罗平小黄姜中6-姜辣素含量测定的方法学研究

杨瀚 白雪飞 杨娇 李丽超 马娜 郭利群

摘要：目的 建立罗平小黄姜6-姜辣素的含量测定方法。方法 高效液相色谱法，色谱柱ZORBAX-SB-C18（规格：4.6*150 5-Micron）;流动相为乙腈：水=45：55溶液;流速为1.0 mL·min-1;进样量：10 μL;柱温：35℃;检测波长280 nm。结果 标准曲线回归方程Y=0.55535 X-7.15104（R =0.99999）进样量在107～8025 ng范围内，线性关系良好。准确度试验RSD为3.8%（n=9），平均回收率为97.7%，精密度试验RSD为0.18%，重复性试验RSD为2.9%。结论 本实验方法稳定可靠、简便可行、具有较好的重现性，为罗平小黄姜的质量评价提供了依据。

关键词：罗平小黄姜、6-姜辣素、高效液相色谱法、含量测定

中图分类号：R927.2   文献标志码：A   文章编号：1007-2349（2019）09-0065-03

【Abstract】Objective：To establish a method for the determination of 6-gingerin in Luoping Small Yellow Ginger. Methods：High performance liquid chromatography was used. Column was ZORBAX-SB-C18（specification：4.6*150 5-Micron），mobile phase was acetonitrile，water was 45：55 solution，flow rate was 1.0 mL·min-1，injection volume was 10 μL，column temperature was 35℃ and detection wavelength was 280 nm. Results：The standard curve regression equation was Y=0.55535 X-7.15104（R=0.99999）injection volume in the range of 107 to 8025 ng，and the linear relationship is good. The accuracy test RSD was 3.8%（n=9），the average recovery was 97.7%，the precision test RSD was 0.18%，and the repeatability test RSD was 2.9%. Conclusion：This method is stable，reliable，simple and feasible，and has good reproducibility and can provide a basis for the quality evaluation of Luoping small yellow ginger.

【Key words】Luoping small yellow ginger，6-gingerol，HPLC，content determination

罗平小黄姜为姜科（Zingiberaceae）姜属（Zingiber Boehm）植物姜（Zingiber officinale Rosc）的块茎，干姜：本品为姜科植物姜的新鲜根茎[1]。秋、冬二季采挖，除去须根和泥沙。生姜：本品为姜科植物姜的干燥根茎，冬季采挖除去须根和泥沙，晒干或低温干燥。趁鲜切片晒干或低温干燥者称为 “干姜片”[2]。秋冬季挖取姜的根茎，洗净，刮取外层栓皮，晒干。主要栽培于云南省曲靖市罗平县。根茎供药用，“干姜”主治心腹冷痛，吐泻，肢冷脉微，寒饮喘咳，风寒湿痹[3-5]。“生姜”主治感冒风寒，呕吐，痰饮，喘咳，胀满;解半夏、天南星及鱼蟹、鸟兽肉毒[6-7]。又可作烹调配料或制成酱菜、糖姜。茎、叶、根茎均可提取芳香油，用于食品、饮料及化妆品香料中[8]。6-姜辣素为罗平小黄姜中主要的指标成份。本实验以6-姜辣素含量为指标，采用高效液相法测定罗平小黄姜中6-姜辣素的含量。本实验旨在为罗平小黄姜质量评价提供依据。

罗平小黄姜样品由云南现代民族药工程技术研究中心总工程师郭毅新鉴定，标本存放于云南现代民族药工程技术研究中心标本室，标本号：CDYN-HS-00111。

1 仪器与材料

仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪，电子天平（赛多利斯 SI-224，d=0.1 mg），超声波清洗器（天津恒奥科技 HU-15-005），甲醇 GR（上海星可）批号：1866507 650，乙腈 GR（默克）批号：10885130 717，6-姜辣素对照品，购于上海安谱实验科技股份有限公司，批号：H5730010，标示含量：98.2%，水（纯净水）;小黄姜（干姜），购于云南罗平（2017年12月10日采购）。

2 方法与结果

2.1 测定条件 Agilent 1260检测器高效液相色谱仪，色谱柱：ZORBAX-SB-C18（规格：4.6*150 5-Micron），检测波长：280nm，柱温：35℃，流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL，检测波长280 nm，分析時间：15 min，流动相：（乙腈：水=45：55）。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备溶液配制：精密称取6-姜酚对照品0.0107 g，于10 mL容量瓶中，用流动相溶液稀释至刻度，摇匀即得。（浓度：1.07 mg/mL）

2.2.2 对照品上机溶液配制 量取对照品储备溶液 1mL至10 mL容量瓶中，用流动相溶液稀释至刻度，摇匀即得。（浓度：0.107 mg/mL）

2.2.3 对照品加标溶液的配制 精密称取6-姜辣素对照品0.0216 g，于5 mL容量瓶中，用流动相溶液稀释至刻度，摇匀即得。（浓度：4.32 mg/mL。）

2.2.4 样品溶液的制备 称取过2号筛的试样约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇20 mL，称定重量，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得。

3 方法学考察

3.1 线性关系与线性范围考察 取配置好的对照品溶液，分别进样1 μL、5 μL、10 μL、25 μL、50 μL、75 μL。以峰面积为纵坐标、进样（ng）量为横坐标，得到标准曲线回归方程Y=0.55535X-7.15104（r=0.9999），进样量107～8025ng范围内，线性关系良好。结果见表1.

3.2 精密度试验 取对照品上机溶液连续进样6针，记录峰面積，结果见表2。

3.3 重复性试验 参照样品溶液的配制方法，制备8份样品溶液，分别依次进样10 μL。记录6-姜辣素的保留时间和相应的峰面积，并计算6-姜辣素的含量，结果见表3

3.4 稳定性试验 参照样品溶液的配制方法，制备2份样品溶液，每隔2 h、6 h、8 h、24 h分别依次进样10 μL。记录6-姜辣素的保留时间和相应的峰面积，结果见表4。

3.5 准确度试验 全程加标，加标量分别为所测样品含量的50%、100%、150%（每个梯度3次平行），参照样品溶液的配制，样品含量为0.76%，结果见表5。

3.6 专属性试验 参照对照品溶液、供试品溶液的配制方法，配制对照品溶液、供试品溶液各1份，用配制对照品的溶剂作为溶剂空白溶液，分别进样，在对照品主要成分保留时间左右的位置，空白溶液相对应的时间应无杂质干扰峰。

4 系统适应性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-甲醇-水（45：55）为流动相;检测波长为280nm。理论板数按6-姜辣素峰计算应不低于5000。本品按干燥品计算，含6-姜辣素不得少于0.30%。

5.讨论

本研究建立了罗平小黄姜6-姜辣素的含量测定方法，对线性范围、精密度、准确度等各方面进行考察，发现该方法专属性好、实用性强，结果稳定可靠。

参考文献：

[1]卢传坚.姜的化学成分分析研究概述[J].中药新药与临床药理，2003（3）：215-217.

[2]杨建，王兆进，李海伟，等.不同干燥方法对生姜6-姜酚含量的影响[J].中国食品添加剂，2012（6）：111-114.

[3]营大礼.干姜化学成分及药理作用的研究[J].中国药房，2008，19（18）：1435-1436.

[4]王啸.生姜活性部位与成分研究进展[J].中医研究，2009，22（2）：53-55.

[5]孙永全.生姜药理作用研究进展[J].现代中西医结合杂志，2007，16（4）：561-566.

[6]黄雪松.姜酚测定方法研究[J].中 国 调 味 品，2002，（2）：31-35.

[7]张雪红，刘红星.姜酚的研究进展[J].广西师范学院学报：自然科学版，2009，26（1）：110-113.

[8]黄雪松，晏日安，吴建中.姜酚的生物活性述评[J].暨南大学学报：自然科学版，2005，26（3）：434-439.

（收稿日期：2019-07-11）