血清IL-28A和HMGB1在强直性脊柱炎中的表达及与疾病活动和疗效的关系

李晓琴，段雨函

(恩施土家族苗族自治州中心医院检验科，湖北 恩施 445000)

强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一种以骶髂关节和脊柱附着点炎症为主要症状的自身免疫性慢性疾病，可引起多器官损伤和残疾，威胁人体健康，降低其生活质量[1]。尽管近年来医学技术发展迅速，但仍未确定其病因，且无根治方法；但就目前临床诊断标准，大部分AS患者在确诊时已进入稳定期，失去治疗最佳时机，因此寻找有效诊断指标，提高早期诊断率，延缓进展速度对AS患者十分重要[2]。白细胞介素-28A (interleukin-28A，IL-28A)是一种III型干扰素，在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮及系统性硬化症等免疫性疾病发生发展中占有一定地位[3-4]。但对于IL-28A与AS的关系目前研究尚少。高迁移率族蛋白B1(high mobil ity group protein B1，HMGB1)是近年发现的一种重要炎症因子，与急性肺炎、脓毒症及关节炎等发病等密切相关[5-6]。本研究选取95例AS患者作为研究对象，探讨IL-28A和HMGB1在强直性脊柱炎中的表达情况，并分析其与疾病活动及疗效的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2017年1月至2018年12月恩施土家族苗族自治州中心医院收治的95例AS患者作为研究对象，纳入标准：(1)符合1984年美国风湿病学会修订的AS纽约标准[7]；(2)入组前1月未给予任何治疗者。排除标准：(1)合并炎症性肠病、系统性红斑狼疮及类风湿性关节炎等；(2)合并感染等其它活动性疾病者；(3)合并恶性肿瘤者；(4)依从性差者。将95例患者分为活动组(≥1.3)和稳定组(<1.3)，分别为60例和35例。活动组：男性50例，女性10例；年龄21～50岁，平均(41.74±8.92)岁；稳定组：男性30例，女性5例；年龄20～50岁，平均(42.03±9.05)岁；活动组和稳定组在性别及年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。选取同期性别及年龄与其匹配的70例健康体检者作为对照组。本研究所有研究对象均签署知情同意书，并通过本院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 参考强直性脊柱炎的治疗指南[8]，活动组患者给予塞来昔布胶囊(辉瑞制药有限公司，规格：0.25 g×60片)和柳氮磺吡啶肠溶片(上海福达制药有限公司，规格：0.2g×18粒)，后者起始剂量为1.0 g/d，每周增加0.5 g，最高为2.0 g/d，具体根据患者病情而定，维持此剂量治疗3个月，并行病情评估。

1.2.2 检测方法 采用SSTI II真空采血管抽取对照组和AS患者治疗前后空腹静脉血5 mL，4 000 r/min离心10 min，收集上清液保存于EP管中，并于-80 ℃冰箱保存，待所有标本集齐后一起检测。采用酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法检测血清IL-28A和HMGB1水平，其试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司，具体操作步骤参考试剂盒说明书，仪器为瑞士tecan全自动酶标仪。

采用速率散射比浊法检测CRP，仪器及试剂均为美国贝克曼公司产IMMAGE 800 型全自动特定蛋白分析系统及配套试剂，严格执行本室SOP。

1.3 疾病活动度评分

ASDAS-CRP[9]是国际脊柱关节炎评价工作组针对AS症状提出的新的评价指标，须根据患者腰背痛、外周关节肿胀/疼痛、晨僵持续时间及患者总体评价及CRP计算获得，ASDAS-CRP=0.073×外周关节肿胀/疼痛+0.121×腰背痛+0.058×晨僵持续时间+0.11×患者总体评价+0.579×Ln(CRP+1)。根据ASDAS-CRP值进行分类：(1)非活动期：<1.3；(2)1.3≤低度活动<2.1；(3)2.1≤中度活动<3.5；(4)高度活动：≥3.5。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 各组血清IL-28A和HMGB1水平比较

治疗前活动组、稳定组和对照组3组血清IL-28A和HMGB1水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 血清IL-28A和HMGB1对AS的诊断效能

绘制ROC曲线(图1)，与单项检测比较，血清IL-28A和HMGB两者联合检测明显提高了AS特异度和敏感度。见表2。

表1 各组治疗前血清IL-28A和HMGB1水平比较

表2 血清IL-28A和HMGB1对AS的诊断效能

2.3 血清IL-28A和HMGB1与AS疾病活动度的关系

经ASDAS-CRP判定，活动组中，低度活动者、中度活动者和高度活动者分别为20例、35例和15例；治疗前三者血清IL-28A和HMGB1水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。经Pearson法分析得知，血清IL-28A和HMGB1与ASDAS-CRP值均呈正相关(P<0.05)，其r值分别为0.675和0.704。

表3 血清IL-28A和HMGB1与AS疾病活动度的关系

2.4 活动组血清IL-28A和HMGB1与AS疗效的关系

与治疗前比较，治疗后活动组血清IL-28A和HMGB1均明显降低，且差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 活动组血清IL-28A和HMGB1与AS疗效的关系

3 讨论

AS主要临床特征是组织炎症，但目前临床缺少可量化其病变程度的可靠指标，多以CRP检测和影像学检测进行评估；前者与AS疾病活动度密切相关，在活动度及临床疗效评估上有一定价值，但对于部分低度活动期患者仅以局部组织炎症为主，CRP变化不显著；后者以核磁共振(MRI)效果最佳，可清晰判断局部组织炎症病变情况(肌腱端炎、滑膜炎、及骨髓水肿的有无、范围及程度)，但对外周疾病活动度意义不大[10-11]。尽管近年各疾病分子机制研究火热，但仍未发现一个既可反应AS外周疾病活动状态，又能提示组织炎症病情情况的生物学指标。

IL-28A是由外周血单个核细胞和树突状细胞分泌的细胞因子，其基因结构与IL-10类似，而氨基酸结构则与干扰素(IFN)接近，Zhou等[12]将其命名为IFN-λ，与相应受体结合发挥免疫调节作用，从而具有抗病毒及抗细胞增殖等功能。但关于其与自身免疫性疾病的关系尚不十分清楚。有学者发现，血清IL-28A与人过敏性哮喘病情恶化及严重程度密切相关；而在哮喘大鼠模式中也发现IL-28A通过调节肺树突状细胞功能，促进Th1细胞分化，从而抑制Th2介导的相关反应，最终达到抑制气道过敏的效果[13-14]。HMGB1是广泛存在于真核细胞胞核内的一种高度保守非组蛋白DNA结合蛋白，特别是在机体发生炎症后，单核巨噬细胞和坏死细胞内HMGB1增多，并通过蛋白质非经典途径将其转移至胞外，激活NF-B，启动多种炎症因子转录，从而促进多重炎症反应发生[15]。已有研究表明，HMGB1可反映多种其它类型关节炎的炎症进展[16]。在本研究中，活动组和稳定组血清IL-28A和HMGB1水平均明显高于对照组，提示IL-28A和HMGB1在AS中高表达，表示其可能参与了AS的致病过程，可辅助诊断AS；为确认两者在AS中的诊断价值，本研究绘制ROC曲线图，发现单项检测对AS均有一定诊断效能，而联合检测则可明显提高其诊断效能，这与武树朋等[17]研究基本一致，推荐临床进行联合检测。本研究还发现活动组血清IL-28A和HMGB1水平明显高于稳定组，提示IL-28A和HMGB与AS疾病活动度密切相关。此外，本研究还发现在活动组中，血清IL-28A和HMGB1水平从低度活度者到高度活度者依次升高，提示IL-28A和HMGB1与AS疾病活动严重程度相关。后经Pearson法分析得知，血清IL-28A和HMGB1与ASDAS-CRP值呈正相关，与前述猜想基本吻合，这是因为HMGB1可刺激人单核/巨噬细胞系统，分泌大量IL-28A和CRP，而后者与HMGB1刺激浓度间有显著剂量依赖性关系，最终达到维持并延长炎症反应的作用[18]。此外，本研究还发现治疗后活动组血清IL-28A和HMGB水平明显降低，说明其血清IL-28A与AS疗效相关，有望成为评估AS的有效指标。

综上，血清IL-28A和HMGB1在AS中高表达，与疾病活动度呈正相关，在AS诊断及疗效评估上有一定价值。