光度法测定青皮汤拆煎前后水煎液中总黄酮含量，进而考察复方配伍对水煎液中总黄酮含量的影响，为进一步研究青皮汤中药物配伍与有效成分之间的关系奠定了一定的基础。

4.2 研究结果讨论

青皮汤君药青皮单煎水煎液的浸膏得率为11.5%，君药青皮为与陈皮共煎水煎液的浸膏得率为12.7%，青皮汤复方水煎液的浸膏得率为13.9%，即配伍后水煎液的浸膏得率有所升高，成分的溶出增加，说明配伍有利于成分的溶出。

青皮汤君药青皮单煎水煎液中总黄酮含量为15.51%，君药青皮为与陈皮共煎水煎液中总黄酮含量为14.69%，青皮汤复方水煎液中总黄酮含量为16.68%。前2 者水煎液中总黄酮含量的差异无统计学意义（P＞0.05），即青皮与陈皮共煎对其复方中总黄酮含量的影响不明显。但青皮汤复方水煎液中总黄酮含量较高，与单煎相比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。青皮汤复方水煎液中总黄酮含量最高，与水煎液浸膏含量最高的结果一致，原因可能与处方中药物之间的配伍机制有关，药物之间的配伍有利于黄酮类成分的溶出[4，5]，有利于水煎液中黄酮类成分含量的增加。

综上所述，青皮汤复方中各药物的配伍有利于黄酮类成分的溶出，但对于具体的黄酮类成分的影响，还需要进行液相、质谱等更深入的相关研究，可以先进行液相的相关检测，研究复方配伍对橙皮苷含量的具体影响，再进行相关药理作用的研究。