HBV感染者血清RBP4的表达及临床意义

何邵波 ,何跃华,伍美兰

(邵阳学院 1.医学检验学院；2.医学院；3.附属第二医院，湖南 邵阳，422000)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是引起乙型肝炎的病原体。据国内外研究统计报道，全球约有1/3的人群曾经感染过HBV。该病毒干扰肝功能并造成病理损害，少部分感染者无法消灭该病毒从而成为慢性感染者[1]。慢性HBV感染表现多样，可以为携带者或慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)，也可以进展为肝硬化，甚至是肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)。据有关研究报道，我国目前大约有CHB患者2 000万例[2-3]。晚期肝硬化和肝癌常常是CHB患者致死的原因，但目前尚缺乏经济实惠、有效地反映肝衰竭预后的特异指标。视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4，RBP4)主要由肝细胞和脂肪细胞分泌，在协助视黄醇发挥生理功能中起着不可替代的作用[4-5]。已经有研究表明，血清RBP4水平升高与非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)和肝脏脂肪积累增加之间存在一定的关系[6]，因此RBP4与肝病的关系越来越受到人们的关注。但目前有关RBP4与HBV感染引起肝损伤的报道较少。本研究旨在探讨HBV感染者血清RBP4水平与不同类型肝脏疾病间的关系及与血清ALT、TBIL的相关性，以期为临床HBV感染的早期诊断、治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取邵阳学院附属第二医院2017年1月～2018年1月感染科确诊的乙型肝炎肝硬化患者(LC)18例，其中男10例，女8例，平均年龄(45.30±3.5)岁；重型肝炎肝衰竭患者(LF)15例，其中男9例，女6例，平均年龄(42.19±4.2)岁；CHB患者25例，其中男17例，女8例，平均年龄(36.91±6.3)岁；并抽取邵阳学院附属第二医院健康体检者(Con)20例作为对照组，其中男13例，女7例，平均(34.59±4.4)岁。CHB、LC 诊断标准依据中华医学会慢性乙型肝炎防治指南[7]，LF诊断标准依据中华医学会肝衰竭诊疗指南[8]，Con组入选标准：排除肝疾病、肾疾病、糖尿病、胰岛素抵抗等相关性疾病，近2个月未服用任何药物者。且这些研究组之间在体质量指数(BMI)比较差异无统计学意义。本研究采取的方法及过程均经医院伦理委员会的审批及同意。

1.2 仪器试剂

RBP4 ELISA试剂盒购自上海高创化学科技有限公司；多功能酶标仪(美国 Thermo Scientific 公司)；全自动生化分析仪(日立7600-020ISE)；HBV-DNA定量检测试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司。

1.3 血清样本收集

静脉采集空腹受试者血标本6 mL，以3 000 r/min离心10 min，分离出全部血清，部分血清分装置于-30 ℃冰箱中备检RBP4及HBV-DNA载量。剩余血清置于普通试管，采用日立7600-020ISE全自动生化分析仪检测血清谷氨酸氨基转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)及其他生化指标。

1.4 RBP4测定

采用RBP4 ELISA试剂盒，严格按照试剂盒中试剂操作说明书操作。酶标仪的检测波长450 nm，并通过标准曲线计算各样本浓度。

1.5 RT-PCR检测血清HBV-DNA载量

将收集的患者血清按照HBV-DNA定量检测试剂盒说明书制备检测样本，并通过荧光定量PCR扩增仪进行检测，最后计算血清中HBV-DNA载量。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 HBV感染者血清RBP4的表达水平

结果显示，LC、LF以及CHB组患者血清RBP4含量显著低于正常对照组(P<0.05)，LF组患者血清RBP4含量显著低于CHB组(P<0.05)。详见表1。

表1 各组HBV感染者血清RBP4水平比较Table 1 Serum RBP4 levels in groups patients with HBV infection

注：与Con组相比，*P<0.05；与CHB组相比，#P<0.05

2.2 HBV感染者血清RBP4与血清HBV-DNA载量的相关性

LC组患者血清RBP4含量与HBV-DNA载量呈负相关，差异有统计学意义(P<0.05)。而LF、CHB组患者血清RBP4含量与HBV-DNA载量也呈一定的负相关关系，但差异无统计学意义(P>0.05)。详见图1。

2.3 HBV感染者ALT、TBIL水平

结果显示，LC、LF以及CHB组患者血清ALT、TBIL含量显著高于正常对照组(P<0.05)。详见表2。

图1 HBV感染患者体内RBP4与血清HBV-DNA载量的相关性Fig.1 Correlation between serum HBV-DNA load and RBP4 in patients with HBV infection

表2 各组HBV感染者血清ALT、TBIL水平比较Table 2 Serum ALT、TBIL levels in groups patients with HBV infection

注：与Con组相比，*P<0.01

2.4 HBV感染者ALT、TBIL与RBP4水平的相关性

LC、LF组患者血清RBP4含量与ALT、TBIL存在负相关关系，且差异有统计学意义(P<0.05)。CHB组患者血清RBP4含量与ALT、TBIL的相关性比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见图2。

3 讨论

RBP4属于视黄醇结合蛋白(RBP)家族中的分泌型RBP，主要由肝细胞和脂肪细胞分泌，因此，RBP4与肝病的关系备受人们的关注[4]。同时RBP4作为一种循环性脂肪细胞因子，在胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)状态下，RBP4的表达会显著高于正常水平。RBP4诱导细胞炎症因子表达增高，可引起NAFLD的发生发展，因此，血清RBP4水平升高与NAFLD和肝脏脂肪积累增加之间存在一定的关系[6]。

图2 HBV感染患者ALT、TBIL与RBP4水平的相关性Fig.2 Correlation between ALT,TBIL and RBP4 levels in HBV infected patients

有研究证实，慢性肝炎患者血清RBP4偏低，急性肝炎患者血清RBP4水平会显著降低，提示RBP4可能间接反应肝的损伤程度[9]。本研究结果发现LC、LF及CHB组患者血清RBP4含量显著低于正常Con组(P<0.05)，提示RBP4可能参与了HBV感染引起肝损伤，导致肝脏生物合成RBP4的能力降低。LF组患者血清RBP4含量显著低于CHB组(P<0.05)，则表示RBP4可能反映了肝损伤的程度。

有研究表明，HCC患者血清中RBP4 mRNA的表达低于非癌性肝炎患者，血清RBP4 mRNA与血液HBV-DNA载量相关性较差，因为RBP4主要在肝脏组织中受修饰或转录后调控[10]。本研究发现LC、LF、CHB组患者血清RBP4含量与HBV-DNA载量均存在一定的负相关关系，进一步证实了RBP4可以反映HBV的感染程度。

ALT是临床常用的转氨酶之一，广泛存在于肝脏，其次为肾脏、心肌、骨骼肌等多种组织器官中[11]。肝中ALT绝大多数存在于细胞质中，只有少量在线粒体中，其细胞内浓度远高于血清1 000～3 000倍。因此，只要有1%的肝细胞坏死，血清ALT就可增高1倍，故ALT是反映肝功能损害最敏感的指标之一。本研究中LC、LF以及CHB组患者血清ALT分别高达(167.80±98.22)、(249.28±102.89)、(119.24±101.42) μ/L，均显著高于对照组(P<0.01)，结果与相关报道相符[12]。

TBIL是血清中结合胆红素和未结合胆红素的总和。胆红素的代谢主要在肝脏进行，TBIL水平可反映肝细胞对胆红素的摄取、结合和排泄功能等[13]。本研究通过检测LC、LF以及CHB组患者血清TBIL，分别为(79.56±41.24)、(113.87±101.56)、(56.12±22.98) μmol/L，明显高于对照组(P<0.01)，提示肝脏代谢功能受损，与刘睿等结果[13]报道相符。

本研究发现LC、LF组患者血清RBP4含量与ALT、TBIL存在负相关关系，其r值分别为-0.514、-0.694、-0.437、-0.577，且差异有统计学意义(P<0.05)，提示RBP4可能参与了CHB肝硬化及重型肝炎肝衰竭的发生过程。类似的研究也表明急、慢性肝炎患者体内RBP4含量均会显著降低[9]。

本研究表明，HBV感染者血清RBP4水平可反映HBV的感染程度及肝损伤的程度，并证实血清RBP4水平与ALT、TBIL存在一定的相关性。因此，监测HBV感染者血清RBP4水平对于及时诊断治疗HBV感染具有一定的临床意义。