血清微小RNA-302b在老年急性心肌梗死患者中的诊断价值

急性心肌梗死(AMI)发病急骤，病情进展迅速，致死率较高[1]。微小RNA(miRNA)对心肌细胞功能具有调节作用，有望成为诊断AMI的生物标志物[2]。近年来研究发现，miR-302b与心血管疾病关系密切，参与心肌损伤的发生发展，并起着重要的基因调控作用[3]。本研究通过检测老年AMI患者血清miR-302b的表达水平，分析其对AMI的诊断价值，旨在为老年AMI早期诊断提供参考依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2015年1月至2018年10月儋州市中医医院收治的老年AMI患者125例作为AMI组，其中男性79例，女性46例，年龄65～84岁，平均年龄(72.50±6.92)岁。纳入标准：(1)符合WHO心肌梗死诊断和治疗指南制定的标准[4]；(2)年龄≥65岁，且在发病12 h内采集血样。排除标准：(1)有陈旧性心肌梗死、慢性心力衰竭及心功能不全病史；(2)急性心肌炎，近期有脑血管事件；(3)肺源性心脏病、慢性阻塞性肺疾病、严重肝肾功能不全及自身免疫性疾病；(4)重度感染；(5)恶性肿瘤；(6)重大外伤及手术。另选取同期健康体检者56例作为对照组，其中男性36例，女性20例，年龄65～78岁，平均年龄(71.30±6.82)岁。本研究经医院伦理委员会批准，并与所有研究对象签署知情同意书。

1.2 观测指标

所有研究对象均空腹抽取静脉血5 mL，置于无抗凝剂的离心管中，离心分离血清，-80 ℃低温冰箱保存待测。应用TaqMan MicroRNA Reverse Transcription试剂盒逆转录已定量的RNA，选用 U6 作为内参，反应体系为 15 μL，反应参数为：16 ℃ 30 min；42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。在ABI 7500型荧光定量PCR仪(美国ABI公司)上进行实时聚合酶链反应(RT-PCR)。采用TaqMan MicroRNA Assay试剂盒，反应体系为20 μL：TaqMan MicroRNA Assay 1.00 μL，cDNA 1.33 μL，TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00 μL，ddH2O 7.67 μL，混合后离心放入定量 PCR仪。扩增条件为：95 ℃预热10 min，95 ℃变性15 s，60 ℃退火60 s，45个循环，最后38 ℃延伸5 s，实验重复3次。以U6为内参照，采用2-△△Ct法计算miRNA的相对表达水平，其中△Ct=Ct目的基因-CtU6。

心肌肌钙蛋白I(cTnI)采用贝克曼DXI800型全自动免疫分析仪通过化学发光法检测；总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平检测采用贝克曼AU5800型全自动生化分析仪及配套试剂，操作严格按照仪器及试剂说明书进行。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验。计数资料以百分率(%)表示，组间比较采用卡方检验。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析miR-302b、cTnI及CK-MB对老年AMI诊断的价值，曲线下面积(AUC)的比较采用Z检验。相关性分析采用Pearson相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AMI组和对照组临床一般资料比较

AMI组与对照组的性别、年龄、体质量指数、收缩压、舒张压、吸烟史、高血压史、糖尿病史、高脂血症、TC、TG、LDL-C及HDL-C的差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2 AMI组和对照组血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平比较

AMI组血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平均明显高于对照组(P均<0.01)。见表2。

表1 AMI组与对照组临床一般资料比较

表2 AMI组与对照组血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平比较

2.3 miR-302b、cTnI、CK-MB诊断老年AMI的价值

miR-302b、cTnI及CK-MB诊断AMI的临界值分别为2.68、1.50 ng/mL、60.74 U/L。3项联合诊断老年AMI的AUC为0.932(95%CI：0.870～0.981)，明显高于单项miR-302b(AUC=0.873，95%CI：0.811～0.930)、cTnI(AUC=0.887，95%CI：0.826～0.950)或CK-MB(AUC=0.718，95%CI：0.661～0.776)，差异有统计学意义(Z=4.862、4.537、7.250，P均<0.05)，其敏感度和特异度分别为94.5%和89.0%。miR-302b及cTnI诊断老年AMI的AUC相当，而且均明显高于CK-MB，差异有统计学意义(Z=5.617、5.912，P均<0.05)。见表3、图1。

表3 miR-302b、cTnI、CK-MB诊断老年AMI的价值

图1 miR-302b、cTnI、CK-MB诊断老年AMI的ROC曲线

2.4 血清miR-302b表达水平与cTnI、CK-MB的相关性分析

Pearson相关分析显示，老年AMI患者血清miR-302b表达水平与cTnI(r=0.817)、CK-MB(r=0.726)均呈正相关(P均<0.01)。

3 讨论

AMI是老年人常见的急危重症，目前cTnI、CK-MB等传统心肌损伤标志物在AMI的诊疗中发挥着重要作用，但这些标志物诊断老年AMI的敏感度和特异度不高[5]。Eggers等[6]研究证实，cTnI在多种疾病治疗过程中可明显升高，在AMI早期诊断中存在一定缺陷。因此，有必要研究新型心肌损伤标志物，以期为AMI的早期诊断、早期治疗提供有利的佐证。miRNA是可在转录水平调控基因表达的小分子非编码RNA，参与心肌和血管平滑肌细胞的信号转导，并与心肌梗死、心律失常、心肌病和血管增生等疾病的病理生理有关[7]。近期研究表明，miRNA在细胞增殖、分化、发育及死亡过程中发挥重要作用，有可能成为诊断心肌病变的新型生物标志物，这也为研究AMI发生机制提供了新的思路[8]。cTnI是心肌特有的结构蛋白，对心肌损伤有高度敏感性和特异性，是欧洲和美国指南中诊断AMI的首选生物标志物。当AMI患者的心肌发生坏死时，cTnI才会释放到血液中，而miRNA可以稳定存在于血液中，且比cTnI更早释放入血液。CK-MB是一种与心肌梗死密切相关的酶类，也是临床上诊断AMI的常用指标，但其预测早期AMI的效能欠佳[9]。

本研究结果显示，AMI组血清miR-302b、cTnI及CK-MB水平均明显高于对照组，提示血清miR-302b在老年AMI患者中高表达，可能参与AMI的发生发展。陈劲松等[10]对73例AMI患者、49例不稳定性心绞痛患者和29名健康老人血清miRNA进行分析，结果显示老年AMI患者miRNA的表达水平明显升高，高表达miRNA可能与心肌损伤或坏死有关。Guo等[11]研究发现，AMI患者外周血中的miRNA表达水平显著升高，与cTnI、CK-MB均呈正相关，而且miRNA达峰时间早于cTnI及CK-MB，可作为AMI早期诊断的生物标志物。本研究应用ROC曲线分析，结果显示miR-302b及cTnI诊断老年AMI的AUC相当，而且均明显高于CK-MB，3项联合诊断老年AMI的AUC(0.932，95%CI：0.870～0.981)最大，其敏感度和特异度分别为94.5%和89.0%，提示miR-302b与cTnI和CK-MB 联合检测有助于提高老年AMI诊断的准确性。相关性分析也显示，老年AMI患者血清miR-302b表达水平与cTnI、CK-MB均呈正相关。Yang等[12]的研究也表明，血清miR-302b是诊断AMI的新型生物标志物，在未来有广阔的应用前景。

综上所述，血清miR-302b在老年AMI患者中明显升高，其诊断老年AMI的效能与cTnI相当，可作为诊断老年AMI的生物标志物。miR-302b与cTnI、CK-MB联合检测有助于提高老年AMI诊断的敏感度和特异度，但目前缺乏大样本临床随访研究支持，miRNA的分析技术与结果判断标准也不统一，还需进一步验证miR-302b的临床应用价值。