胃癌组织中神经纤连蛋白2过表达临床意义的Meta分析

张玲玲 曹辉 许钟 黄立敏 杨赟翰 白班俊△

(1.贵州大学医学院贵州省人民医院消化内科，贵阳 550002；2.贵州大学医学院贵州省人民医院肿瘤科，贵阳 550002)

胃癌在我国发病率占恶性肿瘤第二位，病死率占第三位[1]。侵袭转移是导致恶性肿瘤包括胃癌患者死亡的主要原因，淋巴结转移是胃癌最主要的转移途径之一。神经纤毛蛋白2(Neuropilin2，NRP2)为跨膜糖蛋白，在胚胎脉管发育中具有重要作用，尤其与淋巴管的发生密切相关[2]，可能与肿瘤的淋巴结转移相关[3-4]。作为血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)受体的NRP2，可能通过调控肿瘤淋巴管的生成和淋巴结的转移，从而促进癌细胞的迁移和侵袭[4]。研究[5]表明，NRP2在VEGF-C的刺激下可促进胃腺癌的淋巴浸润。与癌旁组织相比，NRP2的mRNA和蛋白水平在胃癌组织中均可有异常表达。为了进一步明确NRP2蛋白表达与胃癌临床病理特征之间的关系，我们采用循证医学方法进行分析，从而为NRP2蛋白在胃癌组织中表达的意义提供结论。

1 资料与方法

1.1文献入选标准 纳入标准(1)研究对象：为临床胃癌病例，纳入人群无年龄、性别、种族和国籍的限制；(2)诊断依据：经临床、病理学及影像学等诊断胃癌，有明确的病理学诊断；(3)检测方法：采用免疫组织化学方法检测胃癌组织中NRP2蛋白的表达情况；(4)数据报告：文献中报道了NRP2蛋白在不同临床病理因素中表达情况的研究数据。排除标准(1)文献中无可用于分析计算的数据；(2)综述、meta分析、个案、会议摘要、基础动物研究等。此外，对重复发表或者雷同的研究，选择近期或样本量大、数据报告更完整的文献。

1.2文献检索策略 分别检索CNKI、万方、重庆维普等中文文献数据库和科学引文数据库(Web of Science)、PubMed 等英文文献数据库。其中，中文检索式在CNKI中使用：(神经纤毛蛋白 or 神经菌毛素 or 神经菌毛蛋白 or Neuropilin or NRP) and(胃癌 or 胃腺癌 or 胃肿瘤)，在万方和维普数据库中使用以上关键词，根据数据库检索界面风格调整；英文检索式：(gastric OR stomach)and(cancer or carcinoma or neoplasm or tumor)and(Neuropilin*or NRP*)，在PubMed中限定 human。检索时间均截止到2019年2月。

1.3质量评价和数据提取 由两名评价者分别提取数据，采用非随机对照研究Newcastle-Ottawa Scale，NOS)量表[6]进行方法学质量评价，评价因素包括：选择、可比性、暴露。具体包括：(1)病例确定是否充分；(2)病例的代表性；(3)对照的选择；(4)对照的确定；(5)可比性A；(6)可比性B；(7)暴露因素的确定；(8)病例和对照的暴露是否采用了相同的确定方法；(9)无应答率。核对时若有不同意见经讨论仍不能解决时请第三位研究人员共同评价。NOS量表总分9分，≥6分为高质量文献。提取数据内容包括研究的一般信息、NRP2蛋白表达与临床病理因素的相关数据。

1.4统计学方法 应用统计学软件Stata进行meta分析相关的统计学分析及绘图。NRP2蛋白表达与胃癌临床病理特征之间关系的评估使用比值比(OR)及95%可信区间(95%CI)作为系统评价的指标。主要统计学分析步骤包括：(1)异质性检验采用Q检验[7]和I2检验[8]。(2)合并效应量如果异质性检验结果提示各项研究间无异质性时，采用固定效应模型计算，若组间存在异质性则用随机效应模型合并。(3)绘制森林图。(4)评估发表性偏倚用Begg’s漏斗图[9]和 Egger’s 回归方法[10]检验文献是否存在发表偏倚(P<0.05时判断为存在发表偏倚)。

2 结 果

2.1纳入文献及质量评价 应用在线文献数据库共检索到550篇相关文献，去重后为463篇。经筛查共8篇文献纳入本研究[5，11-17]，共包括702例患者，研究对象均为中国胃癌患者。纳入研究的基本信息及质量评分见表1。纳入8项研究质量评分均在6分以上，为高质量文献。

表1 纳入研究的基本特征及质量评价

2.2meta分析结果

2.2.1性别 纳入8项研究均对NRP2蛋白在不同性别中的表达情况进行了比较，异质性检验示P=0.334、I2=12.4%，采用固定效应模型合并数据，结果显示，胃癌组织中男性患者与女性患者之间NRP2蛋白表达无统计学差异[OR=0.997，95%CI(0.718，1.384)，P=0.986]。

2.2.2年龄 纳入文献中，共有5项研究[5，11-12，14，16]以60岁(<60 VS ≥60)为标准将胃癌分为两组进行比较，组间无异质性(P=0.408、I2=0.0%)，采用固定效应模型合并数据，结果显示，不同年龄段之间NRP2蛋白表达无统计学差异[OR=0.802，95%CI(0.531，1.212)，P=0.295]。

2.2.3分期 纳入文献中共有3项研究[11-12，15]比较了早期和进展期胃癌，组间存在异质性(P=0.039、I2=69.2%)，采用随机效应模型合并数据，结果显示NRP2蛋白在两组间无统计学差异[OR=0.625，95%CI(0.141，2.764)，P=0.536]。

2.2.4肿瘤大小 纳入文献中共有7项研究[5，11-16]以肿瘤大小5cm为界比较了不同大小胃癌中的差别，组间存在异质性(P=0.000、I2=81.0%)，采用随机效应模型合并数据，结果显示NRP2蛋白在两组间无统计学差异[OR=0.750，95%CI(0.267，2.103)，P= 0.584]。

2.2.5TNM分期 纳入文献中，共有6项[5，11-13，15-16]涉及TNM分期的比较，异质性检验示P=0.001、I2=75.1%，采用随机效应模型合并数据，见图1，结果显示，胃癌组织中NRP2蛋白表达在Ⅰ～Ⅱ组患者中低于Ⅲ～Ⅳ组患者[OR=0.250，95%CI(0.095，0.655)，P=0.005]。

图1 胃癌组织中NRP2蛋白在不同TNM分期中表达的meta分析(Ⅰ～Ⅱ组 VS Ⅲ～Ⅳ组)

2.2.6组织学分型 纳入文献中，共有5项研究[5，11-12，15，17]有关于分化与未分化胃癌的比较，异质性检验示P=0.000、I2=87.9%，采用随机效应模型合并数据，结果显示，胃癌组织中NRP2蛋白表达情况与分化程度无关[OR=0.898，95%CI(0.284，2.841)，P=0.855]。

2.2.7淋巴结转移 纳入8项研究均对是否存在淋巴结转移进行了比较，异质性检验示P= 0.051、I2=50.1%，采用随机效应模型合并数据，结果(图2)显示，胃癌组织中NRP2蛋白表达在无淋巴结转移组患者中低于有淋巴结转移组患者[OR=0.278，95%CI(0.152，0.509)，P=0.000]。

图2 胃癌组织中NRP2蛋白在有无淋巴结转移组表达的meta分析

2.2.8远处转移 纳入文献中共2项研究[5，13]对是否存在远处转移进行了比较，组间无异质性(P=0.188、I2=42.3%)采用固定效应模型分析，结果显示，有转移组和无转移组两组间无统计学差异[OR=0.575，95%CI(0.200，1.650)，P=0.304]。

2.3发表偏倚 结果显示，Begg秩相关检验P=0.174，Egger线性回归P=0.127，统计学上未发现发表偏倚(图3～图4)。

图3Begg′s发表偏倚图图4Egger′s发表偏倚图

3 讨 论

NRP2作为VEGF受体家族成员之一，表达于静脉和淋巴管内皮细胞，在生长发育中参与淋巴管新生的调节。研究发现，NRP2在多种肿瘤组织中异常表达，参与肿瘤淋巴管生成，与肿瘤淋巴转移密切相关，并可通过自噬等机制参与肿瘤的化疗抵抗[4，18]。基于以上因素，在NRP2与胃癌相关的研究上，相关报道不仅在探索NRP2参与胃癌发生发展的可能分子机制，也尝试将其作为诊断分子及治疗靶点的可能[19]。

为了更全面认识NRP2在胃癌组织中的表达情况及意义，本研究检索了胃癌中NRP2相关的研究报道，筛查出应用免疫组织化学方法检测胃癌中NRP2表达的公开发表文献。通过meta分析，进行数据处理，共有8项研究包括702例胃癌患者纳入分析。结果显示胃癌组织中NRP2蛋白过表达，在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的患者中显著高于Ⅰ～Ⅱ的患者，在有淋巴结转移的患者中显著高于无淋巴结转移者。从现有的报道综合分析来看，胃癌中NRP2蛋白过表达与性别、年龄、临床分期、肿瘤大小、分化程度以及有无远处转移等无关。

需要注意的是，在临床分期、TNM分期、肿瘤大小、分化程度以及有无淋巴结转移等相关特征的比较中，组间存在异质性。这可能与纳入文献等不足有关，包括：(1)所有纳入研究的对象均为中国患者；(2)目前相关研究较少，纳入文献数量有限，样本量也有限，研究报道的数据侧重点也不尽一致，如8项研究中，6项提供了可用于分析的TNM分期相关数据，5项提供了组织学分型相关的数据，仅3项有早期和进展期胃癌临床分期相关的数据；(3)在检测方法上，虽然均采用免疫组织化学，但不同的研究组、不同的操作者，在抗体来源、具体实验步骤如稀释浓度、结果判断标准等因素上，不可避免的存在差异。

综上所述，胃癌中NRP2蛋白过表达与TNM分期和有无淋巴结转移等有关，在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴结转移的患者中具有更高的阳性率，检测胃癌组织中NRP2蛋白的表达情况有助于判断胃癌患者有无淋巴结转移。